早春短命植物綿果薺無(wú)菌苗組織培養(yǎng)相關(guān)因素研究

曼蘇爾·那斯?fàn)?，譚敦炎，廖 康

（新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)，新疆 烏魯木齊830052）

短命植物是生長(zhǎng)在干旱荒漠地帶的一類生活周期或年生長(zhǎng)期很短的特殊植物類群的總稱［1-4］。我國(guó)短命植物僅分布于新疆北部荒漠及其毗鄰的草原帶［5］，是新疆北部地區(qū)沙漠穩(wěn)定沙面的主要貢獻(xiàn)者和沙漠受干擾破壞后植被恢復(fù)的先鋒植物［6］。短命植物是光合效率高、物質(zhì)積累快、營(yíng)養(yǎng)周期短的植物資源，是一類優(yōu)良的春季牧草［7］。綿果薺（Lachnolomalehmannii）隸屬于十字花科綿果薺屬，分布于亞洲中部，在我國(guó)僅分布于新疆北部準(zhǔn)噶爾荒漠。每年4月上旬種子開(kāi)始萌發(fā)，5月上旬進(jìn)入花期，6月上旬進(jìn)入果熟期，生活周期為60～70d，是典型的一年生早春短命植物［8］。該物種具有生活周期短、萌發(fā)期早、染色體數(shù)少（2n＝2x＝14）、較強(qiáng)的抗鹽、耐旱及耐高溫等特性，是一種潛在的特殊遺傳資源，可作為模式植物的篩選物種。因而，其組織培養(yǎng)再生體系的建立對(duì)于從細(xì)胞水平探討該物種對(duì)準(zhǔn)噶爾荒漠環(huán)境適應(yīng)的機(jī)制和演變規(guī)律具有重要的理論價(jià)值，并對(duì)采用現(xiàn)代生物技術(shù)開(kāi)發(fā)特殊遺傳資源和保存種質(zhì)具有十分重要的意義。無(wú)菌苗的獲得是植物生物技術(shù)尤其是組織培養(yǎng)的首先步驟和關(guān)鍵技術(shù)。但目前為止，該物種的此類研究尚未見(jiàn)報(bào)道。綿果薺種子自然萌發(fā)率低、植株矮小、全身著生綿毛等的生理和形態(tài)特征，給外植體消毒帶來(lái)不便。本試驗(yàn)以綿果薺種子為研究材料，研究無(wú)菌苗獲得的相關(guān)因素，以期探索高效且穩(wěn)定的消毒方法和培養(yǎng)條件，為綿果薺植株再生體系的建立提供技術(shù)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 2008年6月，在新疆阜康彩南的自然種群（44°22′24.7″N，88°08′30.1″E，海拔459 m）采集成熟的綿果薺果實(shí)，在室溫（25℃）下貯藏備用。

阜康彩南位于新疆準(zhǔn)噶爾盆地東部沙漠覆蓋區(qū)，進(jìn)入古爾班通古特沙漠腹地，受西風(fēng)帶及北冰洋水汽的影響，是內(nèi)陸冷荒漠，典型的溫帶荒漠氣候。年平均氣溫為6.4℃，最高溫為40.9℃，最低溫為-40.3℃，年降水量為134.3mm，年潛在蒸發(fā)量1 965mm，無(wú)霜期175d［9］。

1.2 方法

1.2.1 種子表面消毒處理 流水沖洗種子15min后，在無(wú)菌條件下無(wú)菌水清洗4次，設(shè)置31種不同的消毒方法處理（表1），再用無(wú)菌水清洗4次，接種到 MS［10］培養(yǎng)基上，在溫度為（25±1）℃、全黑暗中培養(yǎng)3d后轉(zhuǎn)入16h·d-1光下進(jìn)行培養(yǎng)，14d后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

表1 不同消毒處理對(duì)綿果薺種子發(fā)芽率和污染率的影響Table 1 Effects of different disinfection methods on seed germination and pollution rate of Lachnoloma lehmannii

續(xù)表1

1.2.2 消毒前流水沖洗的影響 種子分別用流水沖洗處理0min、1～2min（W1）、10min（W2）、20min（W3），并用X12方法進(jìn)行消毒后接種到MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)14d（表1），培養(yǎng)條件同1.2.1。

1.2.3 光照對(duì)種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)的影響 種子經(jīng)W1方法流水沖洗和X12方法表面消毒后接種到MS培養(yǎng)基上，全黑暗培養(yǎng)0、3、6、10和14d，處理后再轉(zhuǎn)至光照周期下培養(yǎng)。14d后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，培養(yǎng)溫度均為（25±1）℃，光照培養(yǎng)的光周期為16h·d-1。

1.2.4 培養(yǎng)溫度對(duì)種子萌發(fā)率和幼苗生長(zhǎng)的影響同樣方法種子消毒后接種于MS培養(yǎng)基上，置于對(duì)照（25℃±1℃）、T1（15℃／5℃）、T2（20℃／10℃）和T3（25℃／15℃）4種不同溫度的光照培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行14d的培養(yǎng)。光周期為16h·d-1，光照強(qiáng)度均為2 000lx。

1.2.5 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)的影響 將種子15min流水沖洗和X12方法消毒后，接種于對(duì)照（無(wú)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的 MS）、GR1（MS＋0.5 mg·L-1IBA）、GR2（MS＋1.0mg·L-1IBA）、GR3（MS＋1.0mg·L-1IBA＋0.1mg·L-1BAP）、GR4（MS＋1.0mg·L-1IBA＋0.2 mg·L-1BAP）和GR5（MS＋1.0mg·L-1IBA＋0.5mg·L-1BAP）5種培養(yǎng)基上，在溫度為（25±1）℃、光周期為16h·d-1的培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行14 d的培養(yǎng)。

1.2.6 培養(yǎng)方式的篩選 種子W1方法流水沖洗和X12方法表面消毒后接種到MS基本培養(yǎng)基上，并在變溫為15℃／5℃（白天／晚上）、光照為16h·d-1的培養(yǎng)箱培養(yǎng)5d，種子萌發(fā)后轉(zhuǎn)移到溫度為（25±1）℃、光照為16h·d-1的培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)；對(duì)照始終在（25±1）℃、光照為16h·d-1的培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，14d后比較幼苗生長(zhǎng)情況。

1.3 觀察與測(cè)定

1.3.1 種子萌發(fā)和污染狀況的觀察 種子接種48h后開(kāi)始觀察，隔24h記錄該天萌發(fā)瓶數(shù)、該天萌發(fā)外植體數(shù)目、種子起始萌發(fā)（胚根露白至胚根伸長(zhǎng)0.05 cm）的天數(shù)和持續(xù)的天數(shù)，并記錄污染瓶數(shù)和污染外植體數(shù)目及其持續(xù)天數(shù)等指標(biāo)。培養(yǎng)到第14天后統(tǒng)計(jì)種子萌發(fā)率、無(wú)菌苗率、污染率和死亡率等指標(biāo)。

1.3.2 幼苗生長(zhǎng)的觀察和測(cè)定 萌發(fā)到第14天后測(cè)定子葉、下胚軸和根的鮮質(zhì)量及子葉面積、下胚軸和根的長(zhǎng)度等指標(biāo)。子葉面積用葉形紙稱量法測(cè)定［11］。

1.4 數(shù)據(jù)處理 試驗(yàn)中同一個(gè)處理為5瓶，每瓶接種10粒種子，重復(fù)3次。數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行分析和繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同消毒劑和消毒方法對(duì)種子消毒效果的影響 不同處理種子萌發(fā)起始時(shí)間無(wú)明顯差異，均為3～5d，但細(xì)菌的發(fā)生時(shí)間不同，在幼苗后期也出現(xiàn)長(zhǎng)菌現(xiàn)象（表1），31種消毒方法中，單獨(dú)使用NaClO或HgCl2的消毒效果比與酒精配合使用的明顯要差。NaClO和HgCl2兩種消毒劑中，雖然NaClO與酒精配合處理外植體的死亡率較低，種子初始萌發(fā)率較高，但其消毒效果不徹底，出現(xiàn)外植體和幼苗后期發(fā)霉。隨著消毒時(shí)間的延長(zhǎng)，雖然其污染率開(kāi)始下降，但同時(shí)死亡率也呈直線上升趨勢(shì)，因此獲得無(wú)菌苗率仍然很低。NaClO和酒精的配合中消毒效果較好的為X25，14d后該處理的無(wú)菌苗率為48%、種子萌發(fā)率為56%、污染率為25%、死亡率為3%。雖然種子對(duì)HgCl2與酒精配合消毒的反應(yīng)較敏感，不同處理時(shí)間的消毒效果差異顯著，但該配合的消毒效果徹底，無(wú)菌苗率高。HgCl2與酒精配合處理中處理X12的消毒效果最好，也是本試驗(yàn)中最理想的配合。該處理的無(wú)菌苗率為60%、種子萌發(fā)率為60%、污染率為0、死亡率為3%；其次為X11。而無(wú)消毒處理（對(duì)照）的外植體第2天開(kāi)始細(xì)菌生長(zhǎng)至第5天徹底污染（100%），無(wú)法記錄種子萌發(fā)率。

圖1 流水處理對(duì)綿果薺種子萌發(fā)和污染的影響Fig.1 Effects of running tap water treatment on seed germination and pollution rate of Lachnoloma lehmannii

2.2 流水處理對(duì)種子消毒效果的影響 不同處理中種子萌發(fā)起始時(shí)間無(wú)明顯差異，均為3～5d。污染的外植體出現(xiàn)在3～7d。自來(lái)水處理的外植體污染率明顯低于對(duì)照（圖1），二者間存在極顯著差異（P＜0.01），即對(duì)照的污染率為26%，處理的外植體污染率均為0。自來(lái)水處理的種子萌發(fā)率極顯著高于對(duì)照，隨著自來(lái)水沖洗時(shí)間的延長(zhǎng)種子萌發(fā)率呈下降的趨勢(shì)，培養(yǎng)到第14天后處理W1的最后萌發(fā)率最大，為78%，比對(duì)照高34%。

2.3 光照對(duì)種子萌發(fā)率和幼苗生長(zhǎng)影響 在黑暗條件下種子萌發(fā)起始時(shí)間推遲（第4-7天），持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)（3～4d），到第14天未出現(xiàn)真葉。光照條件下種子萌發(fā)起始時(shí)間較早（2～4d），持續(xù)時(shí)間較短（2～3d），真葉發(fā)生也較早（11～13d）。不同的全黑暗處理種子萌發(fā)率有極顯著差異（P＜0.01）。隨著全黑暗天數(shù)的延長(zhǎng)種子萌發(fā)率呈下降趨勢(shì)（圖2），14d培養(yǎng)后對(duì)照的種子萌發(fā)率為73%，比14d全黑暗處理的高40%。

圖2 黑暗培養(yǎng)對(duì)綿果薺種子萌發(fā)的影響Fig.2 Effects of darkness culture on seed germination rate

不同處理的無(wú)菌苗子葉面積有極顯著差異（P＜0.01）。隨著黑暗處理天數(shù)的延長(zhǎng)子葉面積呈下降趨勢(shì)。培養(yǎng)14d后對(duì)照（暗處理天數(shù)為0d）的子葉面積為0.8cm2，是14d黑暗處理的2.5倍（圖3）。同樣隨著黑暗處理天數(shù)的延長(zhǎng)子葉鮮質(zhì)量也呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。不同處理間差異極顯著（P＜0.01）。對(duì)照子葉鮮質(zhì)量為35mg，是14d黑暗處理的2.5倍（圖3）。不同處理的無(wú)菌苗下胚軸長(zhǎng)度也有極顯著差異（P＜0.01），下胚軸長(zhǎng)度隨著黑暗培養(yǎng)天數(shù)的延長(zhǎng)大致呈上升趨勢(shì)。14d黑暗處理的無(wú)菌苗下胚軸長(zhǎng)度為4.4cm，是對(duì)照的1.95倍（圖3）。同樣下胚軸鮮質(zhì)量也隨黑暗處理天數(shù)的延長(zhǎng)呈上升趨勢(shì)，不同處理間差異極顯著（P＜0.01），14d黑暗處理的下胚軸鮮質(zhì)量為76mg，是對(duì)照的2.1倍（圖3）。不同處理的無(wú)菌苗根長(zhǎng)度有極顯著差異（P＜0.01）。隨黑暗處理天數(shù)的延長(zhǎng)，根長(zhǎng)呈上升趨勢(shì)，14d黑暗處理的無(wú)菌苗根長(zhǎng)度為16.4cm，是對(duì)照的1.95倍（圖3）。無(wú)菌苗根鮮質(zhì)量隨黑暗處理天數(shù)的延長(zhǎng)呈下降趨勢(shì)，不同處理的根鮮質(zhì)量有顯著差異（P＜0.05）。對(duì)照的胚根鮮質(zhì)量為25mg，是14d黑暗處理的2.4倍（圖3）。

圖3 黑暗培養(yǎng)天數(shù)對(duì)綿果薺幼苗生長(zhǎng)的影響Fig.3 Effects of time of darkness culture on the seedling growth

2.4 溫度對(duì)種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)的影響 不同溫度下種子萌發(fā)起始的早晚和幼苗生長(zhǎng)勢(shì)有一定的差異。處理T1的種子萌發(fā)起始時(shí)間為4～6d，培養(yǎng)到14d未出現(xiàn)真葉。與對(duì)照的幼苗相比，處理T1的株高較矮、子葉面積較小、整株顏色較深。處理T2和T3與對(duì)照的種子萌發(fā)起始時(shí)間和幼苗生長(zhǎng)勢(shì)無(wú)顯著差異，萌發(fā)起始時(shí)間均為3～5d。對(duì)照和T3在第11-13天開(kāi)始發(fā)生真葉。不同溫度處理的種子萌發(fā)率之間無(wú)顯著差異（P＞0.05）（圖4）。對(duì)照與T2和T3處理間種子萌發(fā)率無(wú)顯著差異，但與處理T1間顯著差異（P＜0.05），14d后處理T1的最后種子萌發(fā)率達(dá)到了90%，比對(duì)照種子萌發(fā)率高16%。

圖4 溫度對(duì)綿果薺種子萌發(fā)的影響Fig.4 Effects of temperature on seed germination

2.5 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)的影響 生長(zhǎng)素的單獨(dú)使用（GR1、GR2）對(duì)種子萌發(fā)無(wú)明顯影響，而生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素配合使用有顯著影響，隨著細(xì)胞分裂素質(zhì)量濃度的提高，種子萌發(fā)率呈下降趨勢(shì)（圖5）。處理GR3的種子萌發(fā)率達(dá)到了83%，比對(duì)照高23%。

不同處理間子葉面積有極顯著差異（P＜0.01）。生長(zhǎng)素單獨(dú)使用的子葉面積均明顯小于對(duì)照。而生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素配合使用的子葉面積均明顯大于對(duì)照。處理GR3的子葉面積最大，為1.21 cm2，是對(duì)照的1.6倍。但是，隨著配合使用的細(xì)胞分裂素質(zhì)量濃度的提高子葉面積呈下降趨勢(shì)（圖5）。

生長(zhǎng)素單獨(dú)使用對(duì)綿果薺無(wú)菌苗下胚軸長(zhǎng)度無(wú)顯著影響（圖6）。與生長(zhǎng)素配合使用的細(xì)胞分裂素的不同質(zhì)量濃度處理之間雖然無(wú)顯著差異，但下胚軸長(zhǎng)度明顯小于對(duì)照，對(duì)照的下胚軸長(zhǎng)為2.3cm，是處理GR5的2.9倍。

不同處理和對(duì)照的無(wú)菌苗根長(zhǎng)的變化趨勢(shì)表現(xiàn)為對(duì)照＞生長(zhǎng)素單獨(dú)使用＞生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素配合使用，彼此間存在極顯著差異（P＜0.01）。不同質(zhì)量濃度生長(zhǎng)素的單獨(dú)處理之間無(wú)顯著差異，但與對(duì)照相比差異極顯著，對(duì)照的根長(zhǎng)度為8.39cm，是GR2的1.9倍。生長(zhǎng)素配合使用的細(xì)胞分裂素的不同質(zhì)量濃度處理之間也無(wú)顯著差異，但與對(duì)照相比差異極顯著，對(duì)照的下胚軸長(zhǎng)度為GR5的9.7倍（圖6）。

圖5 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)綿果薺種子萌發(fā)和子葉面積的影響Fig.5 Effects of plant growth regulator on seed germination and cotyledons area

圖6 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)綿果薺幼苗下胚軸和根長(zhǎng)的影響Fig.6 Effects of plant growth regulator on fresh weight of seedling hypocotyl and root

2.6 培養(yǎng)方式的篩選 觀察得知，將種子先放在變溫15℃／5℃、光照為16h·d-1的培養(yǎng)箱培養(yǎng)5 d，種子萌發(fā)后轉(zhuǎn)移到溫度為（25±1）℃、光照為16 h·d-1的室內(nèi)培養(yǎng)的種子萌發(fā)起始時(shí)間比對(duì)照遲1 d，但是種子萌發(fā)率卻明顯高于對(duì)照，且幼苗生長(zhǎng)較整齊（圖7）。

圖7 不同培養(yǎng)方式下綿果薺的幼苗生長(zhǎng)（14d的幼苗）Fig.7 Seedling growth of Lachnoloma lehmannii in different culture way（14-d-seedling）

3 討論

獲得無(wú)菌材料時(shí)，外植體消毒的基本要求是既要?dú)⑺辣砻娴娜课⑸?，使污染率降到最低，又要使外植體保持活力［12-13］。因此，應(yīng)當(dāng)正確選擇消毒劑的濃度和處理時(shí)間，以盡量減少組織的死亡。據(jù)Muralidharan和 Mascarenhas［14］的報(bào)道，在常用的幾種消毒劑中，HgCl2的消毒效果最好。同樣本試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)HgCl2的消毒效果比NaClO好。此外，先用70%酒精進(jìn)行表面消毒，再用NaClO或HgCl2消毒的效果明顯高于直接用NaClO和HgCl2消毒，說(shuō)明在種子預(yù)處理中，使用酒精對(duì)種子表面進(jìn)行消毒是必要的，這些結(jié)果與李勁峰等［15］的研究結(jié)果一致。種子預(yù)先用水沖洗能提高種子表面消毒的效果。本研究結(jié)果表明，綿果薺種子經(jīng)自來(lái)水沖洗1～2min后再用消毒劑處理的外植體帶菌率比直接用消毒劑處理的明顯低，這可能是沖洗使種皮松軟，消毒劑易滲入所致。但隨著自來(lái)水預(yù)處理時(shí)間的延長(zhǎng)，種子萌發(fā)率呈下降趨勢(shì)。說(shuō)明，因種子流水處理時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，種皮過(guò)松軟或被破壞，消毒劑直接深入種胚，而消毒后的無(wú)菌水沖洗不徹底或消毒劑直接毒害種子。

溫度是影響種子萌發(fā)的重要生態(tài)因子之一，嚴(yán)重影響種子的發(fā)芽率和萌發(fā)速率，適宜溫度會(huì)促進(jìn)種子的萌發(fā)和幼苗的生長(zhǎng)。但生境和種類的不同，種子最適萌發(fā)溫度也有差異［16-17］。早春短命植物常在3月底至4月初萌發(fā)出土，此時(shí)氣溫從0℃以下開(kāi)始升高，日照時(shí)間也越來(lái)越長(zhǎng)。因此，溫度對(duì)早春短命植物的影響尤為重要［18］。本研究結(jié)果表明，綿果薺種子萌發(fā)對(duì)不同溫度的響應(yīng)有明顯的差異，種子萌發(fā)率在15℃／5℃下明顯高于（25±1）℃，說(shuō)明高溫對(duì)綿果薺種子的萌發(fā)具有一定的抑制作用，而綿果薺種子的萌發(fā)對(duì)低溫有較強(qiáng)的依賴性。萌發(fā)后的幼苗生長(zhǎng)勢(shì)對(duì)不同溫度的響應(yīng)與種子萌發(fā)相反，即低溫（15℃／5℃）下綿果薺幼苗生長(zhǎng)較緩慢，到第14天還未出現(xiàn)真葉，植株和子葉都很小，而在高溫（25℃±1℃）下幼苗真葉發(fā)生較早，植株和子葉都很健壯。說(shuō)明低溫對(duì)綿果薺幼苗的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用。由此可見(jiàn)，綿果薺在準(zhǔn)噶爾荒漠嚴(yán)酷環(huán)境的長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中產(chǎn)生如此的特殊生態(tài)適應(yīng)機(jī)制而保持了其生存的持續(xù)性。此結(jié)論與其他短命植物生態(tài)適應(yīng)對(duì)策研究結(jié)果相符合［19-20］。

在自然環(huán)境中，光照條件通過(guò)影響種子的萌發(fā)率和萌發(fā)速率進(jìn)而影響到幼苗的形成和生長(zhǎng)，最終影響到物種的適合度［21］。由于植物所處的生境以及本身的生物學(xué)特性差異，不同植物種子的萌發(fā)及其幼苗生長(zhǎng)對(duì)光照具有不同的要求［22-24］。許多荒漠植物的種子無(wú)論在光照下還是在暗中都萌發(fā)很好［25］，或者在暗中的萌發(fā)較在光下好［26］，但也有部分植物種子的萌發(fā)對(duì)光照有嚴(yán)格依賴性［27-28］。本研究結(jié)果表明，光照對(duì)綿果薺種子萌發(fā)有顯著的影響。在全黑暗下種子可以萌發(fā)，但種子萌發(fā)起始時(shí)間延遲、持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，而且最終萌發(fā)率也很低，光照條件下的種子萌發(fā)率明顯高于黑暗條件下的，而且種子萌發(fā)起始時(shí)間較早、持續(xù)時(shí)間較短。說(shuō)明光照對(duì)綿果薺種子萌發(fā)有明顯的促進(jìn)作用。但幼苗的不同部位對(duì)光照處理有不同響應(yīng)，且不同處理之間存在極顯著差異。說(shuō)明光照不僅影響綿果薺種子萌發(fā)，而且更影響受體材料的質(zhì)量。

適宜的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑可打破種子休眠、破壞妨礙種子萌發(fā)的活性物質(zhì)，提高種子萌發(fā)率、改善幼苗形態(tài)建成。康冰等［29］的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用適宜濃度的GA3、6-BA及IAA浸種可有效提高香椿（Toona sinensis）種子發(fā)芽率、幼苗生長(zhǎng)量及干物質(zhì)積累。朱霞等［30］在幾種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)決明（Cassiaobtusifolia）種子萌發(fā)及幼苗生長(zhǎng)的影響研究也得到同樣的結(jié)果。一定量的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配合對(duì)綿果薺種子萌發(fā)和無(wú)菌苗的子葉面積均有促進(jìn)作用。GR3的種子萌發(fā)率和子葉面積顯著高于不處理。但根和下胚軸長(zhǎng)度隨著生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度的提高呈下降趨勢(shì)，處理顯著低于不處理。由此可知，生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)不同器官的影響有所不同，根據(jù)該結(jié)論，可以按需求培育定向的器官材料。但是，附加培養(yǎng)基中的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑除了直接影響種子萌發(fā)和母株的生長(zhǎng)狀況外，還會(huì)在試管苗的器官中積累，使外植體的內(nèi)源激素含量產(chǎn)生差異，從而影響后續(xù)的研究結(jié)果［12］。因此，該結(jié)論還需要進(jìn)一步研究和詳細(xì)的探討。

4 結(jié)論

1）綿果薺種子消毒適宜的方法為：種子流水沖洗1～2min，70%酒精浸泡1min，0.1%HgCl2消毒1.5min。

2）光照對(duì)綿果薺種子萌發(fā)有促進(jìn)作用。在25℃下，周期性光照的種子萌發(fā)率為73%，比全黑暗的高40%。而幼苗的不同部位對(duì)光照有不同的響應(yīng)，且不同處理之間存在極顯著差異。

3）綿果薺的種子萌發(fā)對(duì)低溫有依賴性。光照條件下，15℃／5℃的種子萌發(fā)率達(dá)到了90%，比對(duì)照的高16%。而幼苗生長(zhǎng)需要一定的高溫。

4）適宜的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)綿果薺種子萌發(fā)有促進(jìn)作用。在周期性光照和25℃條件下，MS＋1.0mg·L-1IBA＋0.1mg·L-1BAP的種子萌發(fā)率為83%，比對(duì)照的高23%。但綿果薺幼苗不同的部位對(duì)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的反應(yīng)不同。

因此，綿果薺種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)的適合培養(yǎng)體系是將種子消毒后接種于無(wú)激素的MS培養(yǎng)基先放在溫度為15℃／5℃（白天／夜晚）、光照為16 h·d-1、濕度為70%～80%的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)4～5 d，種子萌發(fā)后轉(zhuǎn)移到溫度為（25±1）℃、光照為16 h·d-1的培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，發(fā)芽率達(dá)到90%，比對(duì)照的高16%。誘導(dǎo)出來(lái)的無(wú)菌苗很健壯，可為愈傷組織誘導(dǎo)和植株再生或其他遺傳學(xué)和分子生物學(xué)方面的研究提供良好材料。

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