正交法優(yōu)選青乳合劑的水提工藝

譚泳怡 曾聰彥 梅全喜 梁 食

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山中醫(yī)院，中山市528400）

正交法優(yōu)選青乳合劑的水提工藝

譚泳怡 曾聰彥 梅全喜 梁 食

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山中醫(yī)院，中山市528400）

目的 優(yōu)選青乳合劑的最佳水提工藝。方法 采用4因素3水平正交設(shè)計(jì)，高效液相色譜法測(cè)定芍藥苷含量，以提取物中芍藥苷的含量為檢測(cè)指標(biāo)，篩選出青乳合劑的優(yōu)化提取條件。結(jié)果 青乳合劑最佳水提工藝為A3B1C3D2，即藥材加10倍量的水，浸泡0.5h，煎煮2次，每次1.5h。結(jié)論 經(jīng)正交設(shè)計(jì)優(yōu)化的青乳合劑的水提工藝可行。

青乳合劑；正交試驗(yàn)；提取工藝

青乳合劑是在我院臨床使用多年的有效經(jīng)驗(yàn)方基礎(chǔ)上制成的，現(xiàn)已取得藥品監(jiān)督管理部門(mén)頒發(fā)的制劑生產(chǎn)批文（批準(zhǔn)文號(hào)：粵藥制字Z20110121），該制劑是由赤芍、蒲公英、王不留行、乳香、沒(méi)藥、桃仁、小茴香等13味中藥組成，具有清熱祛濕，疏肝理氣，活血止痛，適用于肝郁氣滯、濕熱夾瘀型精濁、精癃、前列腺癌、淋癥等，即現(xiàn)代的慢性非細(xì)菌性前列腺炎，前列腺增生癥等。根據(jù)青乳合劑方中藥材的現(xiàn)有化學(xué)、藥理等研究資料，同時(shí)考慮醫(yī)院中藥制藥業(yè)生產(chǎn)的特點(diǎn)，配制工藝采用“原方水提并收集揮發(fā)油—濃縮—配液—灌裝成型”設(shè)計(jì)，以上水提工藝的合理與否將直接影響成品質(zhì)量，進(jìn)而影響臨床療效，因此采用正交試驗(yàn)法，以芍藥苷含量為指標(biāo)，對(duì)本方進(jìn)行以上水提工藝優(yōu)選試驗(yàn)研究也是非常有必要的。現(xiàn)將試驗(yàn)研究情況報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1儀器美國(guó)Agilent 1100系列高效液相色譜儀；BS -224S電子天平（德國(guó)賽多利斯）；電熱恒溫水浴鍋（上海衡平儀器儀表廠）；電熱恒溫干燥箱（廣東方紅醫(yī)療器械分廠）。

1.2試藥芍藥苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：110736-200424）；甲醇為色譜純（product of Tedia，United States of America）；其余所用試劑均為分析純。所用赤芍、蒲公英、王不留行、乳香、沒(méi)藥、桃仁、小茴香等藥材均為飲片，購(gòu)自廣東廣弘藥材有限公司；水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1正交設(shè)計(jì)依據(jù)中藥水提經(jīng)驗(yàn)，確定加水量、浸泡時(shí)間、煎煮時(shí)間和煎煮次數(shù)為影響水提效果的主要因素，每個(gè)因素各選取3個(gè)水平。選用L9（34）正交表安排試驗(yàn)，取方中需水提藥材中主要指標(biāo)成分芍藥苷含量為考察指標(biāo)，并用直觀法和方差分析法分析其結(jié)果。因素水平表見(jiàn)表1。

表1 實(shí)驗(yàn)因素和水平表

2.2正交試驗(yàn)

2.2.1樣品制備取處方量1／10藥材按正交實(shí)驗(yàn)安排，加水浸泡，提取，過(guò)濾，濾液定容至100mL，作供試樣品備用。

2.2.2供試品溶液的制備取“3.2.1項(xiàng)”下濾液10mL，置蒸發(fā)皿中，于水浴上蒸干，加甲醇約5ml，超聲處理（功率150W，頻率20k Hz）5min使溶解，并用甲醇洗凈置蒸發(fā)皿，溶液定容至10mL的量瓶中，搖勻，濾過(guò)，取濾液，即得。

2.2.3對(duì)照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含60μg的溶液，搖勻，即得。

2.2.4色譜條件色譜柱：Phenomenex luna C18柱（250mm×4.60mm，5μm）；流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液（14：86）；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm；體積流量：1.0 mL· min-1；柱溫：25℃。見(jiàn)圖1。

2.2.5線性關(guān)系考察分別精密吸取對(duì)照品溶液2、5、10、20、30μL注入液相色譜儀，按“2.2.4”色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，以對(duì)照品進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程為：Y=1.022×106X+1004，r=0.9994，表明芍藥苷在0.12～1.8μg有良好的線性關(guān)系。

圖1 高效液相色譜圖

2.2.6樣品中芍藥苷含量測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

2.3試驗(yàn)結(jié)果與分析

3.3.1試驗(yàn)結(jié)果正交試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析見(jiàn)表3。

表3 正交試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表（n，%）

表2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

表2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

試驗(yàn)號(hào)A B C D芍藥苷含量（mg／mL）1 1 1 1 1 0.457 2 1 2 2 2 0.640 3 1 3 3 3 0.659 4 2 1 2 3 0.717 5 2 2 3 1 0.569 6 2 3 1 2 0.608 7 3 1 3 2 0.751 8 3 2 1 3 0.723 9 3 3 2 1 0.565均值1 3.084 3.706 3.197 2.531均值2 3.587 3.733 3.694 3.996均值3 4.158 3.356 3.916 4.006極差（R）0.013 0.002 0.006 0.048

3.3.2極差方差分析由表2極差R值可知，RD＞RA＞RC＞RB，影響因素大小順序?yàn)镈＞A＞C＞B，即煎煮次數(shù)是影響芍藥苷含量的重要因素，B因素浸泡時(shí)間影響最小。而由表3也可看出，D因素即煎煮次數(shù)有顯著性差異，而其它三個(gè)因素對(duì)芍藥苷含量的影響都無(wú)顯著性的意義。

3.3.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果綜合分析通過(guò)直觀分析和方差分析可以看出，D因素即煎煮次數(shù)為主要影響因素，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果具有顯著性影響，應(yīng)取其好的水平為B3。其它A、B、C三因素均為次要影響因素，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響無(wú)顯著意義，且B因素浸泡時(shí)間影響最小，浸泡0.5小時(shí)與1小時(shí)結(jié)果的差別很小，因此選擇浸泡0.5小時(shí)。因此，最佳工藝條件為，即原方藥材加10倍量的水，浸泡0.5小時(shí)，煎煮3次，每次1.5小時(shí)，由于煎煮3次與煎煮2次芍藥苷含量差別不大，為節(jié)約生產(chǎn)成本，最佳工藝條件定為A3B1C3D2，即原方藥材加10倍量的水，浸泡0.5小時(shí)，煎煮2次，每次1.5小時(shí)。

3.3.4驗(yàn)證試驗(yàn)為進(jìn)一步確定此提取工藝的合理，按照1／10處方量稱處方藥材3份，按照正交試驗(yàn)優(yōu)選的最佳工藝條件A3B1C3D2進(jìn)行加水浸泡，提取，過(guò)濾，定容，按前述方法測(cè)出芍藥苷含量，其結(jié)結(jié)果分別為：0.66，0.69，0.71。由結(jié)果可見(jiàn)，優(yōu)化工藝提取得的芍藥苷成份含量的結(jié)果均與正交試驗(yàn)結(jié)果一致，說(shuō)明此提取工藝條件基本穩(wěn)定。

4 討論

青乳合劑是在其湯劑基礎(chǔ)上改進(jìn)而成，在其提取工藝的篩選試驗(yàn)中，根據(jù)處方藥材所含成分理化性質(zhì)的不同，有針對(duì)性地將提取工藝定為水提和揮發(fā)油提取，能夠使藥材的有效成分得以保留，更好地發(fā)揮藥效。

在水提工藝優(yōu)選中，由于藥材眾多，筆者曾嘗試用桃仁中的苦杏仁苷作為考察指標(biāo)，但在試驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)陰性對(duì)照有干擾，而采用赤芍中芍藥苷作為考察指標(biāo)時(shí)，陰性對(duì)照無(wú)干擾，故本制劑水提工藝優(yōu)選以芍藥苷作為考察指標(biāo)。此外，現(xiàn)代藥理研究表明，芍藥苷有明顯的抗血栓、抗炎、抗傷害性疼痛的作用［2］，這與青乳合劑有活血止痛作用的功效相同，應(yīng)為該制劑中主要有效成分之一，故選擇芍藥苷作為工藝優(yōu)選的考察指標(biāo)是合理、可行的。

青乳合劑處方中藥材水提工藝的好壞將直接影響到臨床應(yīng)用效果，綜合上述水提工藝研究結(jié)果，確定該藥中需水提藥材最佳提取工藝為A3B1C3D2，即原方13味藥材加10倍量水，浸泡0.5小時(shí)，煎煮2次，每次1.5小時(shí)。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，按上述優(yōu)選提取工藝制備，制劑中有效成分的提取率高，從而為青乳合劑提取工藝的優(yōu)選路線提供了參考依據(jù)。

［1］孫麗榮，曹雄，侯鳳青，等.芍藥苷研究進(jìn)展［J］.中國(guó)中藥雜志，2008，33（18）：2028-2032.

水調(diào)歌頭——湯頭拾趣

竹葉柳蒡道，泰山磐石邊。龜鹿二仙興至，逍遙桂枝前。更有四君三子，大小青龍共舞，玉女伴天仙。陽(yáng)和桃花笑，碧云牡丹妍。

酥蜜酒，甘露飲，八珍餐。白頭翁醉，何人送服醒消丸？涼膈葛花解酲，保元人參養(yǎng)榮，回春還少年。四海疏郁罷，常山浴涌泉。

注：詞內(nèi)含湯頭三十個(gè)，依次為：竹葉柳蒡湯、泰山磐石散、龜鹿二仙膠、逍遙散、桂枝湯、四君子湯、三子湯、大青龍湯、小青龍湯、玉女煎、天仙藤散、陽(yáng)和湯、桃花湯、碧云散、牡丹皮散、酥密膏酒、甘露飲、八珍湯、白頭翁湯、何人飲、醒消丸、涼膈散、葛花解酲湯、保元湯、人參養(yǎng)榮湯、回春丹、還少丹、四海疏郁湯、常山飲、涌泉散。

St u d y on Ext r a c tion Pr o c e ss f o r Qin g r u Mixt u r e wit h Or t ho g onal Tes t

Tan Yongyi Zeng Congyan M eiQquanxi Liang Shi
（Zhongshan Hospitalof TCM Affiliated University of TCM of Guangzhou，Zhongshan 528400，China）

ObjectiveTo study the optimized extraction process of Qingru Mixture.Methods An orthogonal experimental design L9（34）test was adopted in this study.And the content of paeoniflorin was determined to fit its quality standard，screening out the best method of extraction conditions. Results The best extracting technical extractions were as follows：ten times amount of water，0.5h of soaking period，extracting twice by relux，1.5 hours for each time.Conclusion The process choosed in this experiment is practicable and can be applied for preparation of Qingru Mixture.

Qingru Mixture；Orthogonal test；Extract technolog；Paeoniflorin

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.08.100

1672-2779（2013）-08-0147-02

韓世輝

2013-03-03）