MMP-9和NO在川崎病患兒急性期血清中的表達(dá)及相關(guān)性研究

劉麗莎，戈建軍，高 嶺，朱純亮，鐘天鷹

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京兒童醫(yī)院檢驗科，南京210008)

川崎病，又稱為皮膚黏膜淋巴結(jié)綜合征，是一種好發(fā)于5歲以下兒童和嬰幼兒的急性全身性血管炎性疾病。臨床表現(xiàn)為持續(xù)發(fā)熱，眼結(jié)膜充血，不同程度的口腔黏膜炎，多形性皮疹以及手足硬性腫脹伴指尖脫屑等[1]。病變可累及動脈、靜脈和毛細(xì)血管，尤以冠狀動脈明顯，可導(dǎo)致冠狀動脈瘤及心肌梗死。該病現(xiàn)已超過風(fēng)濕性心臟病，成為小兒后天性心臟病的主要病因，并且可能成為成人缺血性心臟病(如動脈粥樣硬化)的危險因素之一[2]。目前川崎病的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，研究表明多種因素參與其中[3]。該項研究對30例急性期川崎病患兒血清中基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)9和一氧化氮(NO)含量進(jìn)行測定，旨在探討兩者在川崎病發(fā)病機(jī)制中的作用。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2010年6月至2011年6月在南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京兒童醫(yī)院門診就診的川崎病患兒30例，其中男19例，女11例，年齡3～6歲。所有病例臨床診斷符合《諸福棠實用兒科學(xué)》診斷標(biāo)準(zhǔn):①持續(xù)發(fā)熱5 d以上，抗生素治療無效;②四肢末端改變:初期手足硬性水腫，掌跖、指趾端發(fā)紅，后期指趾端甲床皮膚移行處出現(xiàn)膜樣蛻皮;③多形性皮疹;④雙眼球結(jié)膜充血;⑤口唇及口腔改變:口唇潮紅，楊梅舌，口腔及咽部彌漫潮紅;⑥急性非化膿性頸部淋巴結(jié)腫大。所有患兒就診前均未使用過免疫抑制劑或免疫調(diào)節(jié)劑，并除外先天性或遺傳性疾病。同期選取南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京兒童醫(yī)院兒童保健科健康體檢的正常兒童30例作為健康對照組，其中男17例，女13例，年齡3～6歲。兩組在性別、年齡上比較均有均衡性。所有病例均取得患兒監(jiān)護(hù)人的同意。

1.2方法

1.2.1外周血標(biāo)本采集 分別采集健康兒童和急性期川崎病患兒(發(fā)病第1～11天)外周靜脈血2 mL，乙二胺四乙酸抗凝，以3000 r/min離心5 min沉淀細(xì)胞，吸取血漿置潔凈 Eppendorf管中，放置－80℃冰箱冷凍以備MMP-9和NO檢測。

1.2.2MMP-9和NO水平測定 采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清中MMP-9表達(dá)水平，MMP-9檢測試劑盒購自美國R＆D公司。采用硝酸還原法測定血清NO水平，試劑盒購自南京建成公司，嚴(yán)格按照說明書操作。

1.2.3統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 16.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。組間比較采用t檢驗，MMP-9和NO表達(dá)相關(guān)性采用Pearson法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1急性期川崎病患兒血清MMP-9和NO水平變化與正常對照組比較，急性期川崎病組血清MMP-9及NO水平均顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)(表1)。

2.2MMP-9與NO表達(dá)的相關(guān)性 采用Pearson法對急性期川崎病組患兒外周血中MMP-9和NO含量進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，血清MMP-9水平與NO含量呈正相關(guān)(r=0.664，P ＜ 0.01)。

3 討論

川崎病發(fā)病機(jī)制目前尚未明確，國內(nèi)外研究表明其可能與單核/巨噬細(xì)胞參與的免疫激活，NO參與的血管損傷，MMP的作用以及血管內(nèi)皮功能紊亂和損傷等有關(guān)[4-5]。MMPs是一組 Zn2+依賴性的內(nèi)源性蛋白水解酶家族，可降解除多糖外的全部細(xì)胞外基質(zhì)成分，并參與炎性反應(yīng)、缺血缺氧損傷、心血管和癌癥等的生理和病理過程。MMP-9是MMPs家族主要成員之一[6]，能降解明膠、Ⅳ型膠原、Ⅴ型膠原、Ⅵ型膠原、纖維連接蛋白和彈性蛋白，在細(xì)胞外基質(zhì)的降解和組織重建中起非常重要的作用[7]。亦有研究發(fā)現(xiàn)MMP-9參與了川崎病患者血管壁的損傷和冠狀動脈瘤的形成[8]。該項研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，急性期川崎病患者血清中MMP-9的水平明顯高于正常對照組，表明MMP-9參與了川崎病的早期病程，與疾病的發(fā)生、發(fā)展有一定的關(guān)系，這也為進(jìn)一步研究川崎病并發(fā)冠狀動脈損傷病變奠定了實驗基礎(chǔ)。NO是體內(nèi)由L精氨酸在NO合酶作用下產(chǎn)生的一種氣體信號分子，生理條件下具有降血壓，抑制血小板黏附、聚集、抗血栓、抑制細(xì)胞的增生、保護(hù)細(xì)胞等作用，但高濃度NO可引起血管壁炎癥的發(fā)生，導(dǎo)致冠狀動脈擴(kuò)張、內(nèi)膜增厚、管腔狹窄，與許多心血管疾病密切相關(guān)[9]。有文獻(xiàn)報道[10]，在川崎病病程早期，中性粒細(xì)胞強(qiáng)烈表達(dá)誘導(dǎo)型NO合酶，表明急性期川崎病患者體內(nèi)NO含量可能增加。該項研究發(fā)現(xiàn)，與正常對照組相比，急性期川崎病患兒外周血中NO表達(dá)上調(diào)，提示其可能參與川崎病早期炎癥性變化以及冠狀動脈的損傷過程。實驗結(jié)果也表明NO表達(dá)與MMP-9含量呈正相關(guān)，說明兩者在川崎病早期發(fā)病過程中發(fā)揮著一定的協(xié)同作用，促進(jìn)川崎病的發(fā)生與發(fā)展。但MMP-9與NO在川崎病發(fā)病中確切的致病機(jī)制和具體關(guān)系尚不清楚，值得深入探討。隨著對MMP-9和NO在川崎病患兒發(fā)病過程，尤其在川崎病患兒伴發(fā)冠狀動脈損傷中作用的進(jìn)一步認(rèn)識，及對MMP-9抑制劑使用前后病理變化的研究，其可能成為治療川崎病的一個新靶標(biāo)，并為防治川崎病及其冠狀動脈損害提供新的思路。

[1]Wood LE，Tulloh RM.Kawasaki disease in children[J].Heart，2009，95(10):787-792.

[2]Kowalczyk M，Turska-Kmie A，Zió?kowska L，et al.Symptoms，diagnosis and characteristic abnormalities in the coronary arteries in Kawasaki disease in children[J].Med Wieku Rozwoj，2010，14(4):344-349.

[3]劉薇.川崎病分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2008，14(23):3570-3574.

[4]Takahashi K，Oharaseki T，Yokouchi Y.Pathogenesis of kawasaki disease[J].Clin Exp Immunol，2011，164(Suppl 1):20-22.

[5]黃瀅，吳柱國.川崎病發(fā)病機(jī)制的研究現(xiàn)狀[J].廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2010，28(1):57-60.

[6]黃翀，涂衛(wèi)平，徐高四.基質(zhì)金屬蛋白酶-9及組織抑制劑-1與腎小管間質(zhì)纖維化[J].山東醫(yī)藥，2010，50(7):116-118.

[7]阮妙華，陳其.MMP-2、MMP-9與小兒心血管疾病關(guān)系的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2011，17(3):348-351.

[8]Gavin PJ，Crawfbrd SE，Shulman ST，et al.Systemic arterial expression of matrix metalloproteinases 2 and 9 in acute Kawasaki disease[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol，2003，23(4):576-581.

[9]Li XH，Zhang CY，Wu JX，et al.Changes in plasma hydrogen sulfide and nitric oxide levels and their clinical significance in children with Kawasaki disease[J].Chin Med J，2011，124(21):3445-3449.

[10]Yu X，Hirono KI，Ichida F，et al.Enhanced iNOS expression in leukocytes and circulating endothelial cells is associated with the progression of coronary artery lesions in acute Kawasaki disease[J].Pediatr，2004，55(4):688-694.