中藥兩面針的質(zhì)量控制研究進(jìn)展

柏 帆

廣西壯族自治區(qū)柳州市食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 柳州 545006

中藥兩面針的質(zhì)量控制研究進(jìn)展

柏 帆

廣西壯族自治區(qū)柳州市食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 柳州 545006

概述了1997～2012年來(lái)兩面針的定性鑒別和含量測(cè)定方法質(zhì)量控制研究的進(jìn)展及現(xiàn)狀，為合理建立兩面針的質(zhì)量評(píng)價(jià)體系提供參考。

兩面針；定性鑒別；含量測(cè)定

中藥兩面針為蕓香科花椒屬植物兩面針［Zanthoxylum nitidum（Roxb.）DC.］的干燥根［1］，別名入地金牛、蔓椒、兩背針、雙面刺等。最早收載于清代趙其光所著的 《本草求原》，名入地金牛［2］，其后在 《嶺南采藥錄》、《中藥大辭典》、《全國(guó)中草藥匯編》、《中國(guó)藥典》均有收載。兩面針性味苦、辛，平，有小毒；具有活血化瘀，行氣止痛，祛風(fēng)通絡(luò)，解毒消腫的功效；用于跌打損傷，胃痛，牙痛，風(fēng)濕痹痛，毒蛇咬傷，燒燙傷。兩面針含有多種活性成分，主要為：生物堿、香豆素、木脂素、甾體及其苷、黃酮及其苷、醌類以及萜類和有機(jī)酸類等［3］。

兩面針是我國(guó)豐富的傳統(tǒng)中藥資源寶庫(kù)中的一種重要而有代表性的中草藥，廣泛分布于廣西、廣東、云南、臺(tái)灣等南方省份。目前，兩面針市場(chǎng)需求量大，在醫(yī)藥化學(xué)和天然產(chǎn)物化學(xué)中占有重要地位?，F(xiàn)將兩面針定性鑒別、含量測(cè)定方面的質(zhì)量控制方法研究進(jìn)展作如下綜述。

1 定性鑒別

1977年版中國(guó)藥典一部首次收載兩面針?biāo)幉?，檢測(cè)項(xiàng)目有性狀鑒別和理化

鑒別1項(xiàng) （試管法檢查生物堿）［4］，而1985年版、1990年版中國(guó)藥典則將該品種刪除。

1991年，溫尚開［5］針對(duì)市場(chǎng)上流通的兩面針?biāo)幉募捌鋫纹愤M(jìn)行了藥材性狀、組織顯微、薄層層析，紫外光譜等方面的比較研究。1994年，賴茂祥，饒偉源［6］也報(bào)道了兩面針（Z．nitidum）莖及三種偽品飛龍掌血（Toddaliaasiaiica）、竹葉椒（Z．a(chǎn)rmatum）和刺殼椒（Z．echinocarpum）莖的性狀、顯微特征、薄層層析和紫外吸收光譜鑒定結(jié)果。為兩面針在采集、流通及應(yīng)用提供了參考依據(jù)。

1996年廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn) （第二冊(cè)）收載兩面針，檢測(cè)項(xiàng)目有性狀鑒別、顯微鑒別 （根橫切面）1項(xiàng)、理化鑒別1項(xiàng) （試管法檢查生物堿）。

1995年版中國(guó)藥典一部重新收載兩面針，定性鑒別項(xiàng)目有性狀鑒別、顯微鑒別 （根橫切面）1項(xiàng)、理化鑒別1項(xiàng) （試管法）、薄層鑒別2項(xiàng) （檢查氯化兩面針堿、乙氧基白屈菜紅堿）［7］；2000年版［8］、2005年版［9］、2010年版中國(guó)藥典均繼續(xù)收載兩面針，定性鑒別除取消專屬性不強(qiáng)的理化鑒別 （試管法）外，其余項(xiàng)目同1995年版中國(guó)藥典。

近年來(lái)，一些新的定性鑒別方法在兩面針?biāo)幉闹型茝V應(yīng)用。2006年，顏玉貞，謝培山［10］等率先利用高效液相色譜檢測(cè)兩面針?biāo)幉闹械募句@類生物堿，在以ZORBAX XDB－C8（4.6×150mm，5μm）為色譜柱，流動(dòng)相為3%冰醋酸－二乙胺－甲－乙腈，柱溫20℃，體積流量0.8 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)250 nm、270 nm的條件下，兩面針液相色譜主要由白屈菜紅堿（Chelerythrine）、氯化兩面針堿（Nitidine chloride）等21個(gè)色譜峰以其相對(duì)穩(wěn)定的峰與峰的積分比值所提供的以生物堿為主體的成分分布信息組成，且顯示生物堿主要分布于根皮部，地上莖部分生物堿含量很低，為有效地分析和評(píng)價(jià)兩面針的質(zhì)量通過(guò)了實(shí)驗(yàn)方法。

劉華鋼，馮看［11］等對(duì)兩面針總生物堿進(jìn)行高效液相色譜法（HPLC）指紋圖譜的研究。采用HPLC梯度洗脫測(cè)定了33批兩面針總生物堿的指紋圖譜，在色譜柱為Ultimate TM XB－C8柱（5μm，4.6 mm×250 mm），流動(dòng)相為乙腈－水相（0.2%磷酸＋0.2%三乙胺），柱溫35℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm的條件下，HPLC指紋圖譜標(biāo)定了24個(gè)共有特征峰，指紋圖譜精密度較高，24 h穩(wěn)定性較好，重復(fù)性良好，為科學(xué)評(píng)價(jià)及有效控制兩面針質(zhì)量提供可靠方法。

劉華鋼，雷欣潮［12］等再次以兩面針對(duì)照藥材和鵝掌楸堿、氯化兩面針堿、乙氧基白屈菜紅堿、L－芝麻素等4個(gè)活性成分為指標(biāo)，通過(guò)高效液相色譜建立了兩面針?biāo)幉奶卣髦讣y圖譜的質(zhì)量評(píng)價(jià)分析方法，并對(duì)市場(chǎng)上購(gòu)買的25批兩面針?biāo)幉倪M(jìn)行鑒別分析，結(jié)果僅有8批藥材質(zhì)量較好，7批藥材為次品，7批為偽品飛龍掌血，剩余3批藥材也是兩面針偽品，其合格率僅占32%。說(shuō)明兩面針的資源已嚴(yán)重匱乏，市場(chǎng)上流通的兩面針?biāo)幉囊源纹?、偽品居多，且該方法能有效的檢測(cè)市場(chǎng)流通中兩面針?biāo)幉牡馁|(zhì)量。另外，秦澤慧，談?dòng)ⅲ?3］等采用液質(zhì)聯(lián)用指紋圖譜檢測(cè)方法，分析了15批廣西產(chǎn)兩面針?biāo)幉?，為完善其質(zhì)量評(píng)價(jià)提供依據(jù)。

陳鐵寓，彭興［14，15］等采用傅里葉變換紅外光譜法建立了2種兩面針定性鑒別的新檢測(cè)方法。第一種是利用傅里葉變換紅外光譜法及二維紅外相關(guān)光譜法對(duì)兩面針與單面針進(jìn)行一維、二維紅外光譜特征及其差異研究探討，發(fā)現(xiàn)兩面針與單面針的一維紅外光譜差別甚小，但通過(guò)二階導(dǎo)數(shù)光譜結(jié)合二維傅里葉紅外光譜的方法可以將兩者完全區(qū)分開采，且方法快速、廉價(jià)、有效，是檢測(cè)單面針冒充兩面針的常用方法。第二種是采用衰減全反射傅立葉變換紅外光譜法（ATR－FT－IR）分別對(duì)不同產(chǎn)地兩面針主根和須根的內(nèi)、外皮以及木部進(jìn)行研究，利用不同產(chǎn)地、不同部位的兩面針樣品地紅外光譜特征，可將不同產(chǎn)地、不同部位的兩面針樣品區(qū)分開，是快速、簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法。

2 含量測(cè)定

1995年版中國(guó)藥典兩面針含量測(cè)定項(xiàng)目 （薄層掃描

法）以氯化兩面針堿（C21H18NO4·Cl）為對(duì)照品，干燥品以兩面針堿（C21H18NO4）計(jì)，其含量不得少于0.25%。2000、2005年版藥典兩面針含量測(cè)定項(xiàng)目與1995年版相同，而2010年版藥典則將檢測(cè)方法改為靈敏度高、重現(xiàn)性好、操作簡(jiǎn)便的高效液相色譜法，，控制指標(biāo)也改為干燥品以氯化兩面針堿（C21H18NO4·Cl）計(jì)，且含量不得少于0.13%。

除上述藥典收載的含量檢測(cè)方法及指標(biāo)控制成分外，許多專家學(xué)者對(duì)兩面針其他活性成分含量測(cè)定方法進(jìn)行了研究探討。張守堯，周本杰［16］等采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定兩面針不同部位中L－芝麻脂素和L－細(xì)辛脂素的含量，在色譜柱為HYPERSIL BDS C18，流動(dòng)相為乙腈：水（50：50），檢測(cè)波長(zhǎng)287nm的條件下，L－芝麻脂素和 L－細(xì)辛脂素的平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差分別為100.13%、1.61%和101.24%、1.46%，且含量以兩面針原根部的最高。

劉紹華，覃青云［17，18］等采用HPLC法對(duì)廣西十個(gè)不同產(chǎn)地的兩面針中具有抗腫瘤活性的氯化兩面針堿、具有鎮(zhèn)痛活性的L－芝麻脂素含量及具有鎮(zhèn)痛、抗炎和止血活性的新棒狀花椒酰胺含量進(jìn)行了分析和比較。發(fā)現(xiàn)在不同產(chǎn)地兩面針中的氯化兩面針堿和L－芝麻脂素含量差別都較大，廣西百色兩面針中的氯化兩面針堿和L－芝麻脂素含量均最高，分別為0.467%和0.160%，廣西金秀的含量均最低，分別為0.0490%和0.0370%；新棒狀花椒酰胺的含量亦差別較大，金秀的含量最高，達(dá)0.468%，桂林的含量最低，為0.009%。該研究為兩面針在抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、抗炎和止血等方面的開發(fā)利用提供了可靠的科學(xué)依據(jù)，具有重要應(yīng)用價(jià)值。梁廣華，張建浩［19］利用HPLC測(cè)定兩面針中乙氧基白屈菜紅堿和氯化兩面針堿的含量，在流動(dòng)相為1 mmol/L庚烷磺酸鈉－乙腈（30∶70），檢測(cè)波長(zhǎng)272 nm的條件下，結(jié)果重現(xiàn)性較好。

龍盛京，章偉［20，21］等采用酸性染料比色法及紫外分光光度法測(cè)定兩面針中總生物堿的含量，為無(wú)儀器設(shè)備條件的基層單位控制兩面針質(zhì)量提供簡(jiǎn)便快捷，準(zhǔn)確易行的方法。曹一帆，程齊來(lái)［22］等運(yùn)用火焰原子吸收分光光度法和石墨爐法測(cè)定兩面針樣品中Fe、Cu、Zn、Mg、Ca、Pb、Sn的含量發(fā)現(xiàn)，兩面針中Ca、Fe、Zn的含量較高。

王冬梅［23］等應(yīng)用電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法（ICP－AES）對(duì)廣西10個(gè)不同產(chǎn)地兩面針?biāo)幉闹械?4種微量元素進(jìn)行測(cè)定。通過(guò)硝酸－高氯酸消解體系，有效地徹底消解樣品中的有機(jī)物，在確定的光譜條件下，各元素加樣回收率（n＝6）為90.01%～104.14%，精密度均＜3%，且不同產(chǎn)地兩面針?biāo)幉闹械母鞣N微量元素含量差別明顯，為兩面針微量元素和藥效相關(guān)性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。馮潔［24］等應(yīng)用電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法 （ICPAES）和原子熒光光譜法（ASF）測(cè)定兩面針不同入藥部位中的20種金屬元素含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Na在根中的含量比莖、葉高，而K、Ca、Mn和Mg在葉中的含量較根、莖高，20種元素回收率為93.9%～102.2%，RSDS均小于2.0%。為研究擴(kuò)大中藥兩面針?biāo)幱弥参镔Y源及綜合開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

3 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，兩面針定性鑒別主要是性狀、顯微、薄層三大常規(guī)項(xiàng)目，高效液相指紋圖譜和紅外光譜法應(yīng)也用于定性鑒別。兩面針含量測(cè)定廣泛采用高效液相色譜法，HPLC具有靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度高的特點(diǎn)，是目前分析研究中最為常用的方法，2010年版中國(guó)藥典做到了與時(shí)俱進(jìn)。而原子吸收分光光度法、電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜法（ICP－AES）和原子熒光光譜法（ASF）則主要測(cè)定藥材中的金屬元素。特別值得關(guān)注的是，近幾年來(lái)采用高效液相色譜建立兩面針?biāo)幉奶卣髦讣y圖譜，將指紋圖譜中標(biāo)示物質(zhì)群特征峰與藥效結(jié)果對(duì)應(yīng)起來(lái)，闡明了指紋圖譜特征與藥效之間的相互關(guān)系，該方法提供了中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)新模式，也為合理建立兩面針的質(zhì)量評(píng)價(jià)體系提供了參考。另外，兩面針的野生資源嚴(yán)重匱乏，人工栽培品種和野生品種功能是否等效，尚未有對(duì)農(nóng)藥殘留的報(bào)道，需要加強(qiáng)對(duì)兩面針中農(nóng)藥殘留、重金屬的含量控制，從源頭控制其殘留量，以保證藥材質(zhì)量。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（2010年版一部）［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：157－158.

［2］廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳.廣西中藥材第二冊(cè)［S］.1996：105－107.

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［9］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（2005年版一部）［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：116－117.

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