凝聚胺交叉配血不合的原因分析

司曉瑩

（廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院輸血科，福建 廈門 361003）

凝聚胺交叉配血不合的原因分析

司曉瑩

（廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院輸血科，福建 廈門 361003）

目的 探討凝聚胺交叉配血不合的原因并提出對(duì)策。方法 回顧性分析2012年1月～10月在本科室進(jìn)行凝聚胺交叉配血不合的17例病例資料。結(jié)果 凝聚胺交叉配血不合與冷凝集反應(yīng)（5例）、緡錢狀假凝集（3）、使用肝素（2例）、不規(guī)則抗體陽性（7例）有關(guān)。結(jié)論 依據(jù)凝聚胺交叉配血不合的具體原因，采取對(duì)應(yīng)的處理方法,可降低凝聚胺交叉配血不合的發(fā)生。

交叉配血；凝聚胺；不規(guī)則抗體

交叉配血實(shí)驗(yàn)是確定能否輸血的重要依據(jù)。輸血科工作人員通過交叉配血試驗(yàn)來進(jìn)一步證實(shí)受血者和供血者之間不存在血型不合的抗原抗體反應(yīng)，以保證受血者的輸血安全。目前聚凝胺介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)是臨床廣泛應(yīng)用的技術(shù)。在實(shí)際工作中，同型血液聚凝胺交叉配血不合的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生且原因多樣，為了保障臨床輸血及時(shí)、安全、有效并避免輸血反應(yīng)的發(fā)生，對(duì)配血不合的原因進(jìn)行分析并采取相應(yīng)的處理方法具有重要意義。

以我院在進(jìn)行聚凝胺交叉配血時(shí)出現(xiàn)的17例交叉配血不合的病例為研究對(duì)象，對(duì)其聚凝胺交叉配血不合的原因進(jìn)行回顧性分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

2012年1月～10月本院新入院患者申請(qǐng)輸血進(jìn)行聚凝胺交叉配血發(fā)生交叉配血不合的17例病例。

1.2 試劑與儀器

抗-A、抗-B標(biāo)準(zhǔn)血清，ABO試劑紅細(xì)胞，RH（D）血型定型試劑，抗體篩選紅細(xì)胞，抗體鑒定譜細(xì)胞均為上海血液生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)。RH（D）血型定型試劑為長(zhǎng)春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)。聚凝胺介質(zhì)試劑由珠海貝索生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。所有試劑均經(jīng)中國(guó)藥品生物制品檢定所檢定合格且在有效期內(nèi)使用。

1.3 方法

所有操作均按照試劑說明書及文獻(xiàn)[1]操作《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第三版）。

2 結(jié) 果

2.1 5例由冷凝集抗體引起的聚凝胺交叉配血不合。將聚凝胺交叉配血時(shí)發(fā)生凝集的試管經(jīng)過37℃水浴20～30s取出肉眼觀察并且鏡檢，發(fā)現(xiàn)凝集消失。

2.2 3例緡錢狀假凝集所致的聚凝胺交叉配血不合。（2例為多發(fā)性骨髓瘤患者，1例為原發(fā)性巨球蛋白血癥患者。3例標(biāo)本凝聚胺交叉配血主側(cè)均出現(xiàn)凝集。多發(fā)性骨髓瘤患者由于骨髓內(nèi)有大量的漿細(xì)胞增殖，原發(fā)性巨球蛋白血癥患者骨髓中有漿細(xì)胞樣淋巴細(xì)胞侵潤(rùn)，均可使患者的血清內(nèi)出現(xiàn)異常的免疫球蛋白（M蛋白），影響紅細(xì)胞表面負(fù)電荷狀態(tài)，血清蛋白濃度異常，使紅細(xì)胞呈緡錢狀而產(chǎn)生假凝集。凝聚胺交叉配血時(shí)主側(cè)出現(xiàn)凝集，肉眼觀察凝集，在2+或1+，不像真正的凝集那么強(qiáng)，鏡下看結(jié)果，能發(fā)現(xiàn)緡錢狀凝集的典型特征，解決方法為在試管中滴加2～3滴鹽水，凝集很快散開，肉眼看不到凝集，鏡下紅細(xì)胞也呈均勻散在的狀態(tài)。

2.3 2例使用肝素導(dǎo)致交叉配血失敗。2例標(biāo)本均在加入聚凝胺試劑離心后主側(cè)無法出現(xiàn)由聚凝胺造成的非特異性凝集，次側(cè)呈凝集，交叉配血實(shí)驗(yàn)失敗。通過與臨床聯(lián)系得知1例病患正在進(jìn)行血液透析另1例患者透析治療結(jié)束不久，采集血液標(biāo)本時(shí)不能排除肝素干擾，告知臨床，請(qǐng)于患者透析結(jié)束后2～3h重新采集血液標(biāo)本送至我室重新進(jìn)行交叉配血，由于肝素的半衰期為1h，作用維持3～4h[2]，透析結(jié)束前1h停止肝素輸入，主側(cè)管離心后無凝集，交叉配血相合。

2.4 不規(guī)則抗體陽性導(dǎo)致聚凝胺交叉配血不合7例。7例患者均為新入院患者，在進(jìn)行交叉配血時(shí)不相合，在排除冷凝集、肝素等干擾因素后，立刻做抗體篩查，抗篩陽性則立刻做抗體鑒定試驗(yàn)，得出結(jié)果：抗-c 1例，抗-E 2例，抗-Lea 1例，抗-Jka 1例，自身抗體2例。7例患者均有輸血史，其中三例女性患者均有妊娠史。根據(jù)我國(guó)漢族人群Rh抗原分布特點(diǎn)，E抗原陰性近50%，產(chǎn)生E抗體的概率也很高，相應(yīng)篩選出E抗體對(duì)應(yīng)抗原陰性血液也較容易，所以用我?guī)熘鞋F(xiàn)存的血樣本對(duì)抗-E患者的標(biāo)本進(jìn)行試配，每次拿2U/袋規(guī)格的懸浮紅細(xì)胞八袋用微柱凝膠法進(jìn)行交叉配血，2例抗-E標(biāo)本分別獲得四袋和兩袋交叉相合的血制品。對(duì)于另三例（抗-Jka，抗-Lea，抗-c）標(biāo)本由于受血制品樣本量和本實(shí)驗(yàn)室條件的限制，及時(shí)將標(biāo)本送至中心血站進(jìn)一步核實(shí)抗體的類型，并由血站篩選出特異性抗體對(duì)應(yīng)抗原陰性血液，即相匹配血液對(duì)患者進(jìn)行及時(shí)輸注。2例自身抗體的患者1例為75歲男性，B型RhD（+），1例為女性82歲，A型RhD（+），均為自身免疫性溶血性貧血患者，抗體鑒定實(shí)驗(yàn)顯示無血型特異性，是自身免疫性抗體。建議臨床暫緩輸血治療，但因?yàn)椴∏槲Ｖ赜直仨気斞?，將?biāo)本送至中心血站，選擇與患者同型交叉配血最小不相合血液制成洗滌紅細(xì)胞，緩慢輸注，緊密觀察，同時(shí)臨床配合使用大劑量激素。

3 討 論

3.1 冷凝集反應(yīng)對(duì)交叉配血的干擾，提醒輸血科工作人員在工作中應(yīng)當(dāng)盡量創(chuàng)造適宜的試驗(yàn)環(huán)境，以排除冷凝集素的干擾。在室溫或更低溫度下，對(duì)所有紅細(xì)胞（包括自身紅細(xì)胞）都能發(fā)生的凝集現(xiàn)象稱冷凝集反應(yīng)。冷凝集素引起的非特異性凝集可嚴(yán)重影響血型鑒定和交叉配血試驗(yàn)等。一般存在于大多數(shù)健康人的血清中的冷凝集素，效價(jià)不高，不易出現(xiàn)非特異性凝集，但在某些病理情況下，如自身免疫性溶血性貧血、支原體肺炎等，病患血清中有很高的冷凝集素，與自身和他人的紅細(xì)胞均發(fā)生凝集，易造成血型鑒定錯(cuò)誤和交叉配血不合[3]。但冷凝集素在37℃不具活性，所以當(dāng)聚凝胺交叉配血時(shí)有發(fā)生凝集現(xiàn)象，經(jīng)37℃恒溫或用37℃生理鹽水洗滌后凝集消失，或在再次重復(fù)配血過程中保持反應(yīng)溫度在37℃時(shí)凝集不再出現(xiàn)，即可以排除冷凝集的干擾。對(duì)于那些自身免疫性疾病的血清中出現(xiàn)高效價(jià)的冷凝集素，就必須將患者標(biāo)本進(jìn)行洗滌和吸收才能排除冷凝的干擾，方法為取1份患者紅細(xì)胞在經(jīng)過37℃ 0.9%氯化鈉溶液的洗滌3次，做出紅細(xì)胞懸液，另取1份患者紅細(xì)胞在經(jīng)過37℃0.9%氯化鈉溶液的洗滌6次將患者紅細(xì)胞和自身血漿按1∶1混合后置0～5℃；冰箱進(jìn)行充分吸收30min，迅速離心分離血清。用獲得的紅細(xì)胞懸液和血漿再次交叉配血。

3.2 某些疾病狀態(tài)下如高蛋白血癥、多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥等，患者血漿中含有過量的球蛋白或纖維蛋白，異常蛋白分子中和紅細(xì)胞表面的電量，減少了紅細(xì)胞表面的斥力，使紅細(xì)胞易于凝聚，呈緡錢狀改變。這是一種假凝集。這種假凝集與抗原抗體發(fā)生反應(yīng)引起的真凝集反應(yīng)相似。向試管中加入幾滴生理鹽水，紅細(xì)胞緡錢狀形成很容易分散。用顯微鏡觀察，假凝集高倍鏡下紅細(xì)胞有一部分聚集在一起，紅細(xì)胞邊緣整齊，如古代銅錢疊成串狀。當(dāng)加入鹽水后再鏡下觀察，紅細(xì)胞散開。真凝集紅細(xì)胞邊緣不齊，互相擠壓，加入鹽水凝集不散開。

3.3 肝素對(duì)交叉配血的干擾是由血透患者血液循環(huán)中加入大量的肝素而引起。肝素為D－葡糖胺、L－艾杜糖醛酸及D－葡萄糖醛酸交替組成的黏多糖硫酸酯，肝素是帶大量負(fù)電荷的大分子不易透過細(xì)胞膜，60%集中在血管內(nèi)皮。用聚凝胺配血是利用它的陽離子來中和紅細(xì)胞表面唾液酸所帶的負(fù)電荷，而肝素所帶大量負(fù)電荷與聚凝胺的陽離子進(jìn)行了反應(yīng)，使紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷未被中和，紅細(xì)胞Zeta電位未能降低，未能縮短紅細(xì)胞之間的距離，不能使紅細(xì)胞產(chǎn)生非特異性凝聚凝胺是一種高價(jià)陽離子多聚物，溶解后產(chǎn)生許多正電荷，使紅細(xì)胞Zeta電位降低，削弱了紅細(xì)胞之間相互排斥的力量，縮短了紅細(xì)胞之間的距離，使紅細(xì)胞產(chǎn)生非特異性凝集。當(dāng)受檢標(biāo)本中含有肝素時(shí)，少量的聚凝胺就會(huì)被肝素中和而發(fā)揮不了降低紅細(xì)胞電位的作用，使紅細(xì)胞之間的非特異性凝集反應(yīng)減弱，使紅細(xì)胞不能產(chǎn)生特異性凝集故可對(duì)聚凝胺交叉配血造成干擾，建議在這些方面需要輸注血液的患者在進(jìn)行肝素輸注前應(yīng)先采集血交叉標(biāo)本，以減少不良因素的發(fā)生[4]。

3.4 對(duì)有輸血史、妊娠史的患者，必須做抗體篩查試驗(yàn)，對(duì)其中抗體篩查陽性者要及時(shí)進(jìn)行抗體特異性鑒定，對(duì)能檢出特異性抗體的患者，選擇抗體特異性對(duì)應(yīng)抗原為陰性的血制品。通過常規(guī)檢測(cè)RhE抗原，我們發(fā)現(xiàn)RhE抗原陰性和RhE抗原陽性患者幾乎各占50%，RhE陰性患者輸入RhE陽性血液，就有可能產(chǎn)生抗體[5-7]。相應(yīng)篩選出E抗體對(duì)應(yīng)抗原陰性血液也較容易，所以如條件許可可先自己試配。而kidd、Duffy、Lewis血型系統(tǒng)抗體臨床少見，抗原陰性的患者在多次輸血中，有可能輸入了含有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞，刺激機(jī)體產(chǎn)生了相應(yīng)的抗體。對(duì)于這些患者最好選用完全相合的血液輸注。對(duì)于自身免疫性溶血性貧血，由于自身抗體和或補(bǔ)體吸附于紅細(xì)胞表面，導(dǎo)致紅細(xì)胞破壞增加而引起溶血性貧血，由于該類患者血漿中及紅細(xì)胞表面含有大量自身抗體，因此即使是輸入洗滌紅細(xì)胞，紅細(xì)胞也會(huì)很快溶解破壞。所以自身抗體患者原則上是能不輸血盡量不輸血，但對(duì)于危急的重癥患者應(yīng)嚴(yán)格配血選擇主側(cè)反應(yīng)最弱的紅細(xì)胞洗滌后輸注，而且臨床在輸血前和輸血時(shí)使用大劑量的激素，輸血時(shí)謹(jǐn)慎緩慢、密切觀察有無溶血加重情況，以便急救。

[1] 葉應(yīng)嫵,王毓三,申子喻.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].3版.南京:東南大學(xué)出版社,2009.

[2] 陳新謙,金肖豫,湯光.新編藥物學(xué)[M].15版.北京:人民衛(wèi)生出版社, 2003:525-625.

[3] 蔣冬玲,李志強(qiáng).實(shí)用臨床輸血指南[M].北京:人民衛(wèi)生出版社, 2006:41.

[4] 張和平,林國(guó)躍,杜曉璐.肝素對(duì)聚凝胺法交叉配血的干擾與處理[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2010,26(2):171.

[5] 楊遜懷.不規(guī)則抗體篩查的臨床應(yīng)用[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2008, 29(15):1390.

[6] 李文靜,蔣學(xué)兵,王燕菊,等.輸血前不規(guī)則抗體篩查與臨床輸血安全.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2012,33(17):36-38.

[7] 陳嘉偉,石冬敏.血型不規(guī)則抗體篩檢與臨床安全輸血[J].中國(guó)血液流變學(xué)雜志,2012,22(2):23-25.

Analysis of Reason of Unmatched Polybrene Cross Matching

SI Xiao-ying
(Department of Blood Transfusion, the First Affiliated Hospital of Xiamen University, Xiamen 361003, China)

Objective To evaluate the reason of unmatched polybrene cross matching. Methods Data of 17 cases of unsuited polybrene cross matching between January 2012 and Octomber 2012 were retrospectively analyzed. Results Unsuited polybrene cross matching were associated with positive cold agglutination reaction(n=5), rouleaux pseudoagglutination(n=3), the use of heparin(n=2), positive unexpected antibody(n=7). Conclusion According to specific reason, adopting corresponding approach may reduce the incidence of unmatched polybrene cross matching.

Cross matching; Polybrene; Unexpected antibody

R457

B

1671-8194（2013）01-0049-03