鴨源腸球菌人工感染雛鴨的病理學(xué)觀察

韓梅紅 （長江大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，湖北 荊州 434025）

谷長勤 （華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，湖北 武漢 430070）

鴨源腸球菌人工感染雛鴨的病理學(xué)觀察

韓梅紅 （長江大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，湖北 荊州 434025）

谷長勤 （華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，湖北 武漢 430070）

以臨床分離得到的1株鴨源腸球菌接種雛鴨，觀察感染后雛鴨的主要臨床癥狀和病變特點，并測定感染雛鴨的發(fā)病率和死亡率，光鏡下觀察各組織病變切片，探討了該菌株對雛鴨的致病力和病變特點。結(jié)果表明，該病原主要侵害雛鴨心臟、肝臟、脾臟和肺臟，最明顯的病變特征是引起雛鴨心包積液，心外膜和氣囊表面附著有纖維素性炎性滲出物，肝臟腫大、淤血、出血和壞死，以及脾臟腫大等；鏡下見病鴨心肌出血，肝臟炎性細胞浸潤以及脾臟淋巴細胞減少等。揭示該株腸球菌可引起雛鴨感染發(fā)病并導(dǎo)致組織病變而死亡。

腸球菌；雛鴨；病理變化

家禽的急性腸球菌 （原屬于鏈球菌屬D群）感染最初見于1902年Moore等報道的雞類中風(fēng)樣敗血癥［1］。1932年Vaillancourt等首次報道火雞的鏈球菌?。?］。1927年Katanbaf等首次報告與鏈球菌有關(guān)的細菌性或贅生性心內(nèi)膜炎［1］。

禽類腸球菌感染雖不常見，但卻呈世界范圍分布［2－3］。該病引起的急、慢性感染造成的損失可達50%。該病急性感染時，主要造成全身敗血性變化，并以發(fā)病快、死亡率高為其特點［2－3］。目前國內(nèi)外尚未見腸球菌感染雛鴨的病理學(xué)研究的詳細報道。本研究初步探討了腸球菌對雛鴨的致病性和病變特點，以期為全面認識鴨源腸球菌的致病機理提供可借鑒的資料。

1 材料與方法

1.1 材料

供試菌株由湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所提供，分離于自然感染發(fā)病瀕死期和已死亡鴨的肝臟、心腔血和腦組織液。經(jīng)鑒定為糞腸球菌 （另文發(fā)表）。供試鴨為1日齡北京麗佳鴨，20只，購自武漢市春江種鴨場，自由采食飲水；飼料為不添加任何抗菌藥物的肉用仔鴨全價飼料，供試雛鴨飼養(yǎng)在專門的試驗鴨舍內(nèi)，鐵絲網(wǎng)吊床、水槽、料槽連同鴨舍一起用新潔爾滅消毒液清洗，并用甲醛熏蒸徹底消毒。

1.2 試驗方法

（1）菌懸液的制備 將供試菌株接種于含5%綿羊血的THB瓊脂培養(yǎng)基上，37℃恒溫培養(yǎng)24h，挑取單個典型菌落接種于THB液體培養(yǎng)基，37℃恒溫培養(yǎng)18h，采用平板表面涂布法計數(shù)并稀釋至濃度為1.0×109cfu／ml備用。

（2）感染雛鴨發(fā)病、死亡規(guī)律及臨床癥狀觀察 20只雛鴨接種前先用0.05%強力霉素飲水5～7d，空白飼養(yǎng)2周后隨機取樣經(jīng)血液檢查無細菌感染，隨機等分為2組，試驗組經(jīng)腿部肌肉注射稀釋好的菌懸液0.5ml，對照組腿部肌肉注射0.5ml無菌THB。

接種后密切觀察感染鴨的發(fā)病、死亡情況，包括精神、食欲、體格狀況、運動能力、被毛光澤度以及糞便和天然孔分泌物性狀。每天隨機抽樣采集血液和泄殖腔擦拭物進行細菌學(xué)檢查。記錄各組鴨最早發(fā)病時間和發(fā)病鴨數(shù)量、最早死亡時間和死亡鴨數(shù)量。每天觀察3～4次，連續(xù)觀察14d。

（3）病理學(xué)觀察 死亡鴨及時尸檢，未死亡的于接種后21d頸靜脈放血處死并剖檢。所有鴨在進行剖檢之前首先觀察體表有無炎癥反應(yīng)，打開并檢查趾關(guān)節(jié)腔內(nèi)有無積液，然后依次打開腹腔、胸腔、口腔和顱腔，觀察氣囊、肝臟、脾臟、胃、十二指腸和胰臟、腎臟、法氏囊、心臟、肺臟、胸腺、氣管和腦等組織器官的大體病變，并取病變組織置于10%中性福爾馬林溶液中固定，常規(guī)石蠟包埋，制作切片，H.E.染色，光鏡下觀察各組織病變。

（4）細菌學(xué)檢查 進行細菌學(xué)檢查的樣品 （包括血液、泄殖腔擦拭物和肝臟等）均在無菌條件下涂抹并用接種環(huán)劃線接種在THB血瓊脂培養(yǎng)基上，37℃恒溫培養(yǎng)18～24h，觀察菌落形態(tài)，挑取單菌落進行革蘭氏染色，油鏡下觀察細菌形態(tài)。以接種培養(yǎng)基后分離到較純的、與試驗接種菌具有一致的培養(yǎng)特性和細菌形態(tài)者，認為該樣品中分離的細菌來自于腿部肌肉注射的試驗菌液，判為細菌分離陽性。

2 結(jié)果與分析

2.1 雛鴨發(fā)病情況及臨床癥狀觀察

試驗組感染后18h內(nèi)即表現(xiàn)臨床癥狀，且癥狀較其他組明顯，病鴨主要表現(xiàn)為精神高度沉郁，食欲減少或廢絕，眼瞼腫脹、流淚，拉黃白或灰綠色稀糞，病鴨消瘦，喜臥惡動；4d內(nèi)有3只鴨出現(xiàn)跛行，之后臥地不起，直至死亡 （圖1）；死亡鴨趾關(guān)節(jié)略顯腫大，觸摸有波動感，剖開可見關(guān)節(jié)腔內(nèi)有黃色液體。

該組鴨8d內(nèi)全部發(fā)病，發(fā)病高峰期集中在4～6d，至21d試驗結(jié)束時，共有5只 （50%）死亡，肝臟、血液、泄殖腔樣品細菌分離率及總細菌分離率分別為10／10、9／10、7／10和26／30 （表1）。對照組鴨喜食、好動，羽毛滑亮，生長速度快，無任何異常表現(xiàn)。

圖1 試驗組發(fā)病、死亡的鴨

表1 腸球菌感染雛鴨的發(fā)病率、死亡率與細菌分離率（n＝10）

2.2 感染鴨組織病理學(xué)變化

試驗鴨注射菌液后導(dǎo)致心、肝、脾、肺、腎、腸等器官不同程度的損傷。各臟器病理學(xué)變化主要表現(xiàn)如下。

心臟：眼觀多數(shù)鴨心包積液 （6／10），液體呈淺黃色，稍混濁，心外膜上附有多量白色絮狀物（8／10），心壁上有條索狀出血斑塊 （5／10）；鏡下心肌出血明顯 （圖2），肌纖維斷裂、溶解，心內(nèi)膜輕微出血。

肝臟：眼觀肝臟稍腫大 （6／10），質(zhì)脆，肝臟表面散在分布粟粒大小的出血點，或有炎性滲出物；鏡下見肝竇狀隙擴張，炎性細胞浸潤，有的發(fā)生脂肪變性，肝細胞腫脹，胞漿內(nèi)有較大的空泡 （圖3），淤血較明顯，另見有肝細胞壞死現(xiàn)象。

脾臟：眼觀脾腫大，邊緣鈍圓 （6／10）；鏡下組織結(jié)構(gòu)疏松，細胞排列松散，淋巴細胞減少，網(wǎng)狀細胞明顯 （圖4），脾竇和脾靜脈淤血。

肺臟：眼觀肺淤血明顯；鏡下可見肺泡腔內(nèi)有紅細胞聚集，肺泡壁毛細血管充血 （圖5），有的肺泡間質(zhì)增寬，肺毛細管腔內(nèi)有脫落的上皮細胞。

腎臟：眼觀無明顯病變；鏡下間質(zhì)血管輕微淤血，少數(shù)腎小管上皮細胞壞死、脫落。

十二指腸：眼觀無明顯病變。鏡下漿膜層水腫增厚，肌層壞死、溶解。

氣囊：眼觀氣囊稍渾濁，囊膜增厚，有少量纖維素性炎性滲出物 （6／10）。

法氏囊：眼觀無明顯異常。鏡下見法氏囊間質(zhì)水腫 （圖6），皮質(zhì)和髓質(zhì)淋巴細胞減少。

腦：眼觀無明顯異常。鏡下可見神經(jīng)細胞腫脹、變性，中央染色質(zhì)溶解。

胰臟和胸腺：眼觀和鏡下均未見明顯異常。

對照組：各臟器眼觀和鏡下均未見異常。

圖3 肝臟脂肪變性 （400×）

圖2 心肌出血 （100×）

圖5 肺淤血、出血 （400×）

圖4 脾臟淋巴細胞減少，網(wǎng)狀細胞增多 （400×）

3 討論

腸球菌病是一種主要侵害機體實質(zhì)器官的急性敗血性疾?。?］。本研究結(jié)果揭示，該病的發(fā)病機理可能是病原菌侵入機體后，在感染局部引起炎癥反應(yīng)，表現(xiàn)為炎性腫脹和纖維素性炎性滲出；此時機體可能調(diào)動起全身的免疫器官，用以抵制病原菌的侵害作用，病理表現(xiàn)為脾臟的多核巨細胞和網(wǎng)狀細胞大量增生；在機體損傷與抗損傷的斗爭過程中，免疫器官可能也遭到損傷，病理表現(xiàn)為脾臟淋巴細胞的減少；此時病原菌乘虛而入，從感染灶不斷侵入血液，經(jīng)血液擴散全身，從而引起全身性敗血癥變化，最后機體常因多器官功能衰竭而死亡。

圖6 法氏囊水腫 （100×）

本研究中菌株對雛鴨的發(fā)病率、死亡率和各組織樣品的細菌分離率是判斷致病力強弱的重要指標(biāo)。Vanrobaeys等［4］認為，鏈球菌發(fā)病率低于15%者視為低致病力菌株，高于65%者視為高致病力菌株，15%～65%者視為中等致病力菌株。本研究中感染雛鴨的發(fā)病率發(fā)病率、死亡率以及肝臟、血液、泄殖腔各組織樣品細菌分離率分別為100%、50%、10／10、9／10和7／10，可見其致病力相當(dāng)強。

從感染雛鴨的組織病理學(xué)變化來看，該病原主要侵害雛鴨的心臟、肝臟、脾臟和肺臟等，最明顯的病變特征是引起心包積液，心外膜和氣囊表面附著有纖維素性炎性滲出物，肝臟腫大、淤血、出血，炎性細胞浸潤；脾臟腫大，淋巴細胞減少；肺淤血等。綜合以上分析，試驗菌株能引起雛鴨感染發(fā)病并導(dǎo)致組織病變而死亡。

［1］Saif Y M （蘇敬良，高 福，索勛譯）.禽病學(xué) （第11版）［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2005：917-926.

［2］卡爾尼克B W（高 福，蘇敬良譯）.禽病學(xué) ［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)科技出版社，1999：377-383.

［3］楊勁松，包幼迪.腸球菌致病性初探 ［J］.中國人獸共患病雜志，1997，13（6）：33-35.

［4］Vanrobaeys M，De Herdt P，Ducatelle R，etc.Extracellular proteins and virulence in Streptococcus bovis isolates from pigeons［J］.Vet Microbiol，1997，59：59-66.

［5］李光輝.腸球菌感染研究進展 ［J］.國外醫(yī)學(xué)內(nèi)科學(xué)分冊，1999，26（11）：471-474.

Pathological Observation of Duck Artifically Infected withEnterococcus

HAN Mei－h(huán)ong（College of Animal Science，Yangtze University，Jingzhou，Hubei434025，China）
GU Chang－qin（College of Animal Medicine，Huazhong Agricultural University，Wuhan，Hubei430070，China）

One strain ofEnterococcusisolated from dying ducks was inoculated into laboratory ducks.The clinical signs and pathological changes of the experimental ducks were observed and the morbidity and mortality were determined in order to determine the infection rate and virulence of the strain.Furthermore，the paraffin sections of main organs were observed under light microscopy.In results，the strain were virulent to ducks and the heart，liver，lung and spleen of the ducks were damaged.The most obvious pathologic character is pericardial effusion，cellulose inflammatory exudate is attached to the surface of the epicardial and airbag.Additionally，liver enlargement，congestion，hemorrhage and necrosis；microscopically，the duck’s myocardial hemorrhage，infiltration of inflammatory cells and spleen lymphocytes decreased.The resules indicate that the strain ofEnterococcusmay attack the ducks and cause tissue lesions and even death.

Enterococcus；duck；pathogenicity

S858.32

A

1673-1409 （2013）29-0025-03

2013-05-25

韓梅紅 （1979-），女，碩士，講師，主要從事免疫病理學(xué)研究。