影響血凝和血凝抑制試驗結(jié)果的因素分析

沈文斌

(新疆巴州若羌縣人民醫(yī)院，新疆 巴州 841800)

影響血凝和血凝抑制試驗結(jié)果的因素分析

沈文斌

(新疆巴州若羌縣人民醫(yī)院，新疆 巴州 841800)

目的對影響血凝和血凝抑制試驗結(jié)果的因素進行統(tǒng)計和分析。方法選取2011年12月至2012年12月進行檢驗206例，總結(jié)和分析在檢驗中影響血凝抑制結(jié)果的因素。結(jié)果通過分析和總結(jié)，影響血凝和血凝抑制試驗結(jié)果的因素為：樣品采集和處理、試劑的配制與儲藏、器材的選擇和使用、單位抗原的配制、加樣、溫度、結(jié)果判定等。結(jié)論在檢驗過程中針對影響血凝和血凝抑制試驗結(jié)果的因素進行注意和避免，能夠有效的提高檢驗的準(zhǔn)確性。

血凝；血凝抑制；試驗結(jié)果；影響因素

血凝和血凝抑制試驗是化驗室中進行動物疫病診斷和免疫監(jiān)測最常用的試驗方法之一，如禽流感、口蹄疫、SARS等疫病的化驗室診斷或免疫監(jiān)測在基層多使用這種試驗方法[1]。今年在我國其他省市發(fā)生多起禽流感等重大動物疫病威脅我省我市。在這種局勢下，省、市、縣等各級畜牧獸醫(yī)部門都對禽流感病毒進行了大量的化驗室監(jiān)測。然而，準(zhǔn)確掌握血凝和血凝抑制試驗的操作以及分析，對禽流感等重大動物疫病的診斷和免疫監(jiān)測尤為重要[2]。為了更好的提高檢驗的準(zhǔn)確性，本文對影響血凝和血凝抑制試驗結(jié)果的因素進行分析，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 血凝和血凝抑制試驗理論和方法

血凝抑制試驗和血凝主要是對血清抗體的檢測試驗。血凝原理是病毒或者是病毒的血凝素，對一種或是幾種動物血清紅細(xì)胞產(chǎn)生凝集反應(yīng)。具體的方法是標(biāo)準(zhǔn)抗原同雞紅細(xì)胞。血凝抑制反應(yīng)(HI)：當(dāng)病毒的懸液中先加入特異性抗體，且這種抗體的量足以抑制病毒顆?；蚱溲貢r，則紅細(xì)胞表面的受體就不能再與病毒顆?；蚱溲刂苯咏佑|。這時紅細(xì)胞的凝集現(xiàn)象就被抑制，方法是將檢測出血凝單位的標(biāo)準(zhǔn)抗原配制后與受檢血清反應(yīng)，再加入紅細(xì)胞作用。這步試驗用于檢測受檢血清抗體血凝抑制滴度，判定受檢血清抗體是否為陽性[3]。

2 影響影響血凝和血凝抑制試驗結(jié)果的因素

2.1 樣品采集和處理

在檢驗過程中樣本的采集常規(guī)溫度適宜在約20～25℃，有利于血壓樣本的凝固，常規(guī)采集血液標(biāo)本量約為2.5mL，注入試管內(nèi)置于空氣中月40min，血液標(biāo)本凝固后整理包扎放置冷藏室中放置6～8h，離心取上清液。如發(fā)生膠凍狀可使用牙簽擠出上清液，進行檢驗。樣本在運送過程中應(yīng)避免劇烈的震蕩、溫度過低、冷藏時間過常等情況發(fā)生。

2.2 試劑的配制與儲藏

配制阿氏液，pH值調(diào)節(jié)精確后，進行高壓滅菌后，在標(biāo)準(zhǔn)的溫度下進行儲備過夜，在加入稀釋液、1%紅細(xì)胞懸液應(yīng)準(zhǔn)確稱量、抗原陽性血清的判定，避免溫度過低產(chǎn)生血液標(biāo)本的凝集或是溫度過高導(dǎo)致樣本發(fā)生性狀改變。

2.3 器材的選擇和使用

在進行標(biāo)本的取樣和制備的過程中，使用標(biāo)準(zhǔn)加樣器，選擇密封良好的一次性吸頭避免反復(fù)使用或是重復(fù)使用，避免儀器發(fā)生污染和提取樣本劑量不標(biāo)準(zhǔn)。微量反應(yīng)板使用完畢后應(yīng)反復(fù)多次清洗，避免污染影響下次使用。

2.4 單位抗原的配制

根據(jù)血凝試驗結(jié)果，配制4單位抗原，4單位抗原宜現(xiàn)用現(xiàn)配。為防止4單位抗原配制不準(zhǔn)確，在HI試驗前必須做抗原回歸試驗[4]。

2.5 加樣、溫度、結(jié)果判定

在紅細(xì)胞懸液和抗體的檢驗前應(yīng)進行充分的搖勻，進行多個檢驗板加樣時應(yīng)緩慢進行，避免加樣太快，在進行加樣器加樣時應(yīng)垂直滴入，避免液體和孔內(nèi)液體相接觸，避免發(fā)生污染影響檢驗結(jié)果。檢驗樣本的溫度適宜控制在20～25℃，避免溫度過高導(dǎo)致樣本檢驗結(jié)果發(fā)生誤差或是溫度過低導(dǎo)致樣本發(fā)生性狀改變，檢驗失敗。依據(jù)檢驗項目標(biāo)準(zhǔn)進行檢驗結(jié)果的判定，如參照錯誤標(biāo)準(zhǔn)進行對比導(dǎo)致檢驗結(jié)果出現(xiàn)誤差，或是導(dǎo)致檢驗結(jié)果的錯誤判定。

3 討 論

運用血清抗體進行的血凝與血凝抑制試驗對于動物傳播疾病的免疫監(jiān)測與疫情的控制是非常必要的。然而在檢測過程中，各種因素的干擾可能使結(jié)果出現(xiàn)假陽性等不真實的現(xiàn)象，從而影響了醫(yī)院工作人員對疾病的確診。目前也有許多有關(guān)血凝與血凝抑制試驗影響因素的分析的文獻[5]。因素本文通過對檢驗206例檢驗樣本的資料進行分析，通過分析和總結(jié)，影響血凝和血凝抑制試驗結(jié)果的因素較為復(fù)雜主要為：樣品采集和處理、試劑的配制與儲藏、器材的選擇和使用、單位抗原的配制、加樣、溫度、結(jié)果判定等。

綜上所述，在檢驗過程中針對影響血凝和血凝抑制試驗結(jié)果的因素進行注意和避免，能夠有效的提高檢驗的準(zhǔn)確性。這就要求在樣本的采集和樣本處理過程中，應(yīng)嚴(yán)格遵守各項操作流程，在試劑的配制和儲備、器材和設(shè)備的使用過程中、對加樣的頻率、溫度的控制和結(jié)果的判定均應(yīng)注意依據(jù)操作規(guī)程進行，應(yīng)盡量提高檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。

[1] 黃蘭香,李建新,尹振海,等.新城疫HA'Hl試驗中可用豚鼠醛化紅細(xì)胞代替雞新鮮紅細(xì)胞[J].家禽科學(xué),2005(12):18-19.

[2] 杭柏林,胡建和,劉麗艷,等.影響血凝抑制試驗因素的研究進展[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(3):112-113..

[3] 張評滸,唐應(yīng)華,仇旭升,等.不同家禽紅細(xì)胞懸液對禽流感血清抗體檢測的影響[J].中國獸醫(yī)科技,2005,35(4):267-271.

[4] 盧玉葵,劉偉云,吳霞芳.幾種常用NDHI試驗方法的比較與分析[J].佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院學(xué)報:自然科學(xué)版,2001,19(z):75-77.

[5] 李清竹.影響血凝和血凝抑制試驗結(jié)果的因素[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī),2012(5):70.

R446

A

1671-8194（2013）17-0368-01