結(jié)核分枝桿菌藥物敏感性表型檢測的研究進(jìn)展

申曉娜 趙雁林 肖和平

結(jié)核分枝桿菌（Mtb）藥物敏感性（簡稱“藥敏”）檢測是耐藥結(jié)核病診斷和治療的關(guān)鍵，主要有表型檢測法和基因型檢測法兩大類。盡管近年來分子生物學(xué)技術(shù)飛速發(fā)展，新的實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)不斷出現(xiàn)，但常規(guī)細(xì)菌學(xué)表型檢測由于其客觀性、直觀性等優(yōu)點(diǎn)，仍是目前重要的實(shí)驗(yàn)診斷手段。為了在結(jié)核病防治過程中更好地運(yùn)用這項(xiàng)技術(shù)，筆者現(xiàn)就Mtb藥敏表型檢測方法及其研究進(jìn)展情況綜述如下。

一、直接培養(yǎng)觀察的方法

（一）傳統(tǒng)培養(yǎng)法

Mtb藥敏試驗(yàn)傳統(tǒng)培養(yǎng)法包括絕對濃度法、比例法和抗性比率法，該種方法具有生長依賴性，在得到分離菌株后需要3～4周才能獲得藥敏試驗(yàn)結(jié)果，陰性結(jié)果報(bào)告時(shí)間需延長至8周。目前多采用絕對濃度法或比例法，絕對濃度法是我國各級(jí)實(shí)驗(yàn)室多年來普遍沿用的方法，操作簡單，但對于細(xì)菌懸液的麥?zhǔn)蠞舛鹊闹苽浼熬航臃N量的要求非常嚴(yán)格，不同操作者存在很大的個(gè)體差異。比例法是WHO推薦的標(biāo)準(zhǔn)藥敏試驗(yàn)方法［1］，該法采用了兩種菌液濃度（10－2g／L和10－4g／L）對菌液接種量進(jìn)行了校正，最終計(jì)算的耐藥百分比更為精確。有文獻(xiàn)報(bào)道這兩種方法有較高的符合率，異煙肼、鏈霉素、利福平、乙胺丁醇兩種方法測試結(jié)果的一致率分別為96．2%、97．1%、98．7%、96．9%［2］，兩者耐藥率的差別主要與選定的藥物臨界濃度有關(guān)［3］；為了能更好地與國際接軌，便于信息交流，建議有條件的實(shí)驗(yàn)室可以開展比例法藥敏試驗(yàn)［4］。

（二）顯微鏡觀察法（MODS）

顯微鏡觀察藥敏檢測方法（microscopic observation drug susceptibility assay，MODS）是2000年Caviedes等［5］建立的用顯微鏡觀察液體培養(yǎng)基中Mtb的形態(tài)學(xué)進(jìn)行耐藥性檢測的方法，可通過倒置顯微鏡觀察是否有Mtb索狀結(jié)構(gòu)來確定是否有Mtb生長，觀察含藥孔Mtb生長與否判斷耐藥性。文獻(xiàn)報(bào)道MODS與傳統(tǒng)羅氏藥敏結(jié)果相比有較高的敏感度和特異度，異煙肼、利福平及耐多藥（MDR）結(jié)核病的測定敏感度分別為88%、96%、91%；特異度分別為89%、90%、90%［6］；與 BACTECTMMGITTM960比較，異煙肼、利福平及 MDR測定符合率分別為92．9%、95．5%、97．3%［7］，鏈霉素、異煙肼、利福平、乙胺丁醇、左氧氟沙星、阿米卡星和卷曲霉素結(jié)果符合率分別為90．21%、88．09%、93．62%、87．23%、92．34%、88．51%和86．81%；檢測敏感度分別為83．33%、85．11%、90．74%、85．71%、86．73%、76．92% 和77．08%；特 異 度 分 別 為 96．06%、92．55%、96．06%、88．19%、96．35%、91．80% 和 89．30%［8］。平均7d左 右報(bào)告結(jié)果，操作簡便且價(jià)廉，無需昂貴儀器設(shè)備，適合發(fā)展中國家和經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)地區(qū)，應(yīng)用前景廣闊。

（三）E－test法

E－test的藥敏試紙條為AB BIODISK公司的專利產(chǎn)品，試紙條上藥物含量從低到高覆蓋了15個(gè)連續(xù)倍比稀釋濃度，是根據(jù)瓊脂擴(kuò)散法原理設(shè)計(jì)的，將不同濃度的試紙貼于種有生長不同細(xì)菌的培養(yǎng)基表面，藥物擴(kuò)散形成濃度梯度，作用細(xì)菌后產(chǎn)生抑菌環(huán)，根據(jù)抑菌環(huán)位置所指試紙上的刻度可確定該藥對該菌的最低抑菌濃度（MIC）。如將試紙置于含有Mtb的瓊脂培養(yǎng)基上，根據(jù)測得MIC即可判斷Mtb耐藥情況。該方法5～10d出結(jié)果，該方法為定量檢測，結(jié)果準(zhǔn)確，快速；操作簡便，不需特殊儀器設(shè)備；可用于聯(lián)合藥敏試驗(yàn)；易于標(biāo)準(zhǔn)化操作和質(zhì)量控制，但有報(bào)道顯示，與羅氏金標(biāo)準(zhǔn)比假陽性率高，符合率低，僅為48．6%［9］，且 E－test試紙條價(jià)格昂貴，難以推廣使用。

二、快速培養(yǎng)儀檢測系統(tǒng)

（一）BACTECTM460TB系統(tǒng)

BACTECTM460TB系統(tǒng)原理是通過在培養(yǎng)基加入14C標(biāo)記的底物，檢測代謝中釋放的14CO2量以判斷生長情況而得知其耐藥性，該方法較羅氏培養(yǎng)法，初分離時(shí)間大大縮短，分離陽性率有所提高；耐藥性檢測與絕對濃度法和比例法符合率達(dá)95%～100%［10］，結(jié)果可靠，檢測時(shí)間明顯縮短。對幾種一線抗結(jié)核藥物在獲得Mtb培養(yǎng)物后，再需4～8d即可得到藥敏試驗(yàn)結(jié)果。由于對環(huán)境的放射性污染，目前已逐步被更加完善的BACTECTMMGITTM960系統(tǒng)替代。

（二）BACTECTM MGITTM960系統(tǒng)

BACTECTMMGITTM960系統(tǒng)是通過氧熄滅熒光感受器檢測分枝桿菌的有無。MGIT管底部包埋的O2敏感熒光顯示劑，正常情況下激發(fā)的熒光能被溶解于培養(yǎng)基中的O2所淬滅，當(dāng)培養(yǎng)管中有Mtb生長時(shí)O2被消耗，熒光探測器自動(dòng)探測熒光顯示劑激發(fā)的熒光強(qiáng)度，可通過含藥的MGIT管熒光強(qiáng)度判定Mtb是否耐藥。有文獻(xiàn)報(bào)道全自動(dòng)MGITTM960系統(tǒng)培養(yǎng)方法的敏感度和特異度高于羅氏培養(yǎng)法，報(bào)告時(shí)間平均縮短至6～9d［11－12］，是目前最為理想的快速 Mtb培養(yǎng)、鑒定和藥敏試驗(yàn)檢測系統(tǒng)，已在我國各大臨床檢驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用。

（三）BACTECTM9000MB系統(tǒng)

BACTECTM9000MB系統(tǒng)是采用液／固雙相系統(tǒng)，利用氧特異性的感應(yīng)器以熒光顯示耗氧量來監(jiān)測分枝桿菌生長過程中O2濃度的變化來判斷其生長情況。與BACTECTM460TB系統(tǒng)相比，以熒光顯示耗氧量替代了放射線，其臨床標(biāo)本的 Mtb分離率和BACTECTM460TB系統(tǒng)相當(dāng)［13］，與BACTECTMMGITTM960系統(tǒng)相比，檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，污染率低，但時(shí)間較長，平均13．2d出結(jié)果，檢測時(shí)間雖長于BACTECTM460TB系統(tǒng)及BACTECTMMGITTM960系統(tǒng)，檢出率及培養(yǎng)時(shí)間明顯優(yōu)于傳統(tǒng)羅氏培養(yǎng)法［14］。

（四）BacT ALERT 3D系統(tǒng)

BacT ALERT 3D系統(tǒng)利用顏色感應(yīng)器來監(jiān)測分枝桿菌生長過程中釋放的CO2，隨著CO2濃度的升高，感應(yīng)器的顏色會(huì)發(fā)生變化，可根據(jù)顏色變化的不同來判斷其生長狀況。待檢的培養(yǎng)瓶內(nèi)有微生物生長時(shí)，代謝過程中所產(chǎn)生的CO2可經(jīng)過BacT／ALERT培養(yǎng)和檢測系統(tǒng)半透膜滲透至瓶底，與固定于瓶底的Novel／CO2感應(yīng)器結(jié)合，伴隨CO2濃度的增加，pH值發(fā)生變化，顏色由綠色變?yōu)辄S色，產(chǎn)生CO2量的多少與分枝桿菌生長程度呈正相關(guān)，當(dāng)出現(xiàn)陽性培養(yǎng)瓶時(shí)，通過光電檢測得知CO2變化情況并經(jīng)計(jì)算機(jī)處理后，系統(tǒng)用報(bào)警或屏幕顯示等方式提示，在曲線圖上反映、分析、判斷陰性或陽性結(jié)果，該系統(tǒng)可在任何時(shí)間內(nèi)放入培養(yǎng)瓶，通過條碼識(shí)別允許該標(biāo)本進(jìn)入系統(tǒng)，并連續(xù)跟蹤監(jiān)測。該系統(tǒng)可檢測血液和其他樣本的分枝桿菌，但無法確定是哪一種分枝桿菌，因此提示陽性報(bào)告的培養(yǎng)物要做進(jìn)一步的菌種鑒定；還可測試分枝桿菌對吡嗪酰胺、利福平、異煙肼、鏈霉素和乙胺丁醇等的敏感度，有文獻(xiàn)報(bào)道，與羅氏培養(yǎng)法比較，氨基糖苷類、利福平、乙硫異煙胺、環(huán)丙沙星藥物敏感度檢測的符合率為100%，異煙肼為91．5%，吡嗪酰胺為85%，乙胺丁醇為72．4%，藥敏試驗(yàn)種類對分枝桿菌檢測時(shí)間約為10d［15］，明顯快于金標(biāo)準(zhǔn)羅氏培養(yǎng)法。該系統(tǒng)是目前我國應(yīng)用各類快速微生物培養(yǎng)系統(tǒng)中使用最多的一種，但試劑的價(jià)格昂貴也是限制其推廣應(yīng)用為常規(guī)檢測的主要因素。

（五）Dio－TK快速自動(dòng)比色培養(yǎng)系統(tǒng)

Dio－TK快速自動(dòng)比色培養(yǎng)系統(tǒng)是一套顯示分枝桿菌和雜菌生長的圖像系統(tǒng)，它能夠通過連續(xù)的比色分析將真實(shí)的分枝桿菌生長與污染區(qū)別開來。將標(biāo)本接種于含有多種顏色指示劑的培養(yǎng)基上，當(dāng)Mtb的生長或其他菌存在時(shí)培養(yǎng)基發(fā)生不同顏色的變化，系統(tǒng)自動(dòng)連續(xù)比色分析，提供描述性生長曲線，判斷其有無分枝桿菌生長，同時(shí)還可以區(qū)別雜菌污染。分離率不及羅氏培養(yǎng)法及BACTECTM460TB系統(tǒng)，藥敏結(jié)果與比例法和BACTECTM460TB系統(tǒng)有較好的一致性，報(bào)告時(shí)間為15d左右［16］。該系統(tǒng)對操作技術(shù)要求高，Dio－TK培養(yǎng)基對酸堿度（pH值）敏感，如果NaOH處理過的樣本沒有很好地中和，通過從紅色變?yōu)辄S色的顏色變化來檢測Mtb的生長就需要更長時(shí)間，且易污染，使之難以推廣使用。

三、氧化還原指示劑法

（一）Alamar blue法

Alamar blue法是通過氧化還原指示劑Alamar blue的顏色變化反應(yīng)Mtb在培養(yǎng)基中的氧化還原反應(yīng)，從而判斷其生長情況。Alamar blue為一種基于氧化還原反應(yīng)的指示劑，該指示劑帶有熒光標(biāo)記，還原后的Alamar blue可利用酶標(biāo)儀進(jìn)行熒光定量檢測，應(yīng)用最多的是利用其進(jìn)行化合物的活性檢測，以及評(píng)估原核和真核的細(xì)胞毒性［17－18］。1995年Yajko等［19］首次把Alamar blue應(yīng)用于微量最低抑菌濃度（MIC）檢測中，建立了 Alamar blue微孔板稀釋法（MABA）。當(dāng)Mtb生長時(shí)，指示劑可發(fā)生還原反應(yīng)，由其氧化狀態(tài)的藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)檫€原狀態(tài)的粉色，阻止這種顏色變化的最低藥物濃度為MIC。Farnia等［20］在此方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行了簡化，只利用一個(gè)臨界濃度來檢測臨床菌株的耐藥情況。以羅氏比例法為金標(biāo)準(zhǔn)，利福平的敏感度和特異度均為100．0%時(shí)，異煙肼的敏感度和特異度分別為96．6%和100．0%［21］。該方法獲得結(jié)果僅需要7～10d時(shí)間，可以快速獲得定量的MIC藥敏結(jié)果，但其試劑較昂貴，難以廣泛應(yīng)用。

（二）刃天青法

刃天青與Alamar blue具有相似的結(jié)構(gòu)成分，作用原理類似，2002年P(guān)alomino等［22］把刃天青應(yīng)用于到Mtb藥敏檢測領(lǐng)域，建立了刃天青微孔板稀釋法（REMA）。本法實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以在接種7d內(nèi)獲得；Martin等［23］采用本法對乙硫異煙胺、卡那霉素、卷曲霉素、氧氟沙星和對氨基水楊酸5種藥物的耐藥性進(jìn)行了檢測，特異度均為100．0%，敏感度從96．8%到100．0%之間，其中氟喹諾酮類敏感度和特異度均達(dá)到了100．0%；與傳統(tǒng)羅氏培養(yǎng)基的絕對濃度法比，利福平、異煙肼、乙胺丁醇、鏈霉素藥敏試驗(yàn)的敏感度分別為92．3%、90．6%、92．9%、87．5%，特 異 度 分 別 為 96．0%、90．6%、94．0%、87．5%，準(zhǔn) 確 度 分 別 為 93．8%、90．6%、93．8%、87．5%［24］，實(shí)驗(yàn)結(jié)果均較為理想。該指示劑價(jià)格低廉，實(shí)驗(yàn)結(jié)果容易判讀，可獲得定量結(jié)果，可推廣使用。

（三）噻唑藍(lán)（MTT）法

MTT可在活細(xì)胞存在下經(jīng)氧化還原反應(yīng)生成藍(lán)色的結(jié)晶，該方法是通過分光光度計(jì)檢測藍(lán)色結(jié)晶來反映活細(xì)胞數(shù)目。MTT是一種接受氫離子的染料，可作用于活細(xì)胞線粒體中的呼吸鏈，在琥珀酸脫氫酶和細(xì)胞色素C的作用下生成藍(lán)色的結(jié)晶，死細(xì)胞不具有還原MTT的功能，結(jié)晶的生成量僅與活細(xì)胞數(shù)目成正比，溶解該結(jié)晶后，可以利用分光光度計(jì)檢測490nm處的光密度（A）值，以反映出活細(xì)胞數(shù)目。1998年 Mshana［25］將MTT用于Mtb微量 MIC快速檢測利福平的耐藥性中，建立了MTT微孔板稀釋法（TEMA）。Pontino等［26］和Ferrari等［27］采用 MTT法檢測一線抗結(jié)核藥物的耐藥性，以比例法和BACTECTMMGITTM960法測定結(jié)果為考核標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果顯示MTT法檢測鏈霉素、異煙肼、利福平、乙胺丁醇的藥敏結(jié)果符合率均在95%以上。Morcillo等［28］將其用于二線及一些選擇性抗結(jié)核藥物的耐藥性檢測中，結(jié)果顯示，與比例法相比，除了卷曲霉素敏感度為90．9%之外，左氧氟沙星、阿米卡星、對氨基水楊酸、克拉霉素、環(huán)絲氨酸、氯法齊明、利福布丁的敏感度均在96%以上，特異度均在98%～100%之間。該方法結(jié)果在8d獲得，MTT價(jià)格低廉，易于推廣。

四、酶活性測試法

（一）硝酸鹽還原法（NRA）

NRA的原理是通過測試硝酸還原酶來判定細(xì)菌生長情況。NRA法是將培養(yǎng)基內(nèi)加入硝酸鹽，利用Mtb代謝過程中產(chǎn)生硝酸還原酶能使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，并與顯色劑發(fā)生顯色反應(yīng)的特性來判定細(xì)菌生長情況，硝酸還原酶含量的不同顯色劑可從粉紅色變?yōu)樽霞t色到深紫紅色。有文獻(xiàn)報(bào)道，與BACTECTMMGITTM960比較，異煙肼、利福平敏感度分 別 為 100．0% 和 95．6%，特 異 度 分 別 為 97．0% 和100．0%，比較顯示異煙肼和利福平的檢測一致性較好［29］，對鏈霉素和乙胺丁醇的一致性較低［30］。有極少M(fèi)tb菌株為硝酸還原酶陰性，不適合使用該方法。NRA法平均10d報(bào)告結(jié)果，操作簡便，快速，不需特殊儀器設(shè)備，費(fèi)用低廉，應(yīng)用前景較好。

（二）煙酸測定法

快速煙酸測定法是通過測定Mtb代謝產(chǎn)物煙酸來測定Mtb是否生長。2，4－二硝基氯苯等物質(zhì)能與煙酸發(fā)生顏色反應(yīng)，當(dāng)有Mtb生長時(shí)，產(chǎn)生的煙酸即可在管內(nèi)發(fā)生肉眼或儀器可檢測到的顏色變化。與改良羅氏培養(yǎng)法比平均提前10d左右［31］，試劑也便宜得多，并且能在各級(jí)醫(yī)院推廣。但快速煙酸測定法比較局限，只有Mtb才產(chǎn)生煙酸，僅限于檢測Mtb。近年來缺乏相關(guān)研究。

（三）Wayne法

Wayne法是基于檢測煙酰胺酶／吡嗪酰胺酶（PZase）活性來反映吡嗪酰胺的耐藥性的。PZase可將吡嗪酰胺轉(zhuǎn)化為有殺菌作用的吡嗪酰胺酸，將培養(yǎng)基中加入硫酸亞鐵氨，它能與吡嗪酰胺酸反應(yīng)產(chǎn)生顏色變化，通過顏色變化反應(yīng)PZase活性［32］，PZase失活則造成吡嗪酰胺耐藥，該法7d可能得到結(jié)果，但僅局限于反映吡嗪酰胺一種藥的耐藥性，較少應(yīng)用。

五、生物發(fā)光技術(shù)

（一）熒光素酶信號(hào)噬菌體法（LRP）

LRP法是利用熒光素酶在三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）存在條件下可以分解的特性，同時(shí)在外加底物熒光素的作用下，可產(chǎn)生一定量的光子，通過光敏檢測器檢測光子的產(chǎn)量可反映ATP的含量，從而反映活菌情況。ATP是細(xì)菌能量代謝的指標(biāo)，生物半衰期短，當(dāng)細(xì)菌生長抑制或死亡后，胞內(nèi)ATP含量即明顯下降或消失，因而可作為活菌的標(biāo)志，用熒光素酶基因重組的噬菌體去感染Mtb，含有熒光素酶編碼基因的分枝桿菌噬菌體在Mtb體內(nèi)繁殖，并產(chǎn)生熒光素酶作用于熒光素，產(chǎn)生生物發(fā)光，通過檢測熒光信號(hào)的強(qiáng)弱來反映細(xì)菌生長情況。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，該法與傳統(tǒng)羅氏培養(yǎng)法相比符合率為87%，敏感度和特異度分別為90%和81%［33］。該法可以直接用于痰標(biāo)本的藥敏檢測，無需分離菌株，72h內(nèi)可檢測出結(jié)果，簡便、準(zhǔn)確、快速，并可自動(dòng)化測量，但是培養(yǎng)基易污染，易因雜菌存在造成假陽性，仍有待改進(jìn)，尚不能普及。

（二）ATP生物發(fā)光法

ATP生物發(fā)光法是通過將Mtb直接裂解并提取細(xì)胞內(nèi)的ATP，通過加入生物發(fā)光試劑，并利用光度計(jì)檢測發(fā)光量測定ATP含量，通過測定含藥培養(yǎng)基中培養(yǎng)的Mtb的ATP含量的不同得到其藥敏結(jié)果。該法報(bào)告時(shí)間是3d，與比例法一致性高，重復(fù)性好，簡便，但是操作繁瑣，影響因素較多［34］，且ATP存在于所有細(xì)胞中，故該法特異度較差。

六、噬菌體生物擴(kuò)增法（PhaB）

PhaB法是利用分枝桿菌噬菌體D29感染活的分枝桿菌，用硫酸亞鐵胺殺滅Mtb外的噬菌體，D29在菌體內(nèi)大量擴(kuò)增導(dǎo)致細(xì)菌溶解產(chǎn)生蝕斑，通過計(jì)數(shù)蝕斑數(shù)目來衡量Mtb在無藥和含藥培養(yǎng)基中活菌數(shù)量，從而判斷其耐藥性。裂解型分枝桿菌噬菌體D29由Froman等1954年首次分離成功，可感染快生長的恥垢分枝桿菌和慢生長的Mtb［35］。D29在恥垢分枝桿菌中發(fā)生溶菌循環(huán)的一個(gè)周期為90min，快于對Mtb的溶菌時(shí)間（13h）。該方法的基本操作是將待檢培養(yǎng)物或涂片抗酸桿菌陽性痰標(biāo)本與抗結(jié)核藥物作用24～48h后，加入分枝桿菌噬菌體D29，37℃孵育1h，加入殺病毒劑，室溫作用5min，再加入指示細(xì)胞（通常采用恥垢分枝桿菌），混合在固體瓊脂平板上，37℃孵育24～72h，并設(shè)未加藥對照管。計(jì)數(shù)每塊平板上的嗜菌斑數(shù)目，計(jì)算每個(gè)菌株的加藥管與對照管的嗜菌斑減少百分比。加藥管與對照管的嗜菌斑減少百分比超過95%或99%判為敏感，反之為耐藥。該方法與羅氏培養(yǎng)法比較，利福平耐藥性檢測有較高的敏感度和特異度，分別為100%、98%；異煙肼敏感度、特異度稍低，分別為80．4%、80．8%［36］，以 BACTECTMMGITTM960測定結(jié)果為判斷標(biāo)準(zhǔn)，阿米卡星耐藥性檢測中PhaB法的敏感度、特異度及符合率分別為89．3%、98．8%、96．3%［37］，有學(xué)者利用此法用于氟喹諾酮類藥物的藥敏實(shí)驗(yàn)時(shí)，由于不能識(shí)別敏感株，建議在選擇該法行耐藥性檢測時(shí)需謹(jǐn)慎［38］。該方法48h內(nèi)可回報(bào)結(jié)果，快速、安全、簡單、直觀，無須特殊的設(shè)備，成本低廉，但對操作技術(shù)要求嚴(yán)格，易于向發(fā)展中國家推廣。

七、流式細(xì)胞儀技術(shù)（FCM）

FCM法是通過向Mtb含藥培養(yǎng)基中加入乙酰乙酸熒光素（FDA）指示劑，活的分枝桿菌能迅速水解外來的FDA為游離的熒光素發(fā)出熒光，通過流式細(xì)胞儀檢測帶熒光的分枝桿菌，檢測Mtb的活菌量，從而判斷耐藥性。FDA是一種非極性非熒光物質(zhì)，能夠滲入分枝桿菌胞體內(nèi)，活的分枝桿菌能迅速水解外來的FDA為游離的熒光素而發(fā)出熒光，而被抑制或死亡的菌體由于胞體內(nèi)酯酶大量減少，熒光素生成亦少，再利用流式細(xì)胞儀檢測熒光素的含量，從而計(jì)算活菌的數(shù)量，測定菌株的耐藥情況?？紤]到安全因素，Moore等［39］對本方法進(jìn)行了改良，在用FCM檢測前用特殊的化學(xué)物質(zhì)對Mtb進(jìn)行滅活，在保持檢測高敏感度的前提下，改善了檢測的安全性，且在72h內(nèi)可得出結(jié)果。FCM法檢測分枝桿菌的準(zhǔn)確度和敏感度均較好，但耐藥和敏感的判斷并沒有明確公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)，且影響因素較多，如細(xì)胞聚集、菌體大小、雜菌等，特異度較差，同時(shí)流式細(xì)胞儀價(jià)格昂貴，技術(shù)要求較高，難以推廣。

上述各種Mtb表型藥敏檢測方法在Mtb耐藥性檢測中發(fā)揮著重要作用，盡管近年來涌現(xiàn)了很多新的Mtb基因型快速藥敏檢測方法，但在將來幾十年中表型藥敏檢測方法作為重要的實(shí)驗(yàn)診斷手段仍將沿用。Mtb表型藥敏檢測不斷發(fā)展，新出現(xiàn)的各種方法也在不斷完善，但仍存在不足，還需要現(xiàn)有的方法進(jìn)行大量的對比研究，以建立經(jīng)濟(jì)、簡便、快速、靈敏的耐藥性檢測方法，并加以推廣應(yīng)用，滿足結(jié)核病臨床發(fā)展的需要，指導(dǎo)臨床合理制定用藥方案，控制耐藥結(jié)核病的擴(kuò)散。

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