膀胱移行細胞癌組織B7-H1和CXCR4表達及其意義

公欣海,王永華,邵世修,崔杰,紀(jì)傳彪

(青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院泌尿外科,山東青島 266003)

膀胱移行細胞癌組織B7-H1和CXCR4表達及其意義

公欣海,王永華,邵世修,崔杰,紀(jì)傳彪

(青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院泌尿外科,山東青島 266003)

目的探討共刺激因子B7-H1與CXC趨化因子受體4(CXCR4)在膀胱移行細胞癌組織表達及意義。方法應(yīng)用免疫組化SP法,檢測60例膀胱移行細胞癌及12例正常膀胱組織中B7-H1及CXCR4的表達,并分析其與膀胱移行細胞癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系及兩者表達之間的相關(guān)性。結(jié)果B7-H1與CXCR4在正常膀胱組織中不表達,在膀胱移行細胞癌組織中表達陽性率分別為71.7%(43/60)和65.0%(39/60),與正常膀胱組織比較差異有顯著性(χ2＝21.352、17.018,P＜0.05)。膀胱移行細胞癌組織中B7-H1、CXCR4表達與腫瘤的臨床病理分級、臨床分期及復(fù)發(fā)有關(guān)(χ2＝4.250～5.240,P＜0.05);且B7-H1與CXCR4的表達呈明顯正相關(guān)(r＝0.469,P＜0.01)。結(jié)論膀胱移行細胞癌組織B7-H1與CXCR4表達與腫瘤臨床進展過程中的免疫逃逸現(xiàn)象密切相關(guān)。

膀胱腫瘤;B7-H1;受體,CXCR4;腫瘤逃逸

膀胱癌為泌尿系統(tǒng)最常見惡性腫瘤,其中又以膀胱移行細胞癌多見,其發(fā)病率和復(fù)發(fā)率均較高,受到廣泛關(guān)注。免疫逃逸機制被認(rèn)為是膀胱癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)過程中的潛在突破點。共刺激因子B7-H1是近年來新發(fā)現(xiàn)的B7家族成員,它可與T細胞表面的程序性死亡因子1(PD-1)結(jié)合并啟動凋亡程序,是免疫逃逸的重要因子[1]。趨化因子及其受體被發(fā)現(xiàn)表達于多種惡性腫瘤[2-3],參與其轉(zhuǎn)移、侵襲過程,膀胱腫瘤中以CXC趨化因子受體4 (CXCR4)表達水平較高[4]。關(guān)于B7-H1與CXCR4表達的相關(guān)性及其在膀胱腫瘤免疫逃逸機制中的作用,目前國內(nèi)外研究較少。本文用免疫組化方法,檢測B7-H1與CXCR4在膀胱移行細胞癌及正常膀胱組織表達,并分析它們與膀胱移行細胞癌臨床分期、病理分級間的關(guān)系以及兩者表達之間的相關(guān)性,探討它們在膀胱腫瘤免疫逃逸過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2009—2011年我科手術(shù)切除并經(jīng)病理學(xué)檢查證實的膀胱移行細胞癌標(biāo)本60例,所有標(biāo)本均經(jīng)病理科醫(yī)生復(fù)檢。其中男46例,女14例,年齡25～82歲,平均64歲。初發(fā)腫瘤44例,復(fù)發(fā)腫瘤16例。病理分級按1999年WHO標(biāo)準(zhǔn),低級別26例,高級別34例。按UICC的TNM標(biāo)準(zhǔn)分期,非浸潤型組(Ta～1)32例,浸潤型組(T2～4)28例。另外,取10例正常膀胱組織作為對照組。

1.2 主要試劑

兔抗人B7-H1多克隆抗體、兔抗人CXCR4多克隆抗體,均購自武漢博士德生物公司;PV-6000檢測試劑盒及DAB試劑盒,均購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 PV-6000免疫組織化學(xué)染色

所有標(biāo)本經(jīng)40 g/L多聚甲醛固定,石蠟包埋,連續(xù)切片,厚4μm。采用PV-6000兩步免疫組化法染色,按試劑盒說明書操作,再分別加入不同一抗孵育后,滴加PV-6000工作液,然后經(jīng)DAB顯色,蘇木精復(fù)染,透明,中性樹膠封片。所有切片均在同一條件下同一批次內(nèi)完成染色。以已知陽性片作為陽性對照,PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4 免疫組化結(jié)果判定

B7-H1蛋白及CXCR4蛋白陽性染色均為細胞膜或細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕色或棕黃色顆粒,判定方法參考文獻[5]。在高倍鏡下(400倍)隨機觀察3個不連續(xù)視野,計算陽性細胞占細胞總數(shù)百分比,并結(jié)合陽性細胞表達強度對表達情況進行評分,評分計算公式如下:S＝∑ei。其中S為評分最后得分;e為陽性細胞百分比評分:無陽性細胞為0分,1%～30%為1分,31%～60%為2分,61%～100%為3分;i為陽性細胞表達強度評分,用Image pro＋6.0對圖像進行掃描,根據(jù)累計光密度值(IOD)評分:IOD≤15計0分,IOD為16～45計1分,IOD為46～75計2分,IOD≥76計3分。S≥3分為陽性表達。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理,數(shù)據(jù)組間比較采用χ2檢驗,相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析,以P＜0.05為差異有顯著性。

2 結(jié) 果

2.1 正常膀胱及膀胱移行細胞癌組織中B7-H1及CXCR4表達比較

正常膀胱組織中B7-H1及CXCR4均呈陰性表達,膀胱移行細胞癌組織中B7-H1蛋白表達陽性率為71.7%(43/60),CXCR4表達陽性率為65.0% (39/60)。兩組B7-H1及CXCR4表達陽性率比較,差異有顯著性(χ2＝21.352、17.018,P＜0.05)。膀胱移行細胞癌組織中B7-H1及CXCR4表達評分分別為(5.4±1.2)、(4.5±0.9)分。見圖1。

2.2 B7-H1及CXCR4蛋白表達與膀胱移行細胞癌生物學(xué)行為的關(guān)系

B7-H1及CXCR4蛋白表達與膀胱移行細胞癌的病理分級、臨床分期以及復(fù)發(fā)均有關(guān),差異有顯著性(χ2＝4.250～5.240,P＜0.05)。見表1。

2.3 B7-H1與CXCR4表達的相關(guān)性

本文43例B7-H1表達陽性的膀胱移行細胞癌中34例CXCR4表達為陽性;而21例CXCR4表達為陰性的膀胱移行細胞癌中,12例B7-H1表達為陰性。相關(guān)分析顯示,B7-H1與CXCR4表達呈正相關(guān)(r＝0.469,P＜0.01)。

3 討 論

B7-H1是共刺激分子B7家族的新成員,正常情況下主要表達于活化的單核細胞和樹突狀細胞(DC)表面,PD-1是B7-H1的受體,故又稱PD-1L,主要表達于活化的T和B細胞表面。最近研究顯示,B7-H1在多種腫瘤組織中均有過度表達[6-7],B7-H1與其受體PD-1結(jié)合可以提供抑制性信號,抑制T、B細胞的增殖活化,并誘導(dǎo)活化的T細胞發(fā)生凋亡,從而對體內(nèi)的抗腫瘤免疫應(yīng)答發(fā)揮負性調(diào)控作用,誘導(dǎo)腫瘤免疫逃逸的發(fā)生[1]。

趨化因子是一類對某些細胞具有定向趨化作用的小分子蛋白質(zhì),趨化因子受體是一類介導(dǎo)趨化因子行使功能的G蛋白偶聯(lián)受體。已有研究顯示,趨化因子受體CXCR4在眾多腫瘤中呈高表達[2,8],通過其受體CXCL12的介導(dǎo)[9],與腫瘤的浸潤和淋巴轉(zhuǎn)移、腫瘤復(fù)發(fā)等均密切相關(guān),其中也包括膀胱腫瘤,并且可以反映膀胱癌臨床進展[4]。

腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移等過程并不僅僅是一種簡單、獨立的現(xiàn)象,而是一個復(fù)雜與程序化的過程,多種因素參與其中,宏觀如飲食習(xí)慣[10],微觀到基因表達的多態(tài)性[11]等,這些因素相互影響、共同作用。本文研究結(jié)果顯示,共刺激因子B7-H1與CXCR4在膀胱移行細胞癌組織高表達,分別與膀胱移行細胞癌的臨床分期、病理分級、復(fù)發(fā)等臨床病理參數(shù)密切相關(guān),并且兩者表達之間也高度相關(guān),這表明兩者可能在膀胱移行細胞癌的發(fā)生、發(fā)展過程中存在協(xié)同關(guān)系。趨化因子在介導(dǎo)腫瘤轉(zhuǎn)移及局部侵襲過程中必然受到細胞毒性T細胞(CTL)的殺傷作用,而B7-H1恰恰可以與后者表面PD-1結(jié)合啟動其凋亡過程,介導(dǎo)免疫逃逸過程。所以聯(lián)合檢測B7-H1及CXCR4可能對預(yù)測膀胱移行細胞癌的臨床進展有積極意義。但本文所收集病例資料有限,大樣本臨床及實驗研究對進一步揭示兩者參與膀胱移行細胞癌發(fā)生發(fā)展的具體作用機制不可或缺。另外,兩者間相互作用的具體分子機制也有待進一步研究。

[1]王永華,莊乾元,周四維,等.阻斷B7-H1通路增強淋巴細胞抗膀胱腫瘤免疫效應(yīng)的研究[J].中華實驗外科雜志,2009,26 (9):1226-1226.

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[9]DAI X F,MAO Z F,HUANG J,et al.The CXCL12/CXCR4 autocrine loop increases the metastatic potential of non-small cell lung cancer in vitro[J].Oncology Letters,2013,5(1): 277-282.

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(本文編輯 黃建鄉(xiāng))

EXPRESSIONS AND SIGNIFICANCE OF B7-H1 AND CXCR4 IN BLADDER TRANSITIONAL CELL CARCINOMA

GONG Xinhai,WANG Yonghua,SHAO Shixiu,CUI Jie,JI Chuanbiao (Department of Urology,The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College,Qingdao 266003,China)

ObjectiveTo investigate the expressions of B7-H1 and CXCR4 in bladder transitional cell carcinoma(BTCC) and their significance.MethodsWith immunohistochemical SP method,the expressions of B7-H1 and CXCR4 in 60 BTCCsamples and 12 normal bladder samples were detected.The relationship between the two expressions with clinicopathological parameters of BTCC,and the correlation between the two parameters was analyzed.ResultsIn normal bladder tissues,no expressions of B7-H1 and CXCR4 were detected,while in BTCC,the expressions of that in BTCC were 71.7%and 66.7%.respectively,the differences were significant as compared with normal bladder tissues(χ2＝21.352,17.018;P＜0.05).The expressions of B7-H1 and CXCR4 were associated with clinicopathologic grade,clinical stage and recurrence of the cancer(χ2＝4.250－5.240,P＜0.05),and B7-H1 was positively correlated with CXCR4(r＝0.469,P＜0.01).ConclusionThe expressions of B7-H1 and CXCR4 in BTCC are closely related to immune escape in the progression of this malignancy.

bladder neoplasms;antigens,CD274;receptors,CXCR4;tumor escape

R737.14

A

1008-0341(2013)04-0286-03

10.11712/qlyx201304002

2013-04-02;

2013-06-14

國家自然科學(xué)基金資助項目(81101932)

公欣海(1987-),男,在讀碩士研究生。

王永華(1981-),男,博士,主治醫(yī)師,碩士生導(dǎo)師。