不同分子亞型乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中Sox2和Oct4蛋白的表達(dá)*

史立綱，呂新全，燕 麗，徐正順，李惠翔

鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科 鄭州450052

#通訊作者，1960年7月生，博士，教授，研究方向:腫瘤病理，E－mail:huixiang19@yahoo.com.cn

腫瘤干細(xì)胞是存在于腫瘤組織中的一群特殊的細(xì)胞，具有自我更新、多向分化、高致瘤性等特點(diǎn)。由于其具有對(duì)放化療的抵抗性而不易被常規(guī)治療手段根除，造成腫瘤治療后復(fù)發(fā)。Oct4 在胚胎細(xì)胞中表達(dá)，是細(xì)胞分化全能性的標(biāo)記［1］，表達(dá)Oct4 的細(xì)胞可能是引起腫瘤發(fā)生的起始細(xì)胞［2］。Sox2 是Sox家族成員之一，在維持干細(xì)胞的多能性方面發(fā)揮重要作用［3］。乳癌干細(xì)胞的研究近年來取得了很大的進(jìn)展［4］。Perou 等［5－6］提出乳癌基因分型這一全新概念，將乳癌分為L(zhǎng)uminal A、Luminal B、HER－2、和Basal－like 4 種分子亞型。Carey 等［7］的研究證實(shí)，基因分型與乳癌患者預(yù)后有關(guān)。作者應(yīng)用免疫組化SP 法檢測(cè)不同分子亞型乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志的表達(dá)情況，以期從腫瘤干細(xì)胞角度對(duì)各亞型的生物學(xué)行為進(jìn)行探討。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源及分型 標(biāo)本選自鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院乳腺外科2008年6月至2010年3月手術(shù)切除后病理證實(shí)的乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的標(biāo)本共120例;患者均為女性，年齡24～75 歲，首次發(fā)病，術(shù)前未進(jìn)行放化療和其他免疫治療。其中Luminal A 45例、Luminal B 29例、HER－2 27例 和Basal－like 19例。

1.2 乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中Oct4 和Sox2 蛋白表達(dá)的檢測(cè) 采用免疫組化SP 法。Oct4、Sox2 單克隆抗體(即用型)及SP 試劑盒均為美國Zymed 公司產(chǎn)品。乳癌組織常規(guī)石蠟包埋，4 μm 厚連續(xù)切片。按SP 試劑盒說明書進(jìn)行操作。DAB 顯色，蘇木精復(fù)染、封片。用已知Oct4、Sox2 表達(dá)陽性的精原細(xì)胞瘤組織切片和CK5/6 表達(dá)陽性的正常乳腺組織切片作陽性對(duì)照，用PBS 代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定［8］鏡下Oct4、Sox2 陽性為位于細(xì)胞核內(nèi)的棕黃色均勻細(xì)顆粒。CK5/6 陽性表達(dá)主要在細(xì)胞質(zhì)。根據(jù)陽性細(xì)胞所占比例:陽性細(xì)胞數(shù)＜10%為1 分，10%～為2 分，50%～75%為3 分，＞75%為4 分; 根據(jù)顯色程度判斷陽性強(qiáng)度:標(biāo)本無著色為0 分，淡黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3 分。兩者得分乘積0～2 分為－，3～4 分為+，6～8 分為，8 分以上為。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0 處理數(shù)據(jù)。應(yīng)用秩和檢驗(yàn)比較不同分子亞型乳癌組織中Oct4 和Sox 蛋白表達(dá)的差異，應(yīng)用Spearman 分析檢測(cè)乳癌組織中Oct4 和Sox 蛋白表達(dá)的相關(guān)性，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 不同分子亞型乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中Oct4、Sox2 蛋白的表達(dá) 見圖1、表1。

圖1 不同分子亞型乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中Oct4(A)、Sox2(B)蛋白的表達(dá)(SP，×400)

2.2 乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中Oct4 與Sox2 蛋白表達(dá)的關(guān)系 見表2。

表1 不同分子亞型乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中Oct4、Sox2 蛋白的表達(dá)

表2 乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中Oct4 與Sox2 蛋白表達(dá)的關(guān)系

3 討論

Oct4 基因定位于染色體6q21.3，屬于Pou 區(qū)轉(zhuǎn)錄因子家族［9］，其表達(dá)于卵母細(xì)胞、原始生殖細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞，但在其分化的子代細(xì)胞中不表達(dá)［10］，提示其與細(xì)胞的多能性分化密切相關(guān); 可能是一個(gè)特異的分化全能性基因標(biāo)記或者是分化全能性的必需基因。既往研究［11］發(fā)現(xiàn)其在精原細(xì)胞瘤、中樞系統(tǒng)生殖細(xì)胞腫瘤、卵巢無性細(xì)胞瘤和胚胎性癌中表達(dá)。有學(xué)者［12］發(fā)現(xiàn)Oct－4 表達(dá)水平與一些上皮性惡性腫瘤(如胰腺癌和膀胱癌等)的發(fā)生和生物學(xué)行為關(guān)系密切，陽性表達(dá)者預(yù)后較差。有研究［11］報(bào)道在散發(fā)性乳癌中，Sox2 常優(yōu)先表達(dá)于“基底型”乳癌中，表明Sox2 可能在調(diào)控乳癌的未分化狀態(tài)中發(fā)揮作用。

依據(jù)特異基因表達(dá)狀態(tài)進(jìn)行分子亞型分類是為乳癌分型的新觀點(diǎn)，在預(yù)測(cè)乳癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)、評(píng)估治療反應(yīng)及判斷生存預(yù)后等方面比傳統(tǒng)的依據(jù)腫瘤大小、組織學(xué)類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等更準(zhǔn)確［13］。在預(yù)后比較上，Luminal A 較好，Luminal B 其次，HER－2較差，Basal－like 型乳癌患者預(yù)后最差［14］。該研究結(jié)果顯示Oct4 和Sox2 在乳癌亞型中陽性表達(dá)率明顯不同，以Basal－like 型最高，說明該型中多能性或全能性細(xì)胞比例高，與Rodriguez－Pinilla 等［11］的發(fā)現(xiàn)一致。由于腫瘤干細(xì)胞分化極低，更容易適應(yīng)不同的機(jī)體環(huán)境，而且其具有較高的耐藥性，致使化療療效較差，因此推測(cè)含有乳癌干細(xì)胞數(shù)量多的乳癌亞型其預(yù)后也將較差，這可能是Basal－like 型乳癌的臨床預(yù)后最差的原因之一。

作者觀察了乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中Oct4 和Sox2蛋白的表達(dá)之間的關(guān)系，結(jié)果表明癌組織中Oct4 和Sox2 的表達(dá)呈正相關(guān)，提示Oct4 和Sox2 可能協(xié)同作用，維持胚胎干細(xì)胞自我更新以及多向分化能力。

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