• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    馬氏珠母貝糖胺聚糖毒理學(xué)安全評價(jià)

    2013-03-07 08:28:25范秀萍吳紅棉葉慶俊胡雪瓊雷曉凌
    食品科學(xué) 2013年1期
    關(guān)鍵詞:顯著性小鼠劑量

    范秀萍,吳紅棉*,葉慶俊,鐘 敏,胡雪瓊,雷曉凌

    (廣東海洋大學(xué)食品科技學(xué)院,廣東 湛江 524006)

    馬氏珠母貝糖胺聚糖毒理學(xué)安全評價(jià)

    范秀萍,吳紅棉*,葉慶俊,鐘 敏,胡雪瓊,雷曉凌

    (廣東海洋大學(xué)食品科技學(xué)院,廣東 湛江 524006)

    目的:研究珠母貝糖胺聚糖作為保健食品使用的毒理學(xué)安全性。方法:利用大鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)、小鼠骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)、小鼠精子畸變實(shí)驗(yàn)、Ames實(shí)驗(yàn)和大鼠30d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行毒理學(xué)研究與評價(jià)。結(jié)果:急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明珠母貝糖胺聚糖對雌、雄大鼠急性經(jīng)口最大耐受量(MTD)均大于20.0g/kg,其劑量大于人體推薦量的300倍,說明受試物屬于無毒級物質(zhì)。小鼠骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)、小鼠精子畸變實(shí)驗(yàn)、Ames實(shí)驗(yàn)3項(xiàng)遺傳毒性實(shí)驗(yàn)的結(jié)果皆為陰性,未顯示出致突變性。30d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)表明,珠母貝糖胺聚糖高、中、低3個(gè)劑量組(分別為2.5、1.25、0.625g/kg)動物的身體、臟器的生長發(fā)育及血液生化指標(biāo)等均無明顯不良影響。結(jié)論:珠母貝糖胺聚糖具有較好的安全性,可作為保健食品使用。

    珠母貝糖胺聚糖;急性毒性;遺傳毒性; 30d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

    馬氏珠母貝(Pinctada martensii Dunder)是我國南海珠母貝的主要貝種,在廣東、廣西部分地區(qū)養(yǎng)殖量極大。珠母貝全臟器俗稱珍珠貝肉,價(jià)格低廉(約3~4元/kg),在珍珠養(yǎng)殖地區(qū)如廣東省的雷州市及徐聞縣、廣西壯族自治區(qū)的北海市及欽州市、海南省的部分地區(qū),當(dāng)?shù)刂檗r(nóng)及居民常以珠母貝全臟器用作食療食品,北部灣沿海有服用珍珠貝肉治療乙肝的傳統(tǒng)方法,也有食用珍珠貝肉湯以退發(fā)燒的,效果甚佳[1]。

    珠母貝糖胺聚糖(glycosaminoglycan from Pinctada martensii,CPG)是從馬氏珠母貝全臟器中分離提取出來的一種酸性多糖,糖胺聚糖含量為33%,結(jié)構(gòu)與硫酸軟骨素類似,具有顯著的免疫增強(qiáng)作用與抗腫瘤作用[2-4]。本研究依據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》[5]對其進(jìn)行毒理學(xué)安全性評價(jià),旨在為珠母貝糖胺聚糖用作保健食品及藥品提供科學(xué)的參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料、實(shí)驗(yàn)動物與菌株

    珠母貝糖胺聚糖,灰白色粉末,糖胺聚糖含量為33%,由本實(shí)驗(yàn)室提取制備。

    SPF級KM小鼠(合格證號:2007A006)、SPF級SD大鼠(合格證號:SCXK(粵)2007A015),均由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。實(shí)驗(yàn)動物室溫度:22~25℃,相對濕度:55%~70%。

    鼠傷寒沙門氏菌突變型菌株(Salmonella typhimurium) TA97、TA98、TA100和TA102,來源于華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院武漢環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所。

    1.2 試劑與儀器

    敵克松(DAPA)、2-乙酰氨基芴(2-AAF)、大鼠肝微粒體酶復(fù)合物(S9) 廣州市疾病預(yù)防控制中心;伊紅 廣州市中南化工有限公司;丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、總蛋白(TP)、尿素氮(BUN)、總膽固醇試劑(T-CHO)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、肌酐(Crea)、白蛋白(ALB)、葡萄糖(GLU) 上海復(fù)旦張江生物醫(yī)藥股份有限公司;血常規(guī)稀釋液(DH-640:050929)、血常規(guī)清洗液(DH-520:050817)、血常規(guī)溶血劑(DH-680:20050507) 日本光電公司。

    全自動血液生化分析儀 意大利Echo公司;MEK-7222K全自動血球計(jì)數(shù)儀 日本光電公司;TS-12N生物組織全自動脫水機(jī)、BM-VII生物組織包埋機(jī)及冷凍機(jī)、CS-VI攤片烤片機(jī)、RS-18生物組織全自動染色機(jī) 湖北孝感醫(yī)用儀器有限公司;RM2135輪轉(zhuǎn)切片機(jī) 德國Leica公司。

    1.3 方法

    1.3.1 急性毒性實(shí)驗(yàn)

    選取18~22g健康KM小鼠20只,雌雄各半。根據(jù)最大耐受劑量法,珠母貝糖胺聚糖粉末質(zhì)量濃度為0.25g/mL。灌胃前24h禁食,于次日分4次灌胃(每次灌胃量為20mL/kg),灌胃總量達(dá)20g/kg,連續(xù)觀察14d,記錄中毒癥狀及死亡情況。1.3.2 遺傳毒性實(shí)驗(yàn)

    1.3.2.1 Ames實(shí)驗(yàn)

    選用經(jīng)鑒定符合要求的鼠傷寒沙門氏組氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102共4株實(shí)驗(yàn)菌株,采用平板摻入法,分加與不加S9混合液兩種。受試物加熱滅菌后,共設(shè)4個(gè)劑量組,分別為每皿1.25、2.50、5.00、10.00mg/mL。同時(shí)設(shè)空白對照、陽性對照(DAPA、2-AAF),每組均做3個(gè)平行皿。在37℃條件下培養(yǎng)48h,計(jì)數(shù)每皿回變菌落數(shù),重復(fù)實(shí)驗(yàn)1次,求出每組平均菌落數(shù)。當(dāng)受試物回變菌落數(shù)超過自發(fā)回變的2倍以上并有劑量-反應(yīng)關(guān)系時(shí)即可判定為陽性。

    1.3.2.2 小鼠精子畸形實(shí)驗(yàn)

    SPF級KM小鼠(25~30g)50只,隨機(jī)分為5組。對照組給予相同體積蒸餾水;陽性對照組為環(huán)磷酰胺(CY,50mg/kg);CPG高、中、低劑量組分別為2.5、1.25、0.625g/kg(為人可能攝入量的100、50、25倍)。各組均按20mL/kg經(jīng)口灌胃,每日1次,連續(xù)5d。首次給藥35d后頸椎脫臼法處死小鼠,制備精子標(biāo)本, 1%伊紅染色。高倍鏡下觀察,每只動物計(jì)數(shù)1000個(gè)精子,記錄畸形精子數(shù),計(jì)算精子畸變率()。

    1.3.2.3 小鼠骨髓紅細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)

    SPF級KM小鼠(25~30g)50只,隨機(jī)分為5組。對照組給予相同體積蒸餾水;陽性對照組為環(huán)磷酰胺(50mg/kg);CPG高、中、低劑量組分別為2.5、1.25、0.625g/kg。采用2次經(jīng)口給受試物,中間間隔24h,于第2次給受試物6h后處死動物,取一側(cè)股骨制備骨髓涂片。Gimsa染色后鏡檢計(jì)數(shù)嗜多染紅細(xì)胞中的微核發(fā)生率()。

    1.3.3 大鼠30d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

    選取SPF級SD大鼠(100~130g)88只,雌雄各半,隨機(jī)分為4組,每組22只。對照組給予蒸餾水,CPG高、中、低劑量組分別為2.5、1.25、0.625g/kg,各組均按10mL/kg經(jīng)口灌胃,每日定時(shí)灌胃1次,連續(xù)30d。動物自由進(jìn)食和飲水,每天觀察并記錄動物的一般表現(xiàn),每周稱體質(zhì)量及進(jìn)食量,最后計(jì)算食物利用率。

    實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),摘眼球取血,用全自動生化分析儀測定血清生化指標(biāo)。用全自動血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定血液學(xué)指標(biāo)。然后將實(shí)驗(yàn)動物脫頸椎處死,進(jìn)行大體解剖,觀察有無異常,取肝、腎、脾、睪丸(卵巢)用福爾馬林固定,進(jìn)行組織病理學(xué)檢查[5-6]。

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    2 結(jié)果與分析

    2.1 急性毒性實(shí)驗(yàn)

    在14d的觀察期內(nèi),動物的活動及體質(zhì)量增長正常,無一動物死亡;外觀、體征、行為活動、精神狀態(tài)、飲食、大小便等均未有異常改變;口、眼、鼻等處也無異常分泌物。經(jīng)解剖小鼠,肉眼觀察其心、肝、脾、肺、腎、腸等臟器,與正常小鼠比較,皆未發(fā)現(xiàn)明顯病變和差異。表明該受試物對雌、雄小鼠經(jīng)口最大可耐受劑量(MTD)≥20g/kg。根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》附錄D急性毒性劑量分級表的規(guī)定,珠母貝CPG屬無毒級,可用于食品生產(chǎn)。

    2.2 遺傳毒性實(shí)驗(yàn)

    2.2.1 鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動物微粒體酶實(shí)驗(yàn)(Ames實(shí)驗(yàn))結(jié)果

    由表1可知,CPG 4個(gè)劑量組在添加活化系統(tǒng)(+S9)和未添加(—S9)的情況下,實(shí)驗(yàn)菌株TA97、TA98、TA100和TA102的回變菌落數(shù)與陰性對照組近似,無倍量關(guān)系,CPG組間無劑量-反應(yīng)關(guān)系;而陽性對照組的回變數(shù)明顯高于陰性對照組,且符合標(biāo)準(zhǔn)誘變劑的測試結(jié)果。因此,依據(jù)Ames實(shí)驗(yàn)的結(jié)果判定原則可知:陽性對照物致使鼠傷寒沙門氏菌的突變型發(fā)生回復(fù)突變;而CPG未顯示明顯的致突變性。且重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致,表明CPG沒有明顯的致突變性。

    2.2.2 小鼠精子畸形實(shí)驗(yàn)由表2可知,與對照組相比,CY組的畸變率有極顯著性升高(P<0.01);CPG劑量組中,0.625g/kg劑量組與對照組相比畸變率有顯著性降低(P<0.05);其他兩組無顯著性差異(P>0.05)。說明,CPG無致小鼠精子畸形作用。

    表 1 Ames實(shí)驗(yàn)結(jié)果(x±s,n=3)Table 1 Results of Ames test(x ±s,n=3)

    表 2 珠母貝CPG對小鼠精子畸形的影響(x±s,n=10)Table 2 Effect of CPG on mouse sperm abnormality (x±s,n=10)

    2.2.3 小鼠骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)

    表 3 珠母貝CPG對小鼠骨髓細(xì)胞微核的影響(±s,n=10)Table 3 Effect of CPG on micronucleus rate of mouse bone marrow polychromatic erythrocytes (±s,n=10)

    表 3 珠母貝CPG對小鼠骨髓細(xì)胞微核的影響(±s,n=10)Table 3 Effect of CPG on micronucleus rate of mouse bone marrow polychromatic erythrocytes (±s,n=10)

    性別組別劑量/(g/kg)微核率/PCE/RBC雄對照組0.7f1.01.12 CY組0.0522.4f2.8**0.91 CPG劑量組0.6251.3f1.51.13 1.251.1f1.11.11 2.50.5f0.81.11雌對照組0.3f0.51.10 CY組0.0525.7f2.2**0.87 CPG劑量組0.6251.0f0.91.12 1.250.7f0.51.15 2.50.5f0.51.13

    由表3可知,在兩性小鼠中CPG各劑量組的嗜多染紅細(xì)胞數(shù)/成熟紅細(xì)胞(PCE/RBC)與相應(yīng)對照組相比無顯著性差異;而且也未少于對照組的20%,表明CPG未對骨髓細(xì)胞分裂產(chǎn)生抑制。與對照組相比,兩性小鼠的CY組微核率均有極顯著性差異(P<0.01),表明發(fā)生了突變;兩性小鼠的CPG各劑量組微核率均無顯著性變化(P>0.05),且無劑量-反應(yīng)關(guān)系。結(jié)果表明,CPG對兩性小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞的微核發(fā)生率無影響。

    2.3 30d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

    2.3.1 一般狀況

    珠母貝CPG連續(xù)喂養(yǎng)30d,SD大鼠外觀體征無異常改變,行為活動正常;實(shí)驗(yàn)組和對照組動物毛色均有光澤且緊貼身體,口、眼、耳、鼻均無異常分泌物;呼吸規(guī)則,糞便成形無黏液,無稀爛。

    表 4 珠母貝CPG 30d喂養(yǎng)SD大鼠體質(zhì)量的影響(±s,n=11)Table 4 Effect of CPG on body weight of SD rats±s,n=11)

    表 4 珠母貝CPG 30d喂養(yǎng)SD大鼠體質(zhì)量的影響(±s,n=11)Table 4 Effect of CPG on body weight of SD rats±s,n=11)

    體質(zhì)量/g基礎(chǔ)值第1周第2周第3周第4周對照組125.5f8.5172.0f13.1244.5f17.4295.0f20.4337.9f23.3組別劑量/ (g/kg) 0.625125.6f7.8176.9f14.3244.1f16.7293.9f18.2336.8f20.1 1.25123.1f10.9168.9f10.9232.3f14.8282.5f15.6320.5f18.5 2.50126.3f9.5175.5f15.6240.7f23.6286.1f26.0328.9f29.4對照組114.2f8.7149.9f8.1199.2f11.8224.2f14.3237.5f16.7雄雌0.625113.1f7.1141.8f10.5191.2f8.6218.0f9.6233.3f11.5 1.25109.8f5.5145.7f7.3192.1f6.9215.3f13.8233.3f14.8 2.50111.0f7.1147.5f11.0190.2f13.2216.2f14.4237.4f16.6

    由表4可知,連續(xù)喂養(yǎng)30d,各劑量組大鼠體質(zhì)量呈正常增長,與對照組比較,無顯著性差異(P>0.05)。由表5、6可知,各劑量組攝食量及食物利用率、飲水量與對照組比較均未見明顯異常。

    表 5 珠母貝CPG 30d喂養(yǎng)對SD大鼠平均進(jìn)食量的影響(±s,n=24)Table 5 Effect of CPG on average daily feed intake of SD rats (±s,n=24)

    表 5 珠母貝CPG 30d喂養(yǎng)對SD大鼠平均進(jìn)食量的影響(±s,n=24)Table 5 Effect of CPG on average daily feed intake of SD rats (±s,n=24)

    組別劑量/ (g/kg)平均進(jìn)食量/g第1天第8天第15天第22天第28天對照組22.9f2.927.2f7.531.2f9.128.2f9.729.7f10.2 CPG劑量組0.62522.8f2.223.3f7.830.0f8.226.4f5.226.0f6.7 1.2519.9f1.621.8f0.826.7f5.825.4f2.326.4f6.0 2.5021.8f2.622.6f2.427.4f5.327.5f5.425.4f6.1

    表 6 珠母貝CPG 30d喂養(yǎng)對大鼠食物利用率的影響±s,n=11)Table 6 Effects of CPG on feed conversion ratio of male SD rats (±s,n=11)

    表 6 珠母貝CPG 30d喂養(yǎng)對大鼠食物利用率的影響±s,n=11)Table 6 Effects of CPG on feed conversion ratio of male SD rats (±s,n=11)

    食物利用率/(g/100g飼料)第1周第2周第3周第4周總利用率對照組27.2f8.436.4f9.024.0f5.217.6f3.526.3f7.8組別劑量/ ( g/kg) 0.62529.6f6.033.9f2.321.2f2.020.1f1.8*26.2f6.6 1.2531.2f6.138.2f3.424.4f2.719.6f3.828.3f8.1 2.5029.1f4.535.9f6.820.4f3.119.5f2.326.2f7.8對照組22.3f3.330.5f6.213.8f5.08.9f5.818.9f9.5雄雌0.62518.9f3.4*35.9f7.916.7f5.59.8f5.420.3f11.1 1.2526.8f3.9*30.8f3.915.2f6.510.8f5.320.9f9.5 2.5026.4f4.8*28.3f3.415.7f4.214.1f3.2*21.1f7.2

    從表6可知,珠母貝CPG連續(xù)30d喂養(yǎng)雄性大鼠,低劑量組動物在第4周的食物利用率與對照組比較,具有顯著性差異(P<0.05);對雌性大鼠,低劑量組、中劑量組和高劑量組動物在第1周的食物利用率與對照組比較,具有顯著性差異(P<0.05)。高劑量組動物在第4周的食物利用率與對照組比較,具有顯著性差異(P<0.05),其余各劑量組動物在各周的食物利用率與對照組比較,無顯著性差異(P>0.05)。低、中、高劑量組對雌雄小鼠在30d喂養(yǎng)期間的總食物利用率與對照組比較均無顯著性差異(P>0.05)。

    2.3.2 對大鼠血液血常規(guī)的影響

    從表7可知,珠母貝CPG連續(xù)30d喂養(yǎng)雄性大鼠,中劑量組和高劑量組動物血清中的血紅蛋白(HGB)與對照組比較,具有顯著性差異(P<0.05),但在正常范圍值內(nèi),無病理學(xué)意義(HGB:120~175g/L)。其余各劑量組動物血清中的紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白(HGB)、血小板(PLT)、白細(xì)胞(WBC)及分類與對照組比較,無顯著性差異(P>0.05)。對雌性大鼠,各劑量組動物血清中的紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白(HGB)、血小板(PLT)、白細(xì)胞(WBC)及分類與對照組比較,無顯著性差異(P>0.05)。2.3.3 對大鼠血液生化的影響

    CPG連續(xù)30d喂養(yǎng)雄性大鼠,低劑量組動物的葡萄糖(GLU)含量與對照組比較,具有顯著性差異(P<0.05)。中劑量組動物血清中總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)含量與對照組比較,具有顯著性差異(P<0.05)。高劑量組動物血清中的總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、總蛋白(TP)、尿素氮(BUN)含量與對照組比較,具有顯著性差異(P<0.05),但均在正常范圍值內(nèi),無病理學(xué)意義。

    對雌性大鼠,低劑量組動物的葡萄糖(GLU)含量與對照組比較,具有顯著性差異(P<0.05)。中劑量組動物血清中總膽固醇(TC)含量、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)活力、尿素氮(BUN)含量、總蛋白(TP)含量與對照組比較,具有顯著性差異(P<0.05)。高劑量組動物血清中的總膽固醇(TC)含量、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)活力、葡萄糖(GLU)含量與對照組比較,具有顯著性差異(P<0.05)。但均在正常范圍值(GLU:4.4~8.39mmol/L;TC:1.0~2.76mmol/L;TG:0.2~1.49mmol/L;ALB:25.9~38.5g/L;TP:43.3~80.5μmol/L;BUN:4.05~8.46mmol/L;AST:71.51~196.98U/L[7])內(nèi),無病理學(xué)意義。

    表 7 珠母貝CPG 30d喂養(yǎng)對SD大鼠血常規(guī)指標(biāo)的影響(±s,n=11)Table 7 Effects of CPG on hematological indexes of SD rat±s,n=11)

    表 7 珠母貝CPG 30d喂養(yǎng)對SD大鼠血常規(guī)指標(biāo)的影響(±s,n=11)Table 7 Effects of CPG on hematological indexes of SD rat±s,n=11)

    注:WBC.白細(xì)胞;RBC.紅細(xì)胞;HGB.血紅蛋白;PLT.血小板;NE.中性粒細(xì)胞;MO.單核細(xì)胞;LY.淋巴細(xì)胞;EO.嗜酸性粒細(xì)胞;BA.嗜堿性粒細(xì)胞。

    組別劑量/(g/kg)WBC/(109/L)RBC/(10/L)HGB/(g/L)PLT/(10/L)NE/(10/L)MO/(10/L)LY/(10/L)EO/(109/L)BA/(109/L)對照組11.4f2.67.30f0.37153.0f6.18244.4f36.03.06f1.280.30f0.248.00f1.410.08f0.040.01f0.03 0.62510.8f2.27.23f0.31155.2f6.9241.4f52.62.72f1.190.29f0.167.75f2.140.08f0.040.01f0.03 1.2510.3f2.47.22f0.40159.2f5.0*244.4f52.42.52f1.020.25f0.127.44f1.490.06f0.070.02f0.04 2.5011.5f2.47.28f0.36158.6f5.8*205.2f30.23.26f1.150.39f0.157.70f1.250.09f0.030.01f0.03對照組8.87f1.667.07f0.51152.4f8.6234.2f38.12.01f0.450.31f0.186.46f1.550.08f0.090.01f0.03雄0.6258.68f2.107.14f0.17151.6f12.5241.4f52.61.87f0.670.25f0.136.56f1.950.08f0.060.02f0.04 1.258.52f1.136.81f0.43156.0f7.9234.6f56.62.24f0.600.31f0.185.87f1.140.08f0.060.02f0.04 2.508.96f2.026.92f0.33155.4f6.5210.8f34.22.30f0.690.26f0.086.31f1.460.08f0.060.01f0.03雌

    表 8 珠母貝CPG30d喂養(yǎng)對SD大鼠血生化指標(biāo)的影響(x±s,n=11)Table 8 Effects of CPG on blood biochemical indexes of SD rat (x±s,n=11)

    表 9 珠母貝CPG 30d喂養(yǎng)對SD大鼠臟器指數(shù)的影響(±s,n=11)Table 9 Effects of CPG on organ/body weight ratios of SD rat (±s,n=11)

    表 9 珠母貝CPG 30d喂養(yǎng)對SD大鼠臟器指數(shù)的影響(±s,n=11)Table 9 Effects of CPG on organ/body weight ratios of SD rat (±s,n=11)

    胸腺睪丸卵巢子宮對照組0.34f0.043.21f0.340.21f0.040.50f0.080.68f0.040.18f0.050.79f0.090.06f0.010.28f0.11組別劑量/(g/kg)臟器指數(shù)/%心肝脾肺腎CPG劑量組0.6250.33f0.043.19f0.370.22f0.030.47f0.050.71f0.090.18f0.050.85f0.140.07f0.020.27f0.11 1.250.34f0.053.04f0.490.21f0.050.49f0.120.66f0.050.17f0.050.83f0.210.06f0.010.24f0.08 2.500.32f0.043.05f0.340.20f0.020.47f0.070.67f0.050.16f0.040.81f0.150.07f0.050.37f0.20

    2.3.4 病理學(xué)檢查

    2.3.4.1 系統(tǒng)尸解與臟器指數(shù)

    珠母貝CPG連續(xù)30d喂養(yǎng)后,各實(shí)驗(yàn)組動物主要臟器大小正常,表面光滑,無腫脹,無出血點(diǎn),無異常分泌物,彈性良好,無包塊,無結(jié)節(jié)等。胃腸黏膜無糜爛,無缺損等改變。與對照組比較,均未見異常改變。由表9可知,珠母貝CPG連續(xù)喂養(yǎng)30d后,各劑量組的臟器指數(shù)與對照組比較,無顯著性差異(P>0.05)。

    2.3.4.2 組織病理學(xué)檢查

    對高劑量組雌雄大鼠進(jìn)行肝臟、腎臟、脾臟、胃、腸、睪丸、卵巢的組織病理學(xué)檢查。均未見由受試物引起的中毒性病理變化。

    由30d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)相關(guān)指標(biāo),可得出結(jié)論:馬氏珠母貝糖胺聚糖在本實(shí)驗(yàn)劑量范圍內(nèi)(0.625~2.5g/kg),對實(shí)驗(yàn)動物的生長發(fā)育、食物利用率、血液學(xué)、心、肝、脾、腎以及糖脂代謝均無不良影響。但在一定劑量內(nèi)能夠增加食物利用率,并且中、高劑量具有降低血清膽固醇的作用(P<0.05)。

    3 討 論

    海洋動物中的多糖類物質(zhì)具有較好的生物活性與應(yīng)用價(jià)值,如已經(jīng)開發(fā)成產(chǎn)品的有:美國GNC的鯊魚軟骨片(其主要成分為硫酸軟骨素)、海參多糖膠囊、注射劑等。國內(nèi)對海洋動物中多糖活性的研究也較為深入,如文蛤多糖[8]、鮑魚多糖[9]、烏賊墨多糖[10]、扇貝裙邊糖胺聚糖[11]等,吳涓等[12]也對貽貝多糖膠囊進(jìn)行了安全毒理學(xué)的評價(jià)研究,但對其他動物多糖的安全毒理學(xué)的研究還未見詳細(xì)報(bào)道。本課題組一直對馬氏珠母貝糖胺聚糖進(jìn)行研究,結(jié)果表明其具有顯著的抗腫瘤作用[13-14]。本研究從毒理學(xué)角度出發(fā),以馬氏珠母貝糖胺聚糖粗品為研究對象,對其急性毒性、遺傳毒性和大鼠30d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了研究,為其作為功能食品開發(fā)的安全性提供依據(jù)。

    急性毒性實(shí)驗(yàn)中采用最大耐受劑量法,結(jié)果表明:馬氏珠母貝糖胺聚糖對KM小鼠LD50大于20g/kg(以體質(zhì)量計(jì)),且動物活動正常,未發(fā)現(xiàn)不良癥狀,說明該受試物屬于無毒級物質(zhì)。

    根據(jù)對遺傳物質(zhì)作用終點(diǎn)的差別,并兼顧原核細(xì)胞與真核細(xì)胞、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)與體外實(shí)驗(yàn)以及體細(xì)胞和生殖細(xì)胞相配套原則,進(jìn)行了3項(xiàng)遺傳毒性實(shí)驗(yàn),即Ames實(shí)驗(yàn)、小鼠骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)、小鼠精子畸變實(shí)驗(yàn)。Ames實(shí)驗(yàn)主要是針對生物的基因突變進(jìn)行評估;小鼠骨髓細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)主要是對染色體結(jié)構(gòu)完整性變化進(jìn)行評估,小鼠精子畸變實(shí)驗(yàn)所反映的遺傳學(xué)終點(diǎn)主要是對生殖細(xì)胞的遺傳毒性進(jìn)行評估,而且精子畸形率升高表示具有一定的生殖毒性[15]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明3項(xiàng)遺傳毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果皆為陰性,未表現(xiàn)出致突變性。且低劑量組的精子畸形率顯著降低(P<0.05)。

    30d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)顯示,馬氏珠母貝糖胺聚糖在2.5、1.25、0.625g/kg劑量時(shí),對動物的身體、臟器以及血液學(xué)、血液生化指標(biāo)等均無明顯不良影響,說明馬氏珠母貝糖胺聚糖對動物的生長發(fā)育、造血功能、肝腎等功能均無損害作用。在研究中發(fā)現(xiàn),中、高劑量可顯著降低血清膽固醇水平,提示該受試物具有潛在的降脂、調(diào)脂功能,這與海洋貝類多糖具有降血脂功能結(jié)果一致[16]。

    依據(jù)中華人民共和國衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》中保健食品毒理學(xué)評價(jià)程序的有關(guān)規(guī)定,綜合各項(xiàng)安全毒理學(xué)的研究結(jié)果,可以認(rèn)為馬氏珠母貝糖胺聚糖作為保健食品是安全的。

    [1] 曹彩, 劉鴻萍. 珍珠實(shí)用百匯[M]. 北京: 中醫(yī)古籍出版社, 1993: 58; 73.

    [2] 吳紅棉, 雷曉凌, 洪鵬志, 等. 珠母貝糖胺聚糖的結(jié)構(gòu)初探及其生理活性[J]. 水產(chǎn)學(xué)報(bào), 2001, 25(2): 166-170.

    [3] 陳方, 吳鐵, 艾春媚, 等. 馬氏珠母貝全臟器提取物糖胺聚糖抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué), 2002, 7(6): 511-514.

    [4] 范秀萍, 吳紅棉, 雷曉凌, 等. 珠母貝氨基多糖的分離純化及其抗腫瘤活性的初步研究[J]. 中國海洋藥物, 2005, 24(2): 32-36.

    [5] 中華人民共和國衛(wèi)生部. 保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范[S]. 2003: 177-242.

    [6] HUTADILOK-TOWATANA N, REANMONGKOL W, PANICHAYUPAKARANANT P. Evaluation of the toxicity of Arthrospira(Spirulina) platensis extract[J]. J Appl Phycol, 2010, 22: 599-605.

    [7] 徐淑云,卞廉如, 陳修. 藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M]. 2版. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 1991.

    [8] 竇昌貴, 黃芳, 黃羅生, 等. 文蛤多糖抗癌免疫藥理作用的研究[J].中國海洋藥物, 1999(2): 15-19.

    [9] ZHU Beiwei, WANG Lisha, ZHOU Dayong, et al. Antioxidant activity of sulfated polysaccharide conjugates from abalone (Haliotis discus hannai Ino)[J]. Eur Food Res Technol, 2008, 227: 1663-1668.

    [10] CHEN Shiguo, WANG Jingfeng, XUE Changhu, et al. Sulfation of a squid ink polysaccharide and its inhibitory effect on tumor cell metastasis[J]. Carbohydrate Polymers, 2010, 81: 561-566.

    [11] 于囡, 劉賽, 王海桃, 等. 扇貝裙邊糖胺聚糖體外抗I型單純皰疹病毒實(shí)驗(yàn)研究[J]. 中國藥理學(xué)通報(bào), 2008, 24(2): 210-213.

    [12] 吳涓, 孫倩, 儲智勇, 等. 貽貝多糖膠囊毒理學(xué)安全性研究[J]. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2011, 21(1): 97-100.

    [13] 吳紅棉, 蔣巧俊, 范秀萍, 等. 珠母貝糖胺聚糖對雞胚絨毛尿囊膜血管生成的影響[J]. 中國藥理學(xué)通報(bào), 2008, 24(3): 300-302.

    [14] 吳紅棉, 金曉石, 范秀萍, 等. 珠母貝糖胺聚糖PG-Ⅱ誘導(dǎo)人宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡的研究[J]. 食品科學(xué), 2012, 33(3): 238-242.

    [15] 昭日格圖, 娜日蘇, 韓景芬, 等. 黃芪多糖的安全性研究[J]. 食品科學(xué), 2009, 30(19): 309-313.

    [16] 儲智勇, 毛俊琴, 李鐵軍, 等. 貽貝多糖對大鼠高脂血癥的影響[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào), 2008(3): 213-215.

    Toxicity Evaluation of Glycosaminoglycan from Pinctada martensii

    FAN Xiu-ping,WU Hong-mian*,YE Qing-jun,ZHONG Min,HU Xue-qiong,LEI Xiao-ling (School of Food Science and Technology, Guangdong Ocean University, Zhanjiang 524006, China)

    Objective: To evaluate the toxicological safety of glycosaminoglycan from Pinctada martensii (CPG) as a health food. Methods: Rat acute toxicity test, mouse bone marrow cell micronucleus test, mouse sperm aberration test, Ames test and 30-day rat feeding test were used. Results: Acute toxicity test showed that the acute oral maximum tolerated doses (MTD) of CPG to male and female rats were both more than 20.0 g/kg body weight, which were over 300 times higher than the recommended human dose, indicating that CPG was non-toxic. The results of genotoxicity tests, including mouse bone marrow cell micronucleus test, mouse sperm aberration test and Ames test, were all negative and without mutations. In addition, no obvious negative impact on body weight, the growth and development of visceral organs or blood biochemical indicators was observed during 30 days of feeding at doses of 2.50, 1.25 g/kg and 0.625 g/kg body weight. Conclusion: It is safe to eat CPG as a dietary supplement.

    glycosaminoglycan from Pinctada martensii (CPG);acute toxicity;genotoxicity;subchronic oral toxicity

    R114

    A

    1002-6630(2013)01-0295-05

    2011-10-07

    廣東省科技廳科技計(jì)劃項(xiàng)目(2005B204012)

    范秀萍(1979ü),女,講師,碩士,研究方向?yàn)楹Q笊锘钚晕镔|(zhì)。E-mail:fanxp08@163.com

    *通信作者:吳紅棉(1953ü),男,教授,碩士,研究方向?yàn)楹Q笊锘钚晕镔|(zhì)。E-mail:hxwz247@163.com

    猜你喜歡
    顯著性小鼠劑量
    結(jié)合劑量,談輻射
    ·更正·
    90Sr-90Y敷貼治療的EBT3膠片劑量驗(yàn)證方法
    小鼠大腦中的“冬眠開關(guān)”
    基于顯著性權(quán)重融合的圖像拼接算法
    電子制作(2019年24期)2019-02-23 13:22:26
    基于視覺顯著性的視頻差錯(cuò)掩蓋算法
    米小鼠和它的伙伴們
    一種基于顯著性邊緣的運(yùn)動模糊圖像復(fù)原方法
    論商標(biāo)固有顯著性的認(rèn)定
    Avp-iCre轉(zhuǎn)基因小鼠的鑒定
    成人av一区二区三区在线看 | 国产日韩一区二区三区精品不卡| 成人影院久久| 久久精品国产综合久久久| 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲精品乱久久久久久| 少妇被粗大的猛进出69影院| 老熟妇仑乱视频hdxx| 午夜日韩欧美国产| 国产精品欧美亚洲77777| 午夜日韩欧美国产| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲人成77777在线视频| 久久性视频一级片| 黄色a级毛片大全视频| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 丁香六月天网| 亚洲av日韩在线播放| 操出白浆在线播放| 99久久综合免费| 国产精品久久久久久精品古装| av视频免费观看在线观看| 色94色欧美一区二区| 69精品国产乱码久久久| 亚洲中文日韩欧美视频| av天堂在线播放| 美女高潮到喷水免费观看| 最新的欧美精品一区二区| 一区在线观看完整版| 一级片免费观看大全| 亚洲av日韩在线播放| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 51午夜福利影视在线观看| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| www.av在线官网国产| 天天影视国产精品| 丁香六月欧美| 97在线人人人人妻| 大片免费播放器 马上看| 国产高清videossex| 精品高清国产在线一区| 精品福利观看| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 午夜福利一区二区在线看| 午夜福利在线免费观看网站| 久久久久久久久久久久大奶| 国产亚洲精品久久久久5区| kizo精华| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 大片电影免费在线观看免费| 高清在线国产一区| 成人三级做爰电影| 亚洲精品一区蜜桃| 国产精品久久久久久精品电影小说| 久久国产亚洲av麻豆专区| av天堂久久9| 91成人精品电影| 国产视频一区二区在线看| 女性被躁到高潮视频| 丝袜美足系列| 久久久久视频综合| 丁香六月天网| 免费少妇av软件| 国产淫语在线视频| 午夜福利在线观看吧| 夫妻午夜视频| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 久久久欧美国产精品| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲情色 制服丝袜| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 午夜两性在线视频| 日本精品一区二区三区蜜桃| 黄色片一级片一级黄色片| 久久 成人 亚洲| 三上悠亚av全集在线观看| 成年动漫av网址| 亚洲av日韩在线播放| 一级片'在线观看视频| 欧美性长视频在线观看| 少妇被粗大的猛进出69影院| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲国产精品一区三区| 91字幕亚洲| 亚洲人成77777在线视频| 久久这里只有精品19| 大片免费播放器 马上看| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 老司机影院毛片| 夜夜夜夜夜久久久久| 又黄又粗又硬又大视频| 搡老岳熟女国产| 99国产精品一区二区蜜桃av | 99精国产麻豆久久婷婷| 亚洲欧洲日产国产| av在线老鸭窝| 亚洲av日韩在线播放| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 女性被躁到高潮视频| 午夜福利一区二区在线看| 在线看a的网站| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 日韩精品免费视频一区二区三区| 91国产中文字幕| 我的亚洲天堂| 好男人电影高清在线观看| 日韩视频一区二区在线观看| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 岛国在线观看网站| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 操美女的视频在线观看| 一区二区三区四区激情视频| 男女国产视频网站| 色94色欧美一区二区| 岛国毛片在线播放| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 男女免费视频国产| 国产精品一区二区免费欧美 | 国产黄色免费在线视频| 黄色怎么调成土黄色| 久久久久久久国产电影| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 亚洲情色 制服丝袜| 久久久久久久国产电影| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 国产精品久久久久成人av| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 成人手机av| 十分钟在线观看高清视频www| 丁香六月欧美| 18禁观看日本| 亚洲,欧美精品.| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 多毛熟女@视频| 久久久久网色| 日韩欧美国产一区二区入口| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产福利在线免费观看视频| 国产熟女午夜一区二区三区| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 91成人精品电影| 人成视频在线观看免费观看| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 亚洲精品国产精品久久久不卡| 亚洲av男天堂| 国产精品99久久99久久久不卡| 久久中文看片网| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 超色免费av| 777米奇影视久久| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲成人免费电影在线观看| 精品一区二区三区四区五区乱码| 久久精品国产亚洲av高清一级| 日本一区二区免费在线视频| 欧美精品av麻豆av| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 黄色视频在线播放观看不卡| 十八禁高潮呻吟视频| 一区二区日韩欧美中文字幕| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 久久久国产一区二区| 亚洲一区中文字幕在线| 国产精品久久久av美女十八| 免费高清在线观看日韩| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 老熟妇乱子伦视频在线观看 | 一级片免费观看大全| 最新在线观看一区二区三区| 久久久精品94久久精品| 免费日韩欧美在线观看| 少妇精品久久久久久久| 黄色视频,在线免费观看| 久久香蕉激情| 久久 成人 亚洲| 久久人人97超碰香蕉20202| www.av在线官网国产| 日韩制服骚丝袜av| 丰满迷人的少妇在线观看| 久久久久国产精品人妻一区二区| av天堂在线播放| 亚洲久久久国产精品| 欧美在线一区亚洲| 大片电影免费在线观看免费| 免费日韩欧美在线观看| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 日韩人妻精品一区2区三区| 伦理电影免费视频| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| www.av在线官网国产| 99热国产这里只有精品6| 一区二区三区四区激情视频| 久久精品国产a三级三级三级| 一个人免费在线观看的高清视频 | 99九九在线精品视频| 亚洲精品一区蜜桃| 69av精品久久久久久 | 国产99久久九九免费精品| 亚洲精品中文字幕在线视频| 精品亚洲成国产av| 欧美激情高清一区二区三区| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 国产麻豆69| 黄色a级毛片大全视频| 婷婷成人精品国产| 亚洲人成77777在线视频| 十分钟在线观看高清视频www| 一本大道久久a久久精品| 亚洲第一av免费看| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 悠悠久久av| 三上悠亚av全集在线观看| 岛国毛片在线播放| 一区二区av电影网| 欧美乱码精品一区二区三区| 丁香六月天网| 亚洲av欧美aⅴ国产| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 亚洲国产成人一精品久久久| 欧美激情极品国产一区二区三区| 视频在线观看一区二区三区| 国产亚洲欧美精品永久| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久 | 亚洲五月婷婷丁香| 欧美国产精品va在线观看不卡| 1024香蕉在线观看| 777米奇影视久久| 黄色 视频免费看| 国产成人精品无人区| 看免费av毛片| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲精品乱久久久久久| av线在线观看网站| 亚洲天堂av无毛| 热99国产精品久久久久久7| 男女床上黄色一级片免费看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 99国产极品粉嫩在线观看| 这个男人来自地球电影免费观看| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 久久中文看片网| 狂野欧美激情性xxxx| 午夜视频精品福利| a在线观看视频网站| 我要看黄色一级片免费的| 高清视频免费观看一区二区| 夫妻午夜视频| 国产又爽黄色视频| 99久久国产精品久久久| 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 丰满迷人的少妇在线观看| 啦啦啦啦在线视频资源| 欧美激情高清一区二区三区| 一级毛片电影观看| 欧美 日韩 精品 国产| 久久免费观看电影| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 亚洲精品国产av蜜桃| 亚洲精华国产精华精| 丝袜美足系列| 大香蕉久久网| 色视频在线一区二区三区| 日韩精品免费视频一区二区三区| 少妇的丰满在线观看| 飞空精品影院首页| 免费人妻精品一区二区三区视频| 欧美日韩精品网址| 大型av网站在线播放| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产av一区二区精品久久| 在线av久久热| 国产精品影院久久| 操出白浆在线播放| 婷婷色av中文字幕| 久久性视频一级片| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 久久99一区二区三区| 99国产精品99久久久久| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 久久ye,这里只有精品| 久久久国产欧美日韩av| 女警被强在线播放| 少妇粗大呻吟视频| 国产色视频综合| 美女国产高潮福利片在线看| 日本a在线网址| 99久久综合免费| 欧美激情 高清一区二区三区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 99久久人妻综合| 国产一区二区三区av在线| 国产精品1区2区在线观看. | 精品视频人人做人人爽| 婷婷丁香在线五月| 一个人免费看片子| 成人国语在线视频| 国产野战对白在线观看| e午夜精品久久久久久久| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 亚洲一区中文字幕在线| 欧美激情 高清一区二区三区| 日本一区二区免费在线视频| 精品久久久精品久久久| 男女午夜视频在线观看| 黄频高清免费视频| 日本wwww免费看| 精品国内亚洲2022精品成人 | 日韩欧美免费精品| 欧美日韩视频精品一区| 黄色怎么调成土黄色| 韩国精品一区二区三区| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 亚洲成人免费av在线播放| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 18禁观看日本| 亚洲黑人精品在线| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 国产日韩欧美在线精品| 久久性视频一级片| 一本大道久久a久久精品| 久久亚洲精品不卡| 青草久久国产| 午夜福利影视在线免费观看| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 香蕉国产在线看| 久久 成人 亚洲| 搡老岳熟女国产| 免费在线观看黄色视频的| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产91精品成人一区二区三区 | kizo精华| cao死你这个sao货| 大片免费播放器 马上看| 久久中文看片网| 精品一区二区三区四区五区乱码| a级毛片黄视频| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 99久久国产精品久久久| 欧美+亚洲+日韩+国产| 欧美激情极品国产一区二区三区| 精品国产乱子伦一区二区三区 | 99国产精品99久久久久| 久久女婷五月综合色啪小说| 99久久综合免费| 国产精品.久久久| 国产99久久九九免费精品| 91精品三级在线观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 高潮久久久久久久久久久不卡| 精品乱码久久久久久99久播| 黄片播放在线免费| 99re6热这里在线精品视频| 久久午夜综合久久蜜桃| 久久毛片免费看一区二区三区| 亚洲综合色网址| 国产又爽黄色视频| 日韩制服骚丝袜av| 又紧又爽又黄一区二区| 天堂中文最新版在线下载| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲国产精品999| 久久久久视频综合| 日韩中文字幕欧美一区二区| www.999成人在线观看| 黑人猛操日本美女一级片| 午夜福利视频在线观看免费| 国产成人影院久久av| 午夜日韩欧美国产| www.av在线官网国产| 啦啦啦在线免费观看视频4| 国产欧美日韩精品亚洲av| 久久ye,这里只有精品| 97在线人人人人妻| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 丁香六月天网| 国产福利在线免费观看视频| 99热国产这里只有精品6| 无限看片的www在线观看| 欧美午夜高清在线| 日韩大码丰满熟妇| www日本在线高清视频| 99精品欧美一区二区三区四区| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 一二三四在线观看免费中文在| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲avbb在线观看| 国产野战对白在线观看| 国产成人影院久久av| 亚洲欧美一区二区三区久久| 人妻一区二区av| 在线av久久热| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 麻豆乱淫一区二区| 久久性视频一级片| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 成人国语在线视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 久久综合国产亚洲精品| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 亚洲av日韩在线播放| 国产精品久久久久久精品电影小说| 久久久久久久久久久久大奶| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 制服诱惑二区| 亚洲伊人色综图| 亚洲免费av在线视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 亚洲,欧美精品.| 淫妇啪啪啪对白视频 | 一级片'在线观看视频| 两个人免费观看高清视频| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 岛国毛片在线播放| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 成年美女黄网站色视频大全免费| 欧美精品亚洲一区二区| tocl精华| 97在线人人人人妻| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 考比视频在线观看| 精品少妇久久久久久888优播| 国产精品九九99| 精品卡一卡二卡四卡免费| 天堂中文最新版在线下载| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 十八禁人妻一区二区| 飞空精品影院首页| 国产97色在线日韩免费| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 多毛熟女@视频| 人妻一区二区av| 色视频在线一区二区三区| videosex国产| 五月天丁香电影| 日韩人妻精品一区2区三区| 热re99久久精品国产66热6| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 国产亚洲精品第一综合不卡| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 另类亚洲欧美激情| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 午夜福利免费观看在线| 色婷婷久久久亚洲欧美| 久久性视频一级片| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 少妇人妻久久综合中文| 青春草视频在线免费观看| 法律面前人人平等表现在哪些方面 | 最近最新中文字幕大全免费视频| 99热全是精品| 操出白浆在线播放| 日本欧美视频一区| 欧美久久黑人一区二区| 成在线人永久免费视频| 国产精品久久久久久精品电影小说| 在线观看免费日韩欧美大片| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 少妇的丰满在线观看| 欧美午夜高清在线| 中文字幕高清在线视频| 国产免费福利视频在线观看| 亚洲熟女毛片儿| 99精品久久久久人妻精品| 丝袜喷水一区| 丰满迷人的少妇在线观看| 90打野战视频偷拍视频| 色老头精品视频在线观看| 国产黄频视频在线观看| 老熟女久久久| 亚洲国产中文字幕在线视频| 国产在线视频一区二区| 欧美性长视频在线观看| 中文欧美无线码| 成人国产一区最新在线观看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 99国产精品99久久久久| 永久免费av网站大全| 日韩中文字幕欧美一区二区| 极品人妻少妇av视频| 人妻 亚洲 视频| 国精品久久久久久国模美| 成年美女黄网站色视频大全免费| 激情视频va一区二区三区| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 一区二区日韩欧美中文字幕| 精品国内亚洲2022精品成人 | 国产xxxxx性猛交| 青春草亚洲视频在线观看| 午夜福利在线免费观看网站| 亚洲专区国产一区二区| 欧美日韩一级在线毛片| 天天影视国产精品| 人人澡人人妻人| 国产有黄有色有爽视频| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 国产成人av教育| 午夜福利乱码中文字幕| 国产成人免费无遮挡视频| 99国产精品一区二区蜜桃av | 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 丁香六月欧美| 免费观看av网站的网址| 天堂俺去俺来也www色官网| av片东京热男人的天堂| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 91九色精品人成在线观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 亚洲精品国产av蜜桃| 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产一区二区激情短视频 | 久久九九热精品免费| 91成人精品电影| 亚洲国产精品一区三区| 免费观看人在逋| 久久久精品区二区三区| 亚洲成国产人片在线观看| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 中文字幕精品免费在线观看视频| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 日本五十路高清| 欧美另类一区| 午夜福利免费观看在线| 亚洲五月色婷婷综合| 三级毛片av免费| 精品一品国产午夜福利视频| 日日夜夜操网爽| 高清黄色对白视频在线免费看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 狂野欧美激情性xxxx| www.999成人在线观看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲第一av免费看| 窝窝影院91人妻| 大型av网站在线播放| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 午夜成年电影在线免费观看| 视频区欧美日本亚洲| 久久国产精品影院| 免费在线观看黄色视频的| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 日日夜夜操网爽| 母亲3免费完整高清在线观看| 韩国精品一区二区三区| 国产精品一区二区在线不卡| 大陆偷拍与自拍| 久久久精品区二区三区| 亚洲国产欧美在线一区| 日本黄色日本黄色录像| 国产老妇伦熟女老妇高清| 久9热在线精品视频| 一区福利在线观看| 亚洲av片天天在线观看| 大香蕉久久成人网| av线在线观看网站| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 俄罗斯特黄特色一大片| 国产精品久久久久久精品古装| 人妻久久中文字幕网| 性高湖久久久久久久久免费观看| 又紧又爽又黄一区二区| 成人国语在线视频| 国产一区二区三区综合在线观看| 97人妻天天添夜夜摸| 亚洲国产av新网站| 午夜福利,免费看| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 精品国产乱码久久久久久小说| 欧美黑人精品巨大| 大片免费播放器 马上看| 免费人妻精品一区二区三区视频| 午夜影院在线不卡| 精品国产乱子伦一区二区三区 | 国产高清视频在线播放一区 | 亚洲,欧美精品.| 老司机亚洲免费影院| 中文字幕人妻熟女乱码| 另类亚洲欧美激情| 高清欧美精品videossex| av福利片在线| 国产欧美日韩一区二区三 | 91成年电影在线观看| 天堂俺去俺来也www色官网| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 视频区欧美日本亚洲| 国产精品一二三区在线看| av网站在线播放免费| 国产精品.久久久| 一区二区三区激情视频| av网站在线播放免费| 免费高清在线观看日韩| 丰满饥渴人妻一区二区三| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 91成年电影在线观看| 婷婷色av中文字幕| 免费av中文字幕在线|