新生涼山烏金豬乳前豬瘟免疫試驗

李翠蓉 （西昌學(xué)院 四川 西昌 615013）

涼山烏金豬，是川貴滇接壤地區(qū)放牧型古稀原始種質(zhì)，分布在州內(nèi)二半山區(qū)。產(chǎn)區(qū)潔凈的草山草坡可供常年放牧。涼山烏金豬具有體型較小，生長慢，耐寒耐粗飼，易放牧等特點，尤其以股部肌肉發(fā)達，瘦肉略呈大理石狀，口感鮮嫩，香味豐滿為優(yōu)勢，市場價格已高于普通豬肉30%以上，是涼山彝族自治州高寒山區(qū)的當家豬種。豬瘟(CSF)乃是涼山烏金豬養(yǎng)殖業(yè)之大敵。近年來隨著免疫接種強度的不斷提高，急性、典型病已減少，成年豬的發(fā)病率不高，疫情緩和，但仔豬慢性豬瘟州內(nèi)的一些縣和豬場時有發(fā)生，以溫和型或無癥狀為主，病理變化由以前廣泛性、彌漫性出血逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)椴±碜兓幻黠@，其原因是多方面的，尤其是新生仔豬母源抗體干擾，是主要原因。在仔豬豬瘟免疫上，如何排除母源抗體對仔豬免疫干擾和選擇最佳免疫日齡，近年來國內(nèi)外進行了廣泛的研究?，F(xiàn)將新生涼山烏金豬乳前豬瘟免疫試驗分述如下。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

（1）試驗動物：涼山州金陽縣祖代種豬場，選擇8頭涼山烏金豬所產(chǎn)仔豬。母豬均于配種前一周左右接種干燥豬瘟兔化弱毒苗(150個免疫量)。選擇西寧鎮(zhèn)一個兔場的家兔，體重1.5～2.5kg。試驗前經(jīng)3d體溫測試，選擇體溫恒定的健康兔備用。（2）試劑：免疫用于燥豬瘟兔化弱毒苗、豬瘟兔化弱毒種毒均系中牧實業(yè)股份有限公司成都藥械廠提供。石門系豬瘟強毒系農(nóng)牧漁業(yè)部獸醫(yī)藥品監(jiān)察所供給，取回后，經(jīng)用健康仔豬復(fù)壯一代。

1.2 試驗方法

1.2.1 第1階段 2窩共16頭仔豬，分4組，分別為5、5、4、2頭。于出生后頸側(cè)肌肉注射干燥豬瘟兔化弱毒苗1頭份(150個免疫量)，注射后分別間隔0.5、1.5、3.5、4.5h后讓仔豬吸吮初乳[1]，至60日齡斷奶。斷奶后按一般育肥豬條件飼養(yǎng)至155～271d，分別行前腔靜脈采血，分離血清，用兔體中和試驗法測定其血清中和抗體[2]，以判定其免疫力，見表1。

表1 第1階段兔化弱毒苗劑量及仔豬吮乳時間

中和抗體測定采用弱毒種毒和血清的定性試驗。血清與病毒混合后，于6℃靜置1～1.5h，每份豬血清注射2只家兔，每只家兔耳靜脈注入內(nèi)含0.1ml血清，10個發(fā)熱量的豬瘟兔化弱毒。兔的熱型反應(yīng)，按原農(nóng)林部獸醫(yī)生物藥品制造及檢驗規(guī)程中“關(guān)于豬瘟兔化弱毒苗用兔效檢及攻毒復(fù)檢方法”進行判定。

1.2.2 第2階段 5窩50頭仔豬，于出生后頸側(cè)肌肉注射干燥豬瘟兔化弱毒苗1頭份(150個免疫量)，注射后間隔0.5h再讓仔豬吸吮初乳，至60日齡斷奶。試驗豬經(jīng)飼養(yǎng)117～157d后，從中隨機抽取2窩計18頭，分2組：①甲組：為豬瘟強毒攻擊試驗組，計免疫試驗豬11頭，對照試驗豬2頭，每頭試驗豬肌注石門系豬瘟強毒(血毒)1ml；②乙組：為同居自然感染試驗組，計免疫試驗豬7頭，對照試驗豬2頭，與上述強毒攻毒豬同圈飼養(yǎng)。受試豬在試驗期內(nèi)，上下午各測溫1次/d，觀察至對照豬死亡后14d結(jié)束，見表2。

表2 第2階段攻毒情況及體溫測定

1.2.3 試驗豬抗體消長測定 對注苗后間隔0.5h組的5頭試驗豬，分別在210日齡、298日齡時，行前腔靜脈采血，分離血清，用兔體中和試驗法測定其血清抗體滴度，以了解其免疫力的消長衰退情況。

2 結(jié)果與分析

2.1 第1階段試驗結(jié)果

新生仔豬乳前行豬瘟苗免疫后，按上述不同時間開始吸吮初乳，經(jīng)飼養(yǎng)155d后采血行兔體中和試驗，結(jié)果見表3。

表3 仔豬乳前豬瘟免疫與家兔中和試驗結(jié)果的關(guān)系

0.5h組的5頭豬，經(jīng)飼養(yǎng)至271d，采血用10只家兔行中和抗體測定，僅有1頭豬1只家兔獲得中和，其余4頭豬的8只家兔均未獲中和。

2.2 第2階段試驗結(jié)果

甲組11頭各組試驗豬經(jīng)攻毒試驗和乙組7頭乳前免疫后0.5h吮乳組自然感染試驗。免疫試驗豬，保護率100%，對照試驗豬，全部發(fā)病死亡。結(jié)果見表4。

表4 豬瘟攻毒試驗和自然接觸感染試驗結(jié)果

2.3 試驗豬抗體滴度消長測定結(jié)果

為了進一步觀察免疫試驗豬的抗體消長情況，于2012年7月另設(shè)了0.5h組的5頭試驗豬，用兔體中和試驗進行消長期測定，210日齡時5頭試驗豬均有中和抗體，至298日齡時，5頭試驗豬中有2頭仍然保有中和抗體，1頭保有部分中和抗體，另2頭無中和抗體。試驗結(jié)果表明，免疫試驗豬至9月齡時中和抗體開始出現(xiàn)衰退。

2.4 試驗豬剖檢結(jié)果

試驗結(jié)束后，宰殺所有試驗豬，解剖檢查，結(jié)果：除4頭對照死亡豬的心房、心冠等處有大量點狀出血，腎包膜下有少量點狀出血，腸黏膜有輕重不同的彌漫性炎癥外，其余各免疫試驗豬，均未發(fā)現(xiàn)異常。

3 討論與小結(jié)

新生仔豬吸吮初乳后，獲得母源抗體，這對保護新生仔豬，使其免于病原微生物感染具有重要作用。但母源抗體抑制新生仔豬對同源免疫抗體的形成，影響仔豬預(yù)防接種效果[3]。在生產(chǎn)實踐中，尤其是仔豬豬瘟的免疫，更為明顯，如何排除母源抗體對仔豬豬瘟免疫的干擾，日益受到國內(nèi)外獸醫(yī)界的重視。1980年，在丹麥召開的第六次國際獸醫(yī)豬病會議上指出：古典型豬瘟的工作方向是完善診斷方法和對新生仔豬在初乳前的免疫。近年來，很多資料說明，豬的免疫活性發(fā)生較早，甚至在胎兒發(fā)育中、后期，即有免疫應(yīng)答能力，并形成抗體，故可推論，仔豬出生后，其免疫應(yīng)答能力已經(jīng)比較成熟。

該試驗證實，仔豬出生后即注射豬瘟兔化弱毒苗，經(jīng)0.5h后再令其吸吮初乳，飼養(yǎng)至155日行中和抗體測定，獲得良好的免疫效果，但飼養(yǎng)至27ld的本組試驗豬，再行中和抗體測定，只有極少免疫試驗豬存在中和抗體。飼養(yǎng)117d的各組試驗豬，經(jīng)攻擊豬瘟強毒，完全獲得保護。飼養(yǎng)157d各組試驗豬，攻擊強毒后，雖有短暫體溫升高和減食反應(yīng)，但均能耐過。該試驗組與強毒攻擊組行同居感染試驗，亦獲得了完全保護，說明新生仔豬乳前注射豬瘟兔化弱毒苗，可以產(chǎn)生良好的免疫效果[4]。

試驗組中1.5、3.5、4.5h的試驗豬，其免疫效果不及0.5h組，是否因為同窩新生仔豬中先后吸吮初乳時間有關(guān)或是0.5h組的試驗豬，首先吸吮的初乳中含有大量的各種免疫球蛋白。據(jù)報道：IgM至少有一定濃度時并不抑制合成淋巴細胞的刺激物，相反的能對增進原始免疫應(yīng)答起作用。同時Henry及Dennert也認為IgM有促進免疫應(yīng)答的作用，或與饑餓影響免疫有關(guān)。關(guān)于免疫與吸吮初乳時間關(guān)系的理論探討，有待進一步試驗證實。

新生涼山烏金豬乳前豬瘟免疫法，具有現(xiàn)實生產(chǎn)實用價值，尤其適用于大型集體養(yǎng)豬場，不僅可以避免因母源抗體的影響而造成免疫后幾周乃至幾個月的無效期的缺點，同時也可以節(jié)省人力和物力。因此，新生仔豬乳前豬瘟疫苗接種是一個新的免疫途徑，對預(yù)防和控制豬瘟具有重大意義。

[1] 寧宜寶. 豬瘟病毒持續(xù)感染與豬瘟預(yù)防控制[J]. 中國獸藥雜志. 2005(5): 31-35.

[2] 唐傳林. 豬瘟免疫后仍有發(fā)病的主要原因及防制方法[J]. 養(yǎng)豬大視野. 2005(4): 19-20.

[3] 魏麗萍. 引起豬免疫抑制的常見因素與預(yù)防措施[J]. 吉林畜牧獸醫(yī). 2006(6): 154-156

[4] 黃艷艷等. 豬瘟超前免疫法及其在國內(nèi)的應(yīng)用進展[J]. 黑龍江畜牧獸醫(yī). 2004(1): 64-65.