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    2種豆科牧草種子超干貯藏適宜條件的探索*

    2012-12-03 06:53:12伊衛(wèi)東
    草原與草業(yè) 2012年1期
    關(guān)鍵詞:發(fā)芽率電導(dǎo)率黃芪

    王 偉,宛 濤*,蔡 萍,伊衛(wèi)東

    (1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué),內(nèi)蒙古 呼和浩特 010019;2.內(nèi)蒙古錫林郭勒盟錫林浩特職業(yè)學(xué)院,內(nèi)蒙古 錫林浩特 026000)

    種子關(guān)系到國(guó)計(jì)民生,擁有高質(zhì)量的種質(zhì)資源是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的必要保證,所以種質(zhì)資源保存意義重大。其中種子含水量和貯藏溫度是影響種子貯藏壽命的兩個(gè)關(guān)鍵因素,最佳貯藏溫度和種子含水量因種子種類不同而異〔1〕。考慮到種子庫(kù)運(yùn)行成本和可行性原則,種子庫(kù)的溫度又不可能設(shè)置過(guò)多,所以在一定溫度下確定種子最佳保存含水量顯得尤為重要。國(guó)際上一般把種子含水量控制到5%±1%和-18℃低溫作為長(zhǎng)期保存種質(zhì)資源的理想條件〔2〕。但近年來(lái)有大量研究表明種子在含水量低于5%的貯藏條件可使其壽命更為延長(zhǎng),因此種子超干貯藏技術(shù)就在探索中逐步產(chǎn)生。通過(guò)降低種子水分來(lái)達(dá)到同降低溫度相似的保存效果,從而節(jié)約了種子保存的基礎(chǔ)建設(shè)、能耗等成本。大量研究表明,在采用超干貯藏技術(shù)時(shí),種子的最適含水量在不同溫度下并不相同,同時(shí)也不是含水量越低就越有利于貯藏〔3,4〕。種子的發(fā)芽率是判斷種子的活力的最基本標(biāo)準(zhǔn),同時(shí)通過(guò)測(cè)定其外滲物的電導(dǎo)率可以了解種子細(xì)胞膜的完整程度。本試驗(yàn)旨在探求2種豆科牧草種子在4個(gè)不同溫度及不同含水量條件下,貯藏3年后的發(fā)芽率及電導(dǎo)率,以探索出在現(xiàn)有條件下最適宜扁蓿豆、塔落巖黃芪種子的貯藏條件。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    扁蓿豆種子來(lái)源于內(nèi)蒙古農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院草原所2007年采收的種子,初始含水量為7.35%。2008年將扁蓿豆種子制備為1.51%、2.69%、4.29%、5.32%、7.35%的5個(gè)不同含水量,分別貯藏于45℃、20℃、4℃、-4℃條件下備用。

    塔落巖黃芪種子來(lái)源于內(nèi)蒙古農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)基地2007年采收的種子,初始含水量為7.38%。2008年將塔落巖黃芪種子制備為2.17%、3.89%、4.74%、5.84%、7.38% 的 5 個(gè) 不同含水量,分別貯藏于45℃、20℃、4℃、-4℃條件下備用。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 超干處理方法

    采用室溫硅膠干燥法〔5〕:將種子置于尼龍網(wǎng)袋中,填埋于干燥器內(nèi)的干燥硅膠里,種子與硅膠的質(zhì)量比為1∶10,室溫下脫水干燥,每12h更換經(jīng)120℃烘干冷卻后的干燥硅膠。每30d稱重1次,當(dāng)種子含水量分別降到試驗(yàn)所需要的含水量時(shí),取出裝入鋁箔袋中密封貯藏。

    1.2.2 超干種子的貯藏方式

    將經(jīng)超干處理后不同含水量梯度的種子放在一起組成1套種子,將成套種子分成4份,分別貯藏于-4℃、4℃、20℃(室溫)、45℃條件下備用。種子貯藏時(shí)間為2008年6月至2011年6月,指標(biāo)測(cè)定時(shí)間為2011年9月,通過(guò)發(fā)芽率、電導(dǎo)率指標(biāo)測(cè)定及數(shù)據(jù)分析,觀察不同情況下的貯藏狀況。

    1.2.3 回濕處理

    經(jīng)超干處理種子在吸脹時(shí),由于水分急劇提高,膜相調(diào)整會(huì)出現(xiàn)紊亂現(xiàn)象,修復(fù)時(shí)間也相應(yīng)延長(zhǎng),當(dāng)修復(fù)速度趕不上膜相調(diào)整的速度時(shí),往往會(huì)產(chǎn)生吸脹損傷〔6,7〕。所以在吸脹前要先對(duì)種子進(jìn)行回濕調(diào)節(jié)處理,使吸水速度膜相調(diào)整速度相適合。具體方法是將貯藏到期的各超干處理種子分別置于尼龍網(wǎng)袋中,依次放入盛有飽和氯化鈣溶液(相對(duì)濕度為35%)、飽和氯化銨溶液(相對(duì)濕度為70%)和蒸餾水(相對(duì)濕度為100%)的干燥器中,用凡士林密封,室溫下分別平衡24h,取出待用〔8〕。

    1.3 指標(biāo)測(cè)定

    1.3.1 發(fā)芽率指標(biāo)測(cè)定

    根據(jù)《牧草種子檢驗(yàn)規(guī)程》〔9〕測(cè)定發(fā)芽率:以3層濾紙為發(fā)芽床,50粒/皿,重復(fù)4次。塔落巖黃芪發(fā)芽條件的選擇為25℃恒溫培養(yǎng),光照8h,第7d首次計(jì)數(shù),第12d木次計(jì)數(shù)。扁蓿豆發(fā)芽條件的選擇為先在4℃下冰箱預(yù)冷7d打破休眠,再在20℃恒溫下培養(yǎng),光照8h,第10d首次計(jì)數(shù),第14d末次計(jì)數(shù),計(jì)算正常種苗的百分率。

    1.3.2 電導(dǎo)率指標(biāo)測(cè)定

    取50粒種子稱重,3次重復(fù),稱重后用去離子水沖洗3次,吸干種子表面吸附的水分,放入250mL的帶蓋三角瓶中,用量筒加入200mL去離子水。每次測(cè)定都設(shè)1個(gè)對(duì)照,對(duì)照加200mL去離子水。將三角瓶在20℃的恒溫箱內(nèi)放置24h后,用EC215型電導(dǎo)儀測(cè)定浸出液電導(dǎo)率,減去對(duì)照三角瓶?jī)?nèi)去離子水的電導(dǎo)率,再除以樣品重量與硬實(shí)種子重量的差值,即為種子浸出液的電導(dǎo)率〔10〕。電導(dǎo)率計(jì)算公式為:

    電導(dǎo)率(μs·cm-1·g-1)=(樣品值-對(duì)照值)/(樣品重量—硬實(shí)種子重量)

    2 結(jié)果與分析

    2.1 超干貯藏扁蓿豆種子于不同溫度下貯藏3年后發(fā)芽率的比較

    從圖1中可以看出,相同溫度條件下隨著含水量增加,扁蓿豆種子發(fā)芽率表現(xiàn)為先上升后下降的趨勢(shì)。在45℃條件下,含水量為1.51%的發(fā)芽率最高,為39.0%,明顯高于對(duì)照組21.5%的發(fā)芽率;在20℃、4℃和-4℃條件下,發(fā)芽率最高時(shí),含水量均為2.69%,其各溫度的發(fā)芽率分別為:45.5%、47.0%和48.5%。

    在相同含水量條件下,隨貯藏溫度的降低,扁蓿豆種子發(fā)芽率呈現(xiàn)增大的趨勢(shì)。其中45℃處理下的扁蓿豆種子發(fā)芽率與其他溫度相比在各含水量梯度下都是最低。45℃條件下,在含水量為7.35%時(shí),扁蓿豆種子發(fā)芽率最低,為21.5%;在-4℃條件下,在含水量為2.69%時(shí),扁蓿豆種子發(fā)芽率最高,為48.5%。

    圖1 超干處理后不同含水量扁蓿豆種子在不同溫度下的發(fā)芽率

    2.2 超干貯藏扁蓿豆種子于不同溫度下貯藏3年后電導(dǎo)率的比較

    在同一含水量條件下,電導(dǎo)率隨著溫度的升高而增大(圖2)。45℃條件下的扁蓿豆種子電導(dǎo)率均高于其它溫度條件下各含水量的電導(dǎo)率,含水量為7.35%時(shí),電導(dǎo)率值最高,為285μs/g·cm。其中扁蓿豆種子電導(dǎo)率在-4℃,含水量2.69%時(shí)最低,為123μs/g·cm。

    圖2 超干處理后不同含水量扁蓿豆種子在不同溫度下的電導(dǎo)率

    相同溫度條件下,對(duì)照組電導(dǎo)率值都高于超干組 (除 -4℃、5.32% 外),45℃ 時(shí),在 含 水 量2.69%~4.29%扁蓿豆種子電導(dǎo)率都處在較低水平,為210~221μs/g·cm;20℃處理下的扁蓿豆電導(dǎo)率隨著含水量的增加呈先減后增的變化,含水量為2.69%~4.29%時(shí)值最低,都為174μs/g·cm;4℃處理下的扁蓿豆電導(dǎo)率隨著含水量的增加變化平緩,對(duì)照組電導(dǎo)率值最大,為176μs/g·cm;-4℃處理下的扁蓿豆電導(dǎo)率隨著含水量的增加呈先減少后增加趨勢(shì),含水量處于2.69%~4.29%之間時(shí)電導(dǎo)率值都處于較低水平,為123~140μs/g·cm。

    2.3 超干貯藏塔落巖黃芪種子于不同溫度下貯藏3年后發(fā)芽率的比較

    由圖3可知,塔落巖黃芪在45℃處理下的發(fā)芽率在各含水量梯度下都低于其他溫度,在含水量為7.38%時(shí)發(fā)芽率最低,為0.0%。20℃、4℃、-4℃處理下的塔落巖黃芪種子在貯藏3年后其發(fā)芽率都高于45℃處理下的塔落巖黃芪發(fā)芽率,并且這3個(gè)溫度下貯藏種子的發(fā)芽率在各含水量梯度下變化較緩,相比來(lái)說(shuō)對(duì)照組種子發(fā)芽率都低于對(duì)應(yīng)超干組種子。

    20℃處理時(shí),含水量在2.17%~4.74%之間發(fā)芽率較高,為86.0%~89.0%;4℃處理下含水量為2.17%時(shí),發(fā)芽率最高為89.0%,對(duì)照組發(fā)芽率最低為77%;-4℃處理下在各含水量梯度呈緩慢降低趨勢(shì),在含水量為2.17%時(shí),塔落巖黃芪發(fā)芽率最高為95.0%。

    圖3 超干處理后不同含水量塔落巖黃芪種子在不同溫度下的發(fā)芽率

    2.4 超干貯藏塔落巖黃芪種子于不同溫度下貯藏3年后電導(dǎo)率的比較

    從圖4中可以看出,塔落巖黃芪種子電導(dǎo)率值在同一水分梯度下隨著溫度的升高而升高,同一溫度下隨著含水量的增加,電導(dǎo)率呈現(xiàn)增大的趨勢(shì),相同溫度條件下,未經(jīng)超干處理的對(duì)照組電導(dǎo)率較高,其值大于所有同一溫度下其他含水量下種子。45℃處理下的電導(dǎo)率值都處于高位,其中在含水量7.38%時(shí),電導(dǎo)率最大,值為290μs/g·cm;20℃、4℃、-4℃處理下的電導(dǎo)率曲線變化平緩,其中在-4℃條件,含水量2.17%時(shí),電導(dǎo)率最低,值為70μs/g·cm。

    圖4 超干處理后不同含水量塔落巖黃芪種子在不同溫度下的電導(dǎo)率

    3 討論與結(jié)論

    傳統(tǒng)的種子干燥理論認(rèn)為種子貯藏壽命與種子的含水量和貯藏溫度都有關(guān),認(rèn)為貯藏溫度越低,壽命越長(zhǎng),貯藏時(shí)超干種子含水量越低,種子壽命越長(zhǎng)。最適含水量隨著貯藏溫度的變化而變化,貯藏溫度越高,種子超干處理后最適含水量越低,但就目前而言發(fā)現(xiàn)超干貯藏最適合含水量沒(méi)有固定范圍,因種子不同而不同。

    3.1 超干處理后扁蓿豆種子的儲(chǔ)存效果

    本實(shí)驗(yàn)中發(fā)芽率隨溫度變化的總體趨勢(shì)是隨著溫度的升高發(fā)芽率降低,同一溫度下對(duì)照組發(fā)芽率值低于超干組,過(guò)度干燥不利于扁蓿豆種子貯藏,在含水量為2.69%左右時(shí)所有溫度下都保持著較高發(fā)芽率,其中在-4℃時(shí)發(fā)芽率最大,為48.5%。

    膜結(jié)構(gòu)與功能的穩(wěn)定主要表現(xiàn)在膜的選擇透性上,若細(xì)胞受到輕微的破損,種子就會(huì)失去半透性功能,種子浸水后,細(xì)胞內(nèi)的部分礦物質(zhì)和有機(jī)質(zhì)全滲到中,引起水的電導(dǎo)率增加。在本實(shí)驗(yàn)所設(shè)置的實(shí)驗(yàn)條件下,同一水分梯度下隨著溫度的升高電導(dǎo)率值增大,對(duì)照組電導(dǎo)率都顯著高于超干組,且過(guò)度超干的種子電導(dǎo)率值都較高,其中在-4℃含水量為5.32%時(shí)電導(dǎo)率高于對(duì)照組可能是因?yàn)樵谶@個(gè)條件下膜系統(tǒng)被破壞造成電解液大量滲出電導(dǎo)率偏高。單就電導(dǎo)率而言適度超干貯藏有利于扁蓿豆種子的貯藏,各溫度下最適合含水量不隨溫度變化而變化,這與Vertucci等人的研究結(jié)果相一致〔11〕,本實(shí)驗(yàn)中塔落巖黃芪種子最適合含水量為2.69%。

    本實(shí)驗(yàn)條件下超干貯藏適合扁蓿豆種子的保存,在-4℃含水量為2.69%時(shí)發(fā)芽率最大為48.5%、電導(dǎo)率為123μs/g·cm。

    3.2 超干處理后塔落巖黃芪種子的儲(chǔ)存效果

    在4個(gè)溫度下都呈現(xiàn)出隨著含水量的增加發(fā)芽率降低的趨勢(shì),高溫條件下超干組發(fā)芽率比對(duì)照組有顯著增加,室溫及低溫條件下超干組都保持較高發(fā)芽率,說(shuō)明在本實(shí)驗(yàn)中溫度對(duì)塔落巖黃芪種子發(fā)芽率影響不是很大,其發(fā)芽率大小主要由含水量多少?zèng)Q定。45℃處理下在含水量2.17%~3.89%之間其發(fā)芽率值相對(duì)較高;20℃、4℃、-4℃處理下的塔落巖黃芪種子在貯藏3年后其發(fā)芽率都高于45℃處理下的塔落巖黃芪發(fā)芽率,并且這3個(gè)溫度下貯藏種子的發(fā)芽率在各含水量梯度下變化較緩,各組之間相差不大,相比來(lái)說(shuō)對(duì)照組發(fā)芽率都低于對(duì)應(yīng)超干組種子,說(shuō)明超干貯藏有利于塔落巖黃芪的保存。

    電導(dǎo)率方面,塔落巖黃芪在同一含水量條件下隨著溫度的升高電導(dǎo)率值升高,同一溫度下隨著含水量的增加,電導(dǎo)率呈現(xiàn)增大的趨勢(shì),同一溫度下未經(jīng)超干處理的對(duì)照組電導(dǎo)率最高,其值大于所有同一溫度下其他含水量下種子。45℃時(shí)在2.17%處電導(dǎo)率值最低,20℃、4℃、-4℃處理下的塔落巖黃芪電導(dǎo)率曲線相互變化不大較平緩,20℃處理下在2.17%~4.74%之間電導(dǎo)率值相對(duì)較?。?℃處理下的其含水量在2.17%~5.84%之間值都相對(duì)較小,-4℃處理下除對(duì)照組外其他含水量種子貯藏3年后都保持較完整的膜系統(tǒng)。

    本實(shí)驗(yàn)條件下我們可以發(fā)現(xiàn)塔落巖黃芪適合超干貯藏,并且最佳含水量范圍隨著溫度的降低范圍增大,這與Smith等人的研究結(jié)果一致〔12〕,45℃時(shí)最佳含水量為2.17%;20℃時(shí)最佳含水量為2.17%~4.74%;4℃時(shí)最佳含水量為2.17%~5.84%;-4℃時(shí)最佳含水量為2.17%~5.84%,本實(shí)驗(yàn)下最佳貯藏條件為-4℃下含水量為2.17%,發(fā)芽率為95%、電導(dǎo)率為70μs/g·cm。

    〔1〕江曉峰,景新明,鄭光華 .含水量對(duì)種子儲(chǔ)藏壽命的影響 .植物學(xué)報(bào)〔J〕.2001,43(6):551-557.

    〔2〕IBPGR.Report of the IBPGR working group on engineering design and cost aspects of 1ong term seed storage facilities,IBPGR,Rome,1976.

    〔3〕沈鏑,漆小泉 .大白菜超低含水量種子保存研究〔J〕.中國(guó)蔬菜,1996,(4):19-22.

    〔4〕胡承蓮,胡小榮,辛萍萍 .超干燥水稻種子貯藏研究〔J〕.種子,1999,(2):18-21.

    〔5〕董海洲,高榮岐,尹燕枰,等 .不同貯藏和包裝條件下大蔥種子生理生化特性的研究〔J〕.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),1998,31(4):59-64.

    〔6〕Taylier A G,Lee S S,Beresiewicz M M,et a1.Amino acid leakage from added vegetable seeds.Seed Sci&Technol,1995,23(2):113-122.

    〔7〕鄭光華,燕義唐,張慶昌 .大豆種子吸脹冷害及其膜修補(bǔ)的探討〔J〕.中國(guó)科學(xué),1988,(31):936-943.

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    〔9〕國(guó)際種子檢驗(yàn)協(xié)會(huì)(ISTA).牧草種子檢驗(yàn)規(guī)程〔M〕.上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社,1993.

    〔10〕黃永菊,伍曉明,沈金雄 .大豆種子超干保存研究〔J〕.中國(guó)油料作物學(xué)報(bào),2000,22(3):39-42.

    〔11〕Vertucci C W,Roos E E.Theoretical basis of protocols for seed storageⅡ.The influence of temperature on optimal moisture levels.Seed Science Research,1993,3:201—213.

    〔12〕Smith R D.Seed storage,temperature and relative humidity.Seed Science Research,1992,2:113-116.

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