氰化高鐵血紅蛋白測定法對血紅蛋白測定方法及臨床意義

張亞男

血紅蛋白是由珠蛋白和亞鐵血紅素組成的結(jié)合蛋白質(zhì)。血紅蛋白主要存在于紅細(xì)胞中，在正常生理狀態(tài)下，人血漿中僅有微量的血紅蛋白(20～40 mg/L)，與觸珠蛋白形成Hb-Hp復(fù)合物，在單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)代謝，不能從尿中排出［1］。氰化高鐵血紅蛋白(HiCN)法為國際血液標(biāo)準(zhǔn)化委員會(ICSH)推薦，其最大吸收峰在540nm。現(xiàn)就氰化高鐵血紅蛋白(HiCN)法及臨床意義分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 住院患者60份標(biāo)本。其中男30例，女30例，年齡19～65歲，平均41歲。

1.2 方法 氰化高鐵血紅蛋白(HiCN)法。

2 操作及注意事項

2.1 操作 血紅蛋白轉(zhuǎn)化液WHO和我國衛(wèi)生部臨床檢驗中心推薦。分類光度計移液管(5 ml)、微量吸管(20 ml)、試管等。HiCN轉(zhuǎn)化液：氰化鉀(KCN)0.05 g；高鐵氰化鉀［K3Fe3，(CN)6］0.2 g；無水磷酸二氫鉀(KH2PO4)0.14 g；TritoX-100或其他非離子表面活性劑1.0 ml蒸餾水加至1000 ml。取靜脈或手指血20μl加入5 ml Hb轉(zhuǎn)化液中，混勻，常溫下放置5 min后，以轉(zhuǎn)化液調(diào)零點，與人540nm(光徑1 cm)測量吸光度A。如果所用的分光光度計是經(jīng)過校準(zhǔn)的，則可利用HiCN的毫摩爾吸光系數(shù)和側(cè)得的A值計算Hb濃度。

2.2 注意事項 血紅蛋白測定方法很多，但氰化高鐵血紅蛋白測定法是國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會推薦的參考方法，其他方法都應(yīng)以氰化高鐵血紅蛋白法為基準(zhǔn)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。氰化高鐵血紅蛋白試劑不宜儲存在塑料瓶或廣口瓶中，且應(yīng)在4℃冰箱保存，否則CN-會丟失而使結(jié)果偏低［2］。氰化高鐵血紅蛋白試劑在遇到高白細(xì)胞或高球蛋白標(biāo)本時，會出現(xiàn)混濁現(xiàn)象，應(yīng)進(jìn)行離心后再比色，以免濁度干擾。氰化鉀是劇毒品，試劑配制時要嚴(yán)格按照劇毒品管理程序操作。比色測定后的廢液集中后按每升加次氯酸鈉溶液40 ml，充分振搖混勻后敞開容器置室溫3 h的方法可除去毒性。

3 臨床意義

HICN法是目前國際同一的標(biāo)準(zhǔn)方法，它操作簡便，結(jié)果穩(wěn)定可靠。血紅蛋白被高鐵氰化鉀氧化成高鐵血紅蛋白，再跟氰離子結(jié)合形成穩(wěn)定的氰化高鐵血紅蛋白(HiCN)。后者在540 nm波長處有吸收峰，可用校準(zhǔn)的分光光度計直接測定或用HiCN參考液比色測定。血紅蛋白增減的臨床意義基本上與紅細(xì)胞增減意義相同，但血紅蛋白能更好地反映貧血程度。而某些貧血，由于單個紅細(xì)胞血紅蛋白的含量不同，血紅蛋白減少與紅細(xì)胞減少程度不成平行關(guān)系［3］。如缺鐵性貧血時，血紅蛋白量減少程度較紅細(xì)胞數(shù)減少明顯，巨幼細(xì)胞性貧血時，則紅細(xì)胞數(shù)減少程度較血紅蛋白量減少明顯。對于圍手術(shù)期患者，當(dāng)血紅蛋白＜100 g/L時就輸注紅細(xì)胞，目前認(rèn)為這是缺乏科學(xué)依據(jù)的。研究發(fā)現(xiàn)，對急、慢性貧血患者，將血紅蛋白濃度作為指導(dǎo)輸血的惟一參數(shù)是無充分依據(jù)的。當(dāng)血紅蛋白濃度下降時，為保證組織供氧，機(jī)體會啟動代償機(jī)制，如心輸出量增加、外周血管舒張等；臨床醫(yī)生可能會低估這種代償機(jī)制的作用，導(dǎo)致紅細(xì)胞的過多使用。與急性貧血相比，慢性貧血患者對貧血的耐受能力更強(qiáng)，因為組織缺氧會導(dǎo)致2，3-DPG升高，促進(jìn)氧解離曲線右移以利于氧向組織的釋放。血紅蛋白濃度在70～100 g/L的許多患者常常不需要輸血，但是對于大多數(shù)血紅蛋白濃度＜70 g/L的患者則需要通過輸注紅細(xì)胞以改善癥狀。因此，血紅蛋白濃度在決定是否需要輸血中有重要的參考價值，但不是決定性指標(biāo)。血紅蛋白量減少是診斷貧血的最重要指標(biāo)，但尚不能確定貧血類型，需結(jié)合其他檢測指標(biāo)綜合分析。如MCV、MCH、MCHC測定呈小細(xì)胞低色素性；成熟紅細(xì)胞偏小而著色淺、中心蒼白區(qū)擴(kuò)大；細(xì)胞化學(xué)染色顯示骨髓中細(xì)胞內(nèi)、外鐵降低，則以缺鐵性貧血可能居大。若Hb量降低、網(wǎng)織紅細(xì)胞明顯增多、血清膽紅素增加等，則以溶血性貧血可能居大。而如果除Hb量減少外，WBC、BPC同時減少，呈全血細(xì)胞減少時，則以再生障礙性貧血的可能性居大。

總之，氰化高鐵血紅蛋白(HiCN)測定法具有操作簡便，試劑容易保存，和除硫化血紅蛋白外，能將碳氧血紅蛋白、高鐵血紅蛋白等多種變性血紅蛋白轉(zhuǎn)變?yōu)镠iCN等優(yōu)點。

［1］ 張秀明，李健齋，魏明竟，等．現(xiàn)代臨床生化檢驗學(xué)．第1版．北京：人民軍醫(yī)出版社，2003：111.

［2］ 趙緒英，劉慧芳．尿微量白蛋白糖化血蛋白與糖尿病早期腎損傷的關(guān)系．實用醫(yī)技雜志，2007，37(5)：204-206.

［3］ 王飛，封敏，黃艷春．甲狀腺激素、白蛋白和血紅蛋白聯(lián)合檢測在消化系統(tǒng)惡性腫瘤中的應(yīng)用．新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2009，32(5)：619-621．