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    5'-磷酸二酯酶強化香菇風(fēng)味基料中鮮味成分

    2012-12-07 07:21:40安晶晶王成濤張小溪
    關(guān)鍵詞:磷酸二酯酵母粉基料

    安晶晶, 王成濤, 張小溪, 李 靖

    (北京工商大學(xué)食品添加劑與配料北京高校工程研究中心/食品風(fēng)味化學(xué)北京市重點實驗室,北京 100048)

    5'-磷酸二酯酶強化香菇風(fēng)味基料中鮮味成分

    安晶晶, 王成濤, 張小溪, 李 靖

    (北京工商大學(xué)食品添加劑與配料北京高校工程研究中心/食品風(fēng)味化學(xué)北京市重點實驗室,北京 100048)

    研究了5'-磷酸二酯酶強化香菇鮮味成分的工藝條件及其作用.在香菇打漿料中添加5'-磷酸二酯酶及酵母粉,研究各因素對5'-核苷酸產(chǎn)量的影響.結(jié)果表明,酵母粉用量、5'-磷酸二酯酶用量、酶解體系pH值、酶解溫度及時間等因素對鮮味核苷酸生成有重要影響,正交試驗優(yōu)化的酶解工藝條件為:酵母粉用量5%,5'-磷酸二酯酶用量5%,pH值4.0,酶解溫度60℃,酶解時間60 min.在此條件下制備的香菇風(fēng)味基料中鮮味核苷酸(5'-IMP、5'-GMP)產(chǎn)量達(dá)到30.01 mg/g,較未經(jīng)5'-磷酸二酯酶處理基料的鮮味核苷酸產(chǎn)量提高了3倍.

    5'-磷酸二酯酶;香菇;酵母粉;5'-核苷酸;香菇風(fēng)味基料

    香菇(Lentinus edodes)屬于擔(dān)子菌綱傘菌目香菇屬,在我國眾多省市廣泛栽培.香菇風(fēng)味成分有非揮發(fā)性和揮發(fā)性的兩類[1],核苷酸是菇類重要含氮非揮發(fā)性鮮味組分,主要包括5'-磷酸肌苷酸(5'-IMP)和 5'-磷酸鳥苷酸(5'-GMP)[2-4],與氨基酸類鮮味物質(zhì)協(xié)同,使鮮味倍增[5],產(chǎn)生單種鮮味劑難以達(dá)到的效果,是一類食品“超級”增鮮劑[6].5'-核苷酸還具有突出食物主味,抑制異味的功能[7],增效甜味、肉味,消減咸、酸、苦、腥和焦味[8-9].

    5'-磷酸二酯酶(5'-phosphodiesterase)可定向催化RNA或寡核酸分子中3'-OH的磷酸二酯鍵水解形成 5'-磷酸核苷酸(5'-IMP、5'-GMP)[10-13].目前,5'-核苷酸類增鮮劑主要是通過酶解酵母抽提物生產(chǎn)[14].本研究擬利用5'-磷酸二酯酶水解香菇及外源酵母RNA,強化其非揮發(fā)性鮮味成分,研制天然香菇增鮮劑,為蘑菇調(diào)味品和風(fēng)味基料的開發(fā)提供理論和技術(shù)支持.

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    新鮮香菇,購于北京永輝超市;5'-磷酸二酯酶(≥7 000 U/g),廣西龐博生物有限公司;酵母粉,美國Clontech公司;鮮味核苷酸(I+G,即5'-IMP+5'-GMP)標(biāo)準(zhǔn)品,韓國希杰株式會社.

    1.2 儀器與設(shè)備

    UV-2450型紫外可見分光光度計,日本島津公司;多功能料理機,榮事達(dá)集團;GT16-3型高速臺式離心機,北京時代北利離心機有限公司;恒溫水浴鍋,山東鄄城華魯電熱儀器有限公司.

    1.3 酶解工藝及鮮味核苷酸含量測定

    稱取50 g市售新鮮香菇,于多功能料理機中粉碎勻漿5 min,將香菇勻漿與一定量的酵母粉、5'-磷酸二酯酶加入1 000 mL一定pH值的緩沖液中,在一定條件下進行酶解.將酶解提取液放入沸水浴中,于95℃處理10 min滅活酶,4 000 r/min離心10 min,取上清液用紫外分光光度法測定I+G 含量[15].

    1.4 正交試驗優(yōu)化鮮味核苷酸的酶解工藝條件

    酶解生成鮮味核苷酸工藝條件優(yōu)化的正交試驗設(shè)計見表1.

    表1 正交試驗因素水平表Tab.1 Factors and levels of orthogonal experiment

    2 結(jié)果與分析

    2.1 各因素對酶解生成鮮味核苷酸的影響

    2.1.1 酵母粉用量對鮮味核苷酸生成的影響

    新鮮香菇中含有一定量RNA和寡核苷酸分子,為進一步增強其核苷酸來源,在新鮮香菇粉碎勻漿時,分別加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0,0.5%,1%,3%,5%,7%酵母粉,酶用量3%,pH值為4.0,60℃酶解60 min.酵母粉用量對鮮味核苷酸產(chǎn)量的影響見圖1.由圖1可見,隨著酵母粉用量的增加,鮮味核苷酸含量逐步增加,說明新鮮香菇中含有的RNA和寡核苷酸含量有限,添加一定量外源性酵母粉,有利于鮮味核苷酸的生成;當(dāng)酵母粉用量到達(dá)3%時,I+G水解產(chǎn)物增長趨于平緩,酶與底物之間作用趨于平衡,因此選擇3%酵母粉用量進行后續(xù)實驗.

    圖1 酵母粉用量對鮮味核苷酸產(chǎn)量的影響Fig.1 Effect of amount of yeast on yield of 5'-nucleotide

    2.1.2 酶用量對鮮味核苷酸生成的影響

    新鮮香菇粉碎勻漿,加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%的酵母粉,并分別加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%,1%,3%,5%,7%的5'-磷酸二酯酶,于 pH值4.0,60℃酶解60 min.酶用量對I+G產(chǎn)量的影響見圖2.在0.5% ~5%的酶用量時,隨著酶用量增加,I+G產(chǎn)量不斷上升;當(dāng)酶用量超過3%時,鮮味核苷酸的增加量趨于緩慢,因此3%酶用量較為適宜.

    2.1.3 酶解體系pH值對鮮味核苷酸產(chǎn)量的影響

    新鮮香菇勻漿(含3%酵母粉和3%5'-磷酸二酯酶)加入 pH 值為 3.0,4.0,5.0,6.0,7.0,8.0,9.0的緩沖液中,于60℃酶解60 min.體系pH值對鮮味核苷酸產(chǎn)量的影響見圖3.pH值為3.0~4.0時,隨pH值增加,鮮味核苷酸產(chǎn)量不斷增加;pH值為4.0~5.0,鮮味核苷酸產(chǎn)量變化幅度不大;pH值為5.0以上,鮮味核苷酸產(chǎn)量開始下降.說明5'-磷酸二酯酶水解RNA的適宜pH值為4.0~5.0.

    圖2 5'-磷酸二酯酶用量對鮮味核苷酸產(chǎn)量的影響Fig.2 Effect of amount of 5'-phosphodiesterase on yield of 5'-nucleotide

    圖3 pH值對鮮味核苷酸產(chǎn)量的影響Fig.3 Effect of pH on yield of 5'-nucleotide

    2.1.4 酶解溫度對鮮味核苷酸產(chǎn)量的影響

    在酶用量3%,酵母粉用量為3%,pH值為4.0的條件下,分別于 20,40,60,70,80,90 ℃ 的溫度酶解60 min.酶解溫度對鮮味核苷酸產(chǎn)量的影響見圖4.在20~60℃時,隨著酶解溫度上升,鮮味核苷酸產(chǎn)量逐漸提高;繼續(xù)提高溫度,鮮味核苷酸產(chǎn)量出現(xiàn)下降趨勢;70℃以后鮮味核苷酸產(chǎn)量下降趨勢明顯.表明5'-磷酸二酯酶較適宜的水解溫度在60~70℃,實驗選擇60℃作為酶解的適宜溫度.

    2.1.5 酶解時間對鮮味核苷酸產(chǎn)量的影響

    在酶用量為3%,酵母粉用量為3%,pH值為4.0,酶解溫度60℃的條件下進行酶解,每隔15 min進行取樣檢測.酶解時間對鮮味核苷酸產(chǎn)量的影響見圖5.隨著酶解時間的延長,鮮味核苷酸產(chǎn)量漸增,但生成曲線較為平緩,表明酶解速度不慢,底物經(jīng)約60 min即可被5'-磷酸二酯酶充分酶解,酶解時間對酶解效果影響較?。虼嗣附鈺r間確定為60 min.

    圖4 酶解溫度對鮮味核苷酸產(chǎn)量的影響Fig.4 Effect of enzymolysis temperature on yield of 5'-nucleotide

    圖5 酶解時間對鮮味核苷酸產(chǎn)量的影響Fig.5 Effect of enzymolysis time on yield of 5'-nucleotide

    2.2 正交試驗結(jié)果分析

    根據(jù)各單因素條件的實驗結(jié)果,選擇酶用量、酵母粉用量、pH值、溫度4個對鮮味核苷酸生成影響較大的因素進行四因素三水平L9(34)的正交試驗設(shè)計,優(yōu)化酶解工藝條件.正交試驗結(jié)果及極差分析見表2,正交試驗方差分析結(jié)果見表3.

    表2 正交試驗優(yōu)化鮮味核苷酸的酶解工藝條件Tab.2 Enzymolysis condition optimization through orthogonal experiment design

    表3 正交試驗方差分析結(jié)果Tab.3 Variance analysis of or thogonal experiment

    由表2極差分析可以看出,4個因素對鮮味核苷酸產(chǎn)量影響的主次順序依次為:A>B>C>D,優(yōu)化方案為:A3B3C1D1,因此酶解生成鮮味核苷酸優(yōu)化后的條件為:酵母粉用量為5%,酶用量為5%,pH值4.0,酶解溫度60℃.由表3方差分析可以看出:酵母粉用量、酶用量、體系pH值、酶解溫度對鮮味核苷酸生成量均有影響,其中酵母粉用量和酶用量影響顯著,pH值和酶解溫度的影響為其次.

    按照優(yōu)化的提取工藝條件,即在酵母粉用量為5%,酶用量為5%,pH值4.0,酶解溫度60℃,酶解時間60 min時,進行實驗,鮮味核苷酸產(chǎn)量為30.01 mg/g,略好于正交試驗優(yōu)化結(jié)果(29.19 mg·g-1).

    2.3 5'-磷酸二酯酶強化香菇鮮味核苷酸的效果比較

    在優(yōu)化的工藝條件下,5'-磷酸二酯酶強化香菇鮮味核苷酸的效果比較見表4,只添加5'-磷酸二酯酶時,鮮味核苷酸的產(chǎn)量提高了34.39%;只添加酵母粉時,鮮味核苷酸的產(chǎn)量提高了70.19%;將兩者同時作用于香菇鮮味成分的強化時,其產(chǎn)量提高了3倍,強化效果顯著.

    表4 5'-磷酸二酯酶強化香菇鮮味核苷酸的效果比較Tab.4 Effect of 5'-phosphodiesterase on enhancing Lentinus edodes taste

    3 結(jié)論

    研究了5'-磷酸二酯酶對香菇風(fēng)味基料中鮮味核苷酸酶解增量的影響.添加適量酵母粉、5'-磷酸二酯酶解有利于鮮味核苷酸生成.酵母粉用量、酶用量、酶解體系pH值、溫度及時間等因素對鮮味核苷酸生成均有重要影響.正交試驗優(yōu)化香菇風(fēng)味基料制備工藝條件為:酵母粉用量5%,酶用量5%,pH值4.0,60℃酶解60 min,在此條件下,香菇風(fēng)味基料中鮮味核苷酸產(chǎn)量達(dá)到30.01 mg/g,比未經(jīng)5'-磷酸二酯酶處理基料的鮮味核苷酸產(chǎn)量提高了3倍.

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    (責(zé)任編輯:葉紅波)

    Preparation of Mushrooms Flavor Ingredients by 5'-phosphodiesterase

    AN Jing-jing, WANG Cheng-tao, ZHANG Xiao-xi, LI Jing
    (Beijing Higher Institution Engineering Research Center of Food Additives and Ingredients/Beijing Key Laboratory of Flavor Chemistry,Beijing Technology and Business University,Beijing 100048,China)

    Effects of 5'-phosphodiesterase and yeast on the formation of Lentinus edodes taste compounds were studied in this paper.5'-phosphodiesterases and yeast powder were added in crushed homogenate liquid of mushroom Lentinus edodes,and 5'-nucleotide yield was detected.Results showed that the taste compounds contents of fresh Lentinus edodes were strengthened by 5'-phosphodiesterase and yeast.The strengthening condition was 5%yeast,5%5'-phosphodiesterase,pH 4.0,reaction temperature 60 ℃,reaction time 60 min.5'-nucleotide yield was 30.01 mg/g under the optimization condition,which was triple as the control without 5'-phosphodiesterase.

    5'-phosphodiesterase;Lentinus edodes;yeast;5'-nucleotide;mushrooms flavour enhancer

    TS202.3

    A

    1671-1513(2012)03-0035-04

    2012-03-03

    北京市屬高等學(xué)校人才強教計劃項目(PHR201008237);北京工商大學(xué)研究生科研學(xué)術(shù)創(chuàng)新基金項目(19000101026);學(xué)科與研究生教育-食品學(xué)科特色學(xué)科群建設(shè)資助項目(2011111).

    安晶晶,女,碩士研究生,研究方向為食品生物技術(shù);

    王成濤,男,教授,博士,主要從事食品生物技術(shù)方面的研究.通訊作者.

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