白千層枝和葉總黃酮含量的測定

范超君，鮑長余，陳湛娟，畢和平，2*

（1.海南師范大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院，海南 ?？?571158；

2.海南師范大學(xué)“省部共建-熱帶藥用植物化學(xué)”教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南 ?？?571158）

白千層枝和葉總黃酮含量的測定

范超君1，鮑長余1，陳湛娟1，畢和平1，2*

（1.海南師范大學(xué) 化學(xué)與化工學(xué)院，海南 海口 571158；

2.海南師范大學(xué)“省部共建-熱帶藥用植物化學(xué)”教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南 ?？?571158）

以蘆丁為對照品，NaNO2-Al（NO3）3-NaOH為顯色系統(tǒng)，用紫外分光光度法，在498 nm波長測定白千層枝和葉中總黃酮的含量.結(jié)果顯示，其回歸方程為A=0.01022C+0.0165，r=0.9995，吸光度在0～100 mg/L范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系.測定結(jié)果表明，白千層枝和葉中總黃酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.69%和0.63%.

白千層；總黃酮；紫外分光光度法

白千層（Melaleuca leucadendronLinn.）又名千層皮、脫皮樹、玉蝴蝶、玉樹等，為常綠喬木，樹皮灰白色，厚而疏松，屬桃金娘科（Myrtaceae）白千層屬（Melaleuca）植物，我國福建、海南、廣東、廣西、臺灣等均有分布.白千層葉具芳香解表，祛風(fēng)止痛等功效，用于感冒發(fā)熱，牙痛、風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛，神經(jīng)痛，腸炎腹瀉，外用治過敏性皮炎，濕疹等[1-3].從白千層屬的枝和葉中提取的芳香油具有抗菌、消毒、止癢、防腐等作用，是洗滌劑、美容保健品等日用化工品和醫(yī)療用品的主要原料之一，需求廣泛.近年來，文獻(xiàn)主要研究了不同產(chǎn)地、不同品種的白千層屬的揮發(fā)油成分[4-5]，未見有對白千層黃酮類含量測定的報道.黃酮類化合物具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗癌、抗腫瘤、抗心腦血管疾病、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗衰老、抗輻射、抑菌等作用[6-7].為開發(fā)利用白千層屬藥用植物提供科學(xué)依據(jù)，本文以蘆丁為對照品，以Na?NO2-Al（NO3）3-NaOH為顯色體系，采用紫外分光光度法測定了海南產(chǎn)白千層枝和葉中總黃酮的含量.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、試劑與材料

UV2600紫外分光光度計（上海國美科學(xué)儀器有限公司）；EYEL4OSB-2100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(日本東京理化)；FA1604型電子天平（上海精科天平廠）；索氏提取器（自制）.

蘆丁對照品（北京北納生物技術(shù)研究院，純度大于99.5%），甲醇、石油醚、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁等均為國產(chǎn)分析純.

白千層于2011年7月采集于海南師范大學(xué)校園內(nèi)，經(jīng)海南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院鐘瓊芯高級實(shí)驗(yàn)師鑒定為白千層（Melaleuca leucadendronLinn.）的枝和葉.

1.2 白千層枝和葉中總黃酮的提取

將干燥并粉碎過的白千層枝和葉各準(zhǔn)確稱取2.00 g，加入300 mL石油醚，索氏法提取至無色，揮干石油醚，再用甲醇提取至提取液無色.濃縮提取液并分別用甲醇定容于50 mL容量瓶中，即得總黃酮供試品溶液.

1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10.0 mg，溶解后，用甲醇定容于50 mL的容量瓶中，得到濃度為0.2 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液.參照文獻(xiàn)[8-12]，準(zhǔn)確吸取蘆丁對照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分別置于6個10 mL容量瓶中，各加甲醇至5 mL，再分別加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的NaNO2溶液0.5 mL，搖勻放置8 min后，分別加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的Al（NO3）3溶液0.5 mL，搖勻放置8 min，再分別加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%的NaOH溶液4.0 mL，搖勻放置15 min后，在498 nm波長處測定溶液的吸光度值A(chǔ)，同時進(jìn)行空白對照.以蘆丁對照品溶液濃度C（μg/mL）為橫坐標(biāo)，溶液的吸光度值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖.

2 結(jié)果與討論

2.1 測定波長的選擇

精密吸取蘆丁對照品溶液3.0 mL于10 mL的容量瓶，加甲醇至5 mL，余下按1.3項(xiàng)操作，在波長為400～600 nm的范圍內(nèi)進(jìn)行波長掃描（見圖1），實(shí)驗(yàn)證明，對照品溶液在498 nm處有最大吸收峰，故選擇波長498 nm作為白千層枝和葉提取液中總黃酮含量的測定波長.

圖1 波長掃描曲線Fig.1Wavelength scanning curve

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線與回歸方程

按1.3項(xiàng)所述方法測定對照品吸光度，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖2.結(jié)果表明，對照品濃度在0～100 mg/L的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，其線性回歸方程為A=0.01022C+0.0165，r=0.9995.

圖2 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Fig.2Standard curve

2.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密量取對照品溶液和樣品溶液各3.0 mL，按1.3項(xiàng)下方法處理，每隔5 min測定1次吸光度，結(jié)果表明，在測定時間5～80 min內(nèi)，吸光度值A(chǔ)基本穩(wěn)定.

2.4 精密度實(shí)驗(yàn)

精密量取白千層技和葉提取液，按1.3項(xiàng)方法處理，平行操作5次，分別測定吸光度A，結(jié)果見表1.白千層枝和葉提取液的測定相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD分別為0.66%（n=5）和0.48%（n=5），精密度良好.

表1 精密度實(shí)驗(yàn)Tab.1 Precision test

2.5 白千層總黃酮含量測定

精密量取白千層枝和葉樣品溶液各3份，每份3.0 mL，按1.3項(xiàng)所述方法處理，在498 nm波長處測定吸光度，結(jié)果見表2.結(jié)果表明，白千層枝的總黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.69%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.83%；葉的總黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.63%，RSD=0.90%.

2.6 加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)

精密量取白千層枝、葉的提取液各5份，每份3.0 mL，準(zhǔn)確加入一定量的蘆丁對照品，按1.3項(xiàng)方法處理，結(jié)果見表3.白千層枝和葉提取液的平均加樣回收率分別為99.91%，RSD=0.17%（n=5）和99.99%，RSD=0.036%（n=5）.

表2 樣品黃酮含量Tab.2 Determination results of total flavonoid in the stems and leaves

表3 加樣回收率實(shí)驗(yàn)Tab.3Recovery test

3 結(jié)論

以NaNO2-Al（NO3）3-NaOH體系為顯色劑，采用紫外分光光度法，測定海南產(chǎn)白千層枝和葉中總黃酮的含量，結(jié)果表明，白千層葉中總黃酮的總質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.63%，枝中總黃酮的總質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.69%.該法操作簡便，精密度高、重復(fù)性好，結(jié)果穩(wěn)定可靠.本文方法可用于白千層藥材的總黃酮含量的測定和質(zhì)量控制.

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Determination of Total Flavonoid Content in the Stems and Leaves of Melaleuca leucadendron Linn

FAN Chaojun1，BAO Changyu1，CHEN Zhanjuan1，BI Heping1，2＊
（1.College of Chemistry and Chemical Engineering，Hainan Normal University，Haikou571158，China；
2.Key Laboratory of Tropical Medicinal Plant Chemistry of Ministry of Education，Haikou571158，China）

The total flavonoids content in the stems and leaves of Melaleuca leucadendron Linn was determined by spectrophotometry with rutin standard and NaNO2-A（lNO3）3-NaOH system.The regression equation wasA=0.01022C+0.0165（r=0.9995）.The results showed that the mass fractions of total flavonoid in the stems and leaves were 0.69%and 0.63%respectively.The method was stable,accurate,reproducible,highly sensitive and thus was a realistic and practi?cal approach for determining flavonoid content of Melaleuca leucadendron linn.

Melaleuca leucadendron Linn.；flavonoid ；ultraviolet spectrophotometric method

R 284.1

A

1674-4942（2012）01-0063-03

2012-01-08

海南師范大學(xué)國家大學(xué)生創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目（101165804）

*通訊作者

黃 瀾