蟲類中藥蠐螬中含氮化合物研究

李 林，晏永明，李小年，鐘惠民，程永現(xiàn)*

1中國科學(xué)院昆明植物研究所植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，昆明650204;2青島科技大學(xué)化學(xué)與分子工程學(xué)院，青島266042

昆蟲是自然界種類最為豐富的物種，藥用昆蟲更以其獨(dú)特的療效而被廣泛地應(yīng)用于臨床。蠐螬為節(jié)肢動(dòng)物門昆蟲綱鞘翅目金龜子科昆蟲朝鮮黑金龜子Holotrichia diomphalia等同屬近緣昆蟲的干燥幼體，具有破血逐淤，明目退翳的功效，內(nèi)服可用于婦女經(jīng)閉、癥瘕等頑癥痼疾，外用可治丹毒、癰疽、痔漏、跌打損傷等［1］。現(xiàn)代臨床上有人將蠐螬制成滴眼液，用于治療白內(nèi)障、眼角膜翳的治療，效果顯著［2］?，F(xiàn)代藥理研究證明蠐螬具有抗腫瘤、保肝、抗菌等作用，如蠐螬石油醚提取物可誘導(dǎo)人宮頸癌Hela細(xì)胞凋亡，蠐螬具有保肝作用等。相對(duì)于蠐螬突出的臨床療效，蠐螬的化學(xué)成分研究卻極為薄弱，雖然有報(bào)道稱蠐螬含有脂肪酸類、氨基酸、多肽或蛋白質(zhì)、糖類、生物堿、有機(jī)酸鹽、甾體化合物等，也有學(xué)者通過GC-MS分析表明蠐螬石油醚提取物含有反油酸、十六酸，硬脂酸等［3］，但由于這些成分一般是動(dòng)物類中藥均含有的共性成分，因此至今人們對(duì)蠐螬的化學(xué)成分，尤其是小分子物質(zhì)認(rèn)識(shí)仍然嚴(yán)重不足。我們?yōu)榱私沂鞠擉┧幱玫幕瘜W(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)，對(duì)該中藥進(jìn)行了深入系統(tǒng)的研究，從其乙醇提取物中分離得到13個(gè)含氮化合物，經(jīng)譜學(xué)方法鑒定其結(jié)構(gòu)為 N-［2-(4-羥苯基)-乙基］乙酰胺、環(huán)(酪氨酸-脯氨酸)、吡啶-3-甲酰胺、胸苷、戊內(nèi)酰胺、5-(羥甲基)-1H-吡咯-2-醛、環(huán)(脯氨酸-纈氨酸)、環(huán)(脯氨酸-丙氨酸)、羥吲哚、1，2，3，4-四氫-1，3，4-三氧-(-咔啉、吲哚-3-醛、黃苷和苯基丙氨酸，以上化合物均為首次從該種動(dòng)物藥中分離得到。

1 儀器與材料

核磁共振波譜用 Bruker AM-400和Bruker Avance-600核磁共振儀測(cè)定，TMS作為內(nèi)標(biāo);ESIMS用Bruker HCT Esquire 3000離子阱質(zhì)譜儀;高效液相色譜儀型號(hào)為 Agilent 1200;薄層層析硅膠GF254和柱層析硅膠(200～300目)均為青島海洋化工廠產(chǎn)品;大孔吸附樹脂為天津海光化工有限公司D101樹脂;Sephadex LH-20為Pharmacia公司產(chǎn)品;反相硅膠RP-18和MCI gel CHP 20P分別為Daiso公司和三菱公司產(chǎn)品。

2 提取與分離

蠐螬(18 kg)購自安徽省亳州藥材交易中心，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室周小江副教授鑒定為朝鮮黑金龜子(Holotrichia diomphaliaBates)的干燥幼蟲，將藥材粉碎后用95%乙醇冷浸提取三次，每次3 d，減壓回收溶劑得浸膏2 kg，加水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取。乙酸乙酯萃取物55 g經(jīng)過反復(fù)硅膠柱層析、Sephadex LH-20柱層析、MCI膠柱層析和反相柱層析，從中分得化合物1(130 mg)和2(4 mg)。正丁醇萃取物76 g經(jīng)過反復(fù)D101大孔吸附樹脂柱層析、硅膠柱層析、反相柱層析、MCIgel CHP 20P柱層析和Sephadex LH-20柱層析，從中分得化合物3(8 mg)和4(6 mg)。濃縮水相部分得浸膏740 g，取其一半370 g進(jìn)行分離，經(jīng)硅膠柱層析(氯仿∶甲醇15∶0～4∶1梯度洗脫)，分為三部分EQ-1-EQ-3，經(jīng)過反復(fù)MCI gel CHP 20P柱層析、Sephadex LH-20柱層析、反相柱層析、硅膠柱層析及HPLC純化，從EQ-1部分得到化合物1(30 mg)、2(6 mg)、5(6 mg)、6(1 mg)、7(4 mg)、8(11 mg)、9(2 mg)、10(2 mg)和11(10 mg);從 EQ-2部分得到化合物4(11 mg);從EQ-3部分得到化合物12(3 mg)和13(9 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

N-［2-(4-羥苯基)-乙基］乙酰胺 1 無色晶體;1H NMR(400 MHz，C5D5N):δH7.23(2H，d，J=8.4 Hz，H-2，6)，7.15(2H，d，J=8.4 Hz，H-3，5)，3.69(2H，m，H-7)，2.92(2H，m，H-8)，2.09(3H，s，H-10);13C NMR(100 MHz，C5D5N):δC170.6(s，C-9)，157.5(s，C-4)，130.6(s，C-1)，130.5(d，C-2，6)，116.4(d，C-3，5)，42.0(t，C-8)，35.6(t，C-7)，23.2(q，C-10)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)數(shù)值相符［4］。

環(huán)(酪氨酸-脯氨酸)2 無色晶體;1H NMR(400 MHz，Acetone-d6):δH8.33(1H，br s，HN)，7.15(2H，d，J=8.4 Hz，H-12，16)，6.75(2H，d，J=8.4 Hz，H-13，15)，6.59(1H，br s，OH)，4.30(1H，dd，J=11.2，5.6 Hz，H-3)，4.09(1H，t，J=7.6 Hz，H-6)，3.50(1H，m，H-9)，3.36(1H，m，H-9')，3.21(1H，dd，J=14.4，4.5 Hz，H-10)，2.90(1H，dd，J=14.4，7.1 Hz，H-10')，2.04(1H，m，H-7)，1.84(2H，m，H-7'，8)，1.66(1H，m，H-8');13C NMR(100 MHz，Acetone-d6):δC169.8(s，C-2)，165.9(s，C-5)，157.2(s，C-14)，131.6(d，C-12，16)，128.4(s，C-11)，116.0(d，C-13，15)，59.5(d，C-6)，57.2(d，C-3)，45.5(t，C-9)，36.2(t，C-10)，28.9(t，C-7)，22.9(t，C-8)。以上數(shù)值與文獻(xiàn)數(shù)值相符［5］。

吡啶-3-甲酰胺 3 白色粉末;1H NMR(400 MHz，CD3OD):δH9.01(1H，m，H-6)，8.68(1H，m，H-3)，8.28(1H，m，H-4)，7.54(1H，m，H-5);13C NMR(100 MHz，CD3OD):δC169.8(s，C-7)，152.8(d，C-2)，149.4(d，C-6)，137.3(d，C-4)，131.4(s，C-3)，125.1(d，C-5)。以上數(shù)值與文獻(xiàn)數(shù)值相符［6］。

胸苷 4 白色粉末;ESI-MSm/z:307［M+Na］+.1H NMR(400 MHz，CD3OD):δH7.82(1H，d，J=1.0 Hz，H-6)，6.28(1H，t，J=6.9 Hz，H-1')，4.40(1H，dd，J=5.9，3.4 Hz，H-3')，3.90(1H，dd，J=6.7，3.3 Hz，H-4')，3.76(2H，m，H-5')，2.22(2H，m，H-2')，1.88(3H，d，J=1.0 Hz，H-7);13C NMR(100 MHz，CD3OD):δC166.4(s，C-4)，152.4(s，C-2)，138.2(d，C-6)，111.5(s，C-5)，88.8(d，C-1')，86.2(d，C-3')，72.2(d，C-4')，62.8(t，C-5')，41.2(t，C-2')，12.4(q，C-7)。以上數(shù)值與文獻(xiàn)數(shù)值相符［7］。

戊內(nèi)酰胺 5 白色粉末;1H NMR(600 MHz，CD3OD):δH4.71(1H，s，NH)，3.30(2H，m，H-6)，2.33(2H，m，H-3)，1.82(2H，m，H-4)，1.79(2H，m，H-5);13CNMR(150 MHz，CD3OD):δC175.0(s，C-2)，43.0(t，C-6)，32.0(t，C-3)，23.0(t，C-5)，21.7(t，C-4)。以上數(shù)值與文獻(xiàn)數(shù)值相符［8，9］。

5-(羥甲基)-1H-吡咯-2-醛 6 無色膠狀物;1H NMR(600 MHz，CD3OD):δH9.26(1H，s，CHO)，6.87(1H，d，J=3.7 Hz，H-3)，6.16(1H，d，J=3.7 Hz，H-4)，4.50(2H，s，CH2OH);13C NMR(150 MHz，CD3OD):δC180.6(s，CHO)，143.4(s，C-5)，134.0(s，C-2)，124.8(s，C-3)，110.4(d，C-4)，57.8(t，CH2OH)。以上數(shù)值與文獻(xiàn)數(shù)值相符［10］。

環(huán)(脯氨酸-纈氨酸)7 無色晶體;1H NMR(400 MHz，CDCl3):δH5.90(1H，br s，NH)，4.08(1H，t，J=7.4 Hz，H-6)，3.94(1H，s，H-3)，3.62(1H，m，H-9)，3.55(1H，m，H-9)，2.63(1H，m，H-1')，2.37(1H，m，H-7)，2.04(2H，m，H-7，8)，1.91(1H，m，H-8)，1.06(3H，d，H-2')，0.91(3H，d，H-3');13C NMR(100 MHz，CDCl3):δC170.0(s，C-5)，164.7(s，C-2)，60.3(d，C-6)，58.8(d，C-3)，45.1(t，C-9)，28.5(t，C-7)，28.3(d，C-1')，22.3(t，C-8)，19.2(q，C-2')，16.0(q，C-3')。以上數(shù)值與文獻(xiàn)數(shù)值相符［11］。

環(huán)(脯氨酸-丙氨酸)8 無色晶體;1H NMR(400 MHz，CDCl3):δH6.62(1H，br s，NH)，4.06(2H，m，H-3，6)，3.62(1H，m，H-9)，3.51(2H，m，H-9)，2.28(1H，m，H-7)，2.03(1H，m，H-7)，1.96(1H，m，H-8)，1.85(1H，m，H-8)，1.41(3H，d，H-1');13C NMR(100 MHz，CDCl3):δC170.4(s，C-5)，166.4(s，C-2)，59.2(d，C-6)，51.1(d，C-3)，45.4(t，C-9)，28.1(t，C-7)，22.7(t，C-8)，15.9(q，C-1')。以上數(shù)值與文獻(xiàn)數(shù)值相符［12］。

羥吲哚 9 白色粉末;1H NMR(600 MHz，CDCl3):δH7.59(1H，br s，NH)，7.15(2H，m，H-6，7)，6.96(1H，t，J=7.5 Hz，H-5)，6.80(1H，d，J=7.5 Hz，H-4);13C NMR(150 MHz，CDCl3):δC176.9(s，C-2)，142.1(s，C-7a)，128.0(d，C-6)，125.3(s，C-3a)，124.9(d，C-4)，122.4(d，C-5)，109.5(d，C-7)，36.1(t，C-3)。以上數(shù)值與文獻(xiàn)數(shù)值相符［13］。

1，2，3，4-四氫-1，3，4-三氧-β-咔啉 10 黃棕色粉末;1H NMR(600 MHz，C5D5N):δH8.53(1H，d，J=8.0 Hz，H-5)，7.78(1H，d，J=8.0 Hz，H-8)，7.50(1H，t，J=8.0 Hz，H-7)，7.45(1H，d，J=8.0 Hz，H-6);13C NMR(150 MHz，C5D5N):δC172.1(s，C-4)，161.5(s，C-1)，160.2(s，C-3)，139.4(s，C-13)，137.3(s，C-10)，127.7(d，C-7)，125.2(d，C-6)，125.0(s，C-12)，123.3(d，C-5)，117.9(s，C-11)，114.9(d，C-8)。以上數(shù)值與文獻(xiàn)數(shù)值相符［14］。

吲哚-3-醛 11 白色粉末;1H NMR(400 MHz，CD3OD):δH9.88(1H，s，H-10)，8.15(1H，d，J=7.3 Hz，H-5)，8.10(1H，s，H-2)，7.47(1H，d，J=8.0 Hz，H-8)，7.26(2H，m，H-6，7);13C NMR(100 MHz，CD3OD):δC187.4(s，C-10)，139.7(d，C-2)，138.0(s，C-9)，126.1(s，C-4)，125.0(d，C-5)，123.6(d，C-6)，122.4(d，C-7)，116.7(s，C-3)，113.1(d，C-8)。以上數(shù)值與文獻(xiàn)數(shù)值相符［15，16］。

黃苷12 白色粉末;ESI-MSm/z:166［M+H］+，188 ［M+Na］+.1H NMR(600 MHz，D2O):δH7.76(1H，s，H-8)，5.72(1H，d，J=6.3 Hz，H-1')，4.22(1H，dd，J=5.0，3.2 Hz，H-2')，4.07(1H，d，J=2.9 Hz，H-3')，3.71(1H，dd，J=12.8，2.7 Hz，H-4')，3.63(1H，d，J=12.8，3.5 Hz，H-5');13C NMR(150 MHz，D2O):δC157.6(s，C-6)，150.9(s，C-2)，139.1(s，C-4)，135.8(s，C-8)，115.8(s，C-5)，87.6(d，C-1')，85.4(d，C-4')，73.2(d，C-2')，70.5(d，C-3')，61.3(t，C-5')。以上數(shù)值與文獻(xiàn)數(shù)值相符［17］。

苯基丙氨酸13 白色粉末;ESI-MSm/z:265［M+Na］+.1H NMR(600 MHz，D2O):δH7.23(2H，m，H-3'，5')，7.18(1H，m，H-4')，7.13(2H，m，H-2'，6')，3.72(1H，m，H-2)，3.04(1H，m，H-3)，2.89(1H，m，H-3);13C NMR(150 MHz，D2O):δC174.7(s，C-1)，137.6(s，C-1')，130.6(d，C-3'，5')，130.1(d，C-2'，6')，128.5(d，C-4')，57.8(d，C-2)，38.8(t，C-3)。以上數(shù)值與文獻(xiàn)數(shù)值相符［18］。

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