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    不同胚胎類型對綿羊胚胎移植效果的影響

    2014-10-17 09:13:40韓志強
    黑龍江動物繁殖 2014年2期
    關(guān)鍵詞:原核囊胚綿羊

    張 亮,韓志強

    (1.黑龍江省家畜繁育指導站,哈爾濱 150069;2.黑龍江八一農(nóng)墾大學 動物科技學院,黑龍江 大慶 163319;3.黑龍江省農(nóng)墾科學院畜牧獸醫(yī)研究所 150038)

    家畜胚胎移植是繼人工授精之后,在家畜繁殖學領(lǐng)域的又一項有重大影響的生物技術(shù)。胚胎移植,特別是凍胚移植對家畜的引種、改良以及良種擴繁意義重大,越來越受到人們的重視。在歐洲,冷凍胚胎的使用率己達到47.8%,玻璃化冷凍胚胎可獲得接近鮮胚的移植妊娠率[1],與慢速冷凍[2]的移植妊娠率相似。以冷凍胚胎代替活畜引種,不但可以節(jié)省人力、物力、財力,同時可一次大量引進,而且可以把引種過程中疾病傳播的幾率降到最低限度[3]。在國內(nèi),目前綿羊胚胎移植的移植妊娠率還不太理想,仍有許多問題亟待解決。本研究探討了移植時采用不同胚胎類型對妊娠率的影響。

    1 材料與方法

    1.1 試驗動物

    選擇具有兩個以上正常情期,健康無疾病,繁殖機能正常的東北半細毛羊(3~5歲),共400只。

    1.2 試驗時間

    2005年8月15日~10月15日。2011年7~8月。

    1.3 主要試驗藥物與儀器

    氟孕酮陰道海綿栓、腹腔內(nèi)窺鏡、體視顯微鏡、可移動手術(shù)車、常規(guī)手術(shù)器械以及抗生素等。

    1.4 受體同期處理方法

    在繁殖季節(jié),給受體羊陰道內(nèi)植入孕酮海綿栓,埋植13 d。在撤栓24 h后放入試情公羊試情,記錄24~72 h內(nèi)發(fā)情的羊只,視為同期處理有效。以發(fā)情始期記為第0天,在第6天對受體羊移植。

    在原核移植實驗時,以受體埋栓當天記第0天,在埋栓的第9天早對受體進行撤栓,同時肌注200~250 IU孕馬血清促性腺激素(PMSG)。

    1.5 胚胎來源

    本試驗的進口冷凍胚胎來自澳大利亞公司的肉用品種薩??搜虻腁級胚胎;鮮胚和自制冷凍胚胎來自本場的薩福克羊,先超數(shù)排卵,然后部分胚胎采用玻璃化冷凍,制成冷凍胚胎。以上胚胎均為囊胚。

    原核胚由超數(shù)排卵獲得,供體為東北細毛羊。原核胚是在轉(zhuǎn)基因試驗中,經(jīng)過原核注射的。

    1.6 胚胎解凍

    從液氮罐中取出裝有胚胎的細管,在空氣中停留10 s,同時拔掉細管口的活塞,然后放入32℃水中20 s,剪開細管口,推出胚胎,放入I液6 min,I液為蔗糖+Holding液+乙二醇(1∶1∶1);再放入 II液6 min,II液為乙二醇+Holding液(1∶1);再在顯微鏡下檢查其數(shù)量和級別,待用。

    自制凍胚也采用上述方法解凍。

    1.7 胚胎移植

    采用腹腔內(nèi)窺鏡手術(shù)法移植。在受體羊的腹部,乳房前5 cm處的腹中線對側(cè)各開1個1 cm的小口,利用腹腔內(nèi)窺鏡配合鈍性宮鉗,觀察受體羊卵巢上的卵泡、黃體發(fā)育情況,并根據(jù)黃體情況移植。將胚胎移入卵巢上黃體發(fā)育良好的一側(cè)子宮角的前1/3處。原核胚從輸卵管傘移入。術(shù)后對創(chuàng)口進行縫合,注射青、鏈霉素各一支。

    1.8 妊娠的確定

    在移植母羊中,以最后產(chǎn)羔、可見流產(chǎn)、早產(chǎn)、死產(chǎn)為確定妊娠母羊數(shù)。

    1.9 數(shù)據(jù)分析

    采用Excel中的數(shù)據(jù)分析軟件和利用《生物統(tǒng)計附試驗設(shè)計》(第二版)進行差異顯著性分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同囊胚類型對妊娠率的影響

    本次試驗對82只同期發(fā)情的綿羊進行胚胎移植,比較了三種類型胚胎的妊娠效果。其妊娠率分別為鮮胚組59.46%、自制凍胚組21.43%、進口凍胚組35.48%,鮮胚組與兩凍胚組妊娠率差異均顯著(P<0.05),兩凍胚組差異不顯著(P>0.05)(表1)。

    表1 不同胚胎類型對妊娠率的影響

    從胚胎類型對胚胎移植效果的試驗結(jié)果可以看出,鮮胚移植明顯好于凍胚移植。這個結(jié)果與王素梅等[4]的結(jié)果相似。其鮮胚妊娠率與王金文等[5]取得的54.17%鮮胚妊娠率相似的結(jié)果。雖然自制凍胚組的妊娠率低于進口凍胚組,但差異不顯著,說明可以代替進口凍胚用于今后的凍胚生產(chǎn),為今后生產(chǎn)凍胚奠定了基礎(chǔ)。

    目前,乙二醇作為防凍劑可獲得接近鮮胚的移植妊娠率[6]。但本次顯著低于鮮胚移植,胚胎冷凍保存方面還有待于提高。

    2.2 囊胚和原核胚對妊娠率的影響

    本試驗比較了囊胚和原核胚移植的效果。見表2。

    表2 不同胚胎對妊娠率和產(chǎn)羔效率的影響

    從結(jié)果來看,原核胚的移植效果遠遠低于囊胚移植效果。其主要原因有三方面:1)在構(gòu)建轉(zhuǎn)基因原核胚的過程中,原核注射對胚胎產(chǎn)生了損傷,甚至死亡。2)在原核胚發(fā)育到囊胚的過程中,胚胎發(fā)育阻滯和早期胚胎死亡的現(xiàn)象。3)也有可能在辨認原核胚和未受精卵時發(fā)生誤判,在移植的原核胚中有未受精卵。

    在實際生產(chǎn)中,囊胚移植效果更易掌握。所以在常規(guī)綿羊胚胎移植中采用囊胚移植更能節(jié)省受體羊的費用,更利于生產(chǎn)應(yīng)用。

    3 結(jié)論

    在綿羊胚胎移植中,鮮胚移植好于凍胚移植,自制凍胚接近進口凍胚的移植水平,為日后的胚胎生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)。

    在綿羊胚胎移植中,原核胚的移植效果遠遠低于囊胚移植效果,囊胚更適合用于生產(chǎn)。

    [1] Brail G,Traldi A L,Connie Y,et al.Successful direct transfer of vitrified sheep embryos [J].Therionenolony,2001,56:299-305.

    [2] Heyman Y,Vincent C,Gamier V,et al.Transfer of frozen thawed embryos in Sheep [J].Vet Rec,1987,120:83-85.

    [3] 付靜濤,朱士恩.綿羊同期發(fā)情與冷凍胚胎移植技術(shù)的研究[J].中國畜牧雜志,2005,41(8):32-33、57

    [4] 王素梅,元美玉.非繁殖季節(jié)胚胎因素對綿羊胚胎移植影響的研究 [J].中國畜牧獸醫(yī),2005,32(7):30-31

    [5] 王金文,張果平,李煥玲.杜泊綿羊超數(shù)排卵與胚胎移植試驗 [J].中國草食動物,2006,26(1):14-15

    [6] Brebion P,Baril G,Cognie Y,et al.Embryo transfer in sheep and goat[J].Ann Zoot,1992,41:331-339.

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