松潘烏頭總堿的抗炎機(jī)制研究

李 敏，李曉強(qiáng)，焦海勝，王建治（蘭州大學(xué)第二醫(yī)院，蘭州 730030）

烏頭屬植物松潘烏頭（Aconitum sungpanense Hand.-Mazz.）分布在甘肅、四川、青海等廣大地區(qū)，民間常用于治療跌打損傷、風(fēng)濕性和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病。其化學(xué)成分主要為多種生物堿，以二萜類生物堿為主[1]。藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，松潘烏頭總堿（TAS）有鎮(zhèn)痛、抗炎、解熱的作用[2，3]。筆者將主要研究TAS的抗炎機(jī)制，為其開(kāi)發(fā)、利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

751型分光光度計(jì)、UV/VIS-731型紫外分光光度計(jì)（上海分析儀器廠）。

1.2 試藥

TAS（蘭州大學(xué)藥學(xué)院藥物分析教研室提供，含量：1.14%）；消炎痛（蘭州制藥廠，批號(hào)：20101106）；角叉菜膠（Car，遼寧藥物研究所）；丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.3 動(dòng)物

普通級(jí)昆明種小鼠，♀♂兼用，體重（22.0±2.0）g（動(dòng)物生產(chǎn)合格證號(hào)：醫(yī)動(dòng)字第14-005）；普通級(jí)Wistar大鼠，♀♂兼用，體重（185.0±25.0）g（動(dòng)物生產(chǎn)合格證號(hào)：醫(yī)動(dòng)字第14-006），均由蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2 方法

2.1 明膠致炎小鼠多形核白細(xì)胞游走實(shí)驗(yàn)[4]

♂小鼠40只隨機(jī)均分為4組，即對(duì)照（等容量生理鹽水，ig）、消炎痛（2.0 mg·kg－1，sc）和TAS高、低劑量（3.0、1.5 mg·kg－1，ig）組，每天給藥1次，連續(xù)3 d。于末次給藥1 h后ip 1%明膠0.8 mL，3 h后處死小鼠，取腹液1滴涂片，瑞氏染色，油鏡下計(jì)100個(gè)多形核白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、組織細(xì)胞，從中計(jì)算出多形核白細(xì)胞的百分比。

2.2 小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性測(cè)試[5]

♀小鼠40只均分為4組，即對(duì)照（等容量生理鹽水，ig）、消炎痛（20 mg·kg－1，sc）和TAS高、低劑量（3.0、1.5 mg·kg－1，ig）組。給藥前禁食不禁水12 h。給藥30 min后，每鼠尾iv 0.5%伊文斯藍(lán)溶液5 mL·kg－1，5 min后ip 0.7%乙酸溶液10 mL·kg－1，30 min后處死小鼠，用蒸餾水反復(fù)沖洗腹腔內(nèi)伊文思藍(lán)溶液，將沖洗液稀釋至5 mL，加0.1 mol·L－1NaH 0.1 mL，于590 nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度（A）值。

2.3 大鼠足跖炎癥組織PGE含量測(cè)定[6]

♂大鼠40只均分為4組，即對(duì)照（等容量生理鹽水，ig）、消炎痛（1.5 mg·kg－1，sc）和TAS高、低劑量（2.0、1.0 mg·kg－1，ig）組。給藥30 min后，每鼠左后足跖sc 1%Car 0.1 mL致炎，4 h后處死大鼠，將致炎足自踝關(guān)節(jié)上1 cm處剪下，稱重，浸泡于5 mL生理鹽水中45 min后，于50℃水浴異構(gòu)化20 min，加甲醇溶液5 mL，于278 nm波長(zhǎng)處測(cè)定A值，計(jì)算前列腺素E（PGE）含量。

2.4 Car致炎大鼠氣囊灌洗液中MDA含量和血清SOD活性測(cè)定

分組與給藥同“2.3”項(xiàng)下方法。于Car致炎前給藥，每天1次，連續(xù)4 d；致炎后6 h再給藥1次。第4天給藥1 h后，于大鼠背部氣囊內(nèi)注射Car 25 mg·kg－1誘發(fā)炎癥，致炎后12 h處死大鼠，取血、離心、制備血清，待測(cè)SOD活性；氣囊內(nèi)注射4 mL Hank’s液進(jìn)行灌洗，收集灌洗液于試管內(nèi)，于4℃離心，取上清液，待測(cè)MDA含量。SOD活性和MDA含量測(cè)定按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 TAS對(duì)明膠致炎小鼠多形核白細(xì)胞游走的影響

對(duì)照、消炎痛和TAS高、低劑量組小鼠腹腔液中多形核白細(xì)胞百分比分別為（42.50±15.34）%、（21.87±16.92）%、（20.58±17.34）%、（23.16±12.09）%。與對(duì)照組比較，TAS高、低劑量組有顯著性差異（P＜0.01），表明TAS能明顯抑制明膠誘發(fā)的多形核白細(xì)胞的游走，使其百分比降低。

3.2 TAS對(duì)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響

對(duì)照、消炎痛和TAS高、低劑量組A值分別為（0.250±0.045）、（0.139±0.033）、（0.125±0.026）、（0.138±0.031）。與對(duì)照組比較，TAS高、低劑量組有顯著性差異（P＜0.01），表明TAS能使伊文思藍(lán)滲出量明顯減少，即降低了乙酸所致毛細(xì)血管通透性增加。

3.3 TAS對(duì)Car誘發(fā)的大鼠足跖炎癥組織PGE含量的影響

對(duì)照、消炎痛和TAS高、低劑量組大鼠足跖炎癥組織PGE的含量分別為（232.71±39.62）、（103.68±27.25）、（109.42±28.15）、（118.24±31.52）mg·g－1。與對(duì)照組比較，TAS高、低劑量組有顯著性差異（P＜0.01），表明TAS能使大鼠炎癥組織中PGE的含量明顯減少。

3.4 TAS對(duì)Car致炎大鼠氣囊灌洗液中MDA含量和血清SOD活性的影響

與對(duì)照組比較，TAS高、低劑量組MDA含量顯著減少，SOD活性顯著增強(qiáng)（P＜0.01或P＜0.05）。TAS對(duì)模型大鼠氣囊灌洗液中MDA含量與血清SOD活性的影響見(jiàn)表1。

4 討論

先前的藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，TAS對(duì)二甲苯致小鼠耳腫，蛋清、Car、甲醛性大鼠足腫與大鼠瓊脂性肉芽增生均有明顯抑制作用，說(shuō)明TAS具有顯著的抗急、慢性炎癥作用[3]。從本研究結(jié)果觀察到，TAS能降低乙酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增加；使明膠誘發(fā)的小鼠腹腔炎性滲出液中多形核白細(xì)胞百分比降低；使大鼠足跖炎癥組織PGE的含量明顯減少。提示TAS的抗炎作用機(jī)制可能與其降低毛細(xì)血管通透性、減少滲出，抑制白細(xì)胞游走，降低其向炎癥部位的聚集（趨化），以及抑制炎癥介質(zhì)PGE的釋放有關(guān)。

表1 TAS對(duì)模型大鼠氣囊灌洗液中MDA含量與血清SOD活性的影響（±s，n＝10）Tab 1 Effects of TAS on MDA content and SOD activity in air sac irrigating solution of model rats（±s，n＝10）

表1 TAS對(duì)模型大鼠氣囊灌洗液中MDA含量與血清SOD活性的影響（±s，n＝10）Tab 1 Effects of TAS on MDA content and SOD activity in air sac irrigating solution of model rats（±s，n＝10）

與對(duì)照組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.control group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別對(duì)照組消炎痛組TAS高劑量組TAS低劑量組劑量/mg·kg－1－1.52.01.0 MDA/nmol·mL－111.28±1.137.81±0.97＊＊7.52±0.88＊＊8.11±0.97＊＊SOD/U·mL－198.26±27.02128.06±21.92＊＊130.32±26.21＊＊123.82±24.15＊

氧自由基在疾病中所起的作用日益被人們所重視。據(jù)報(bào)道，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者病灶中氧自由基明顯增多，可能是其病理機(jī)制之一；大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎局部炎癥與脂質(zhì)過(guò)氧化程度密切相關(guān)[7]。本研究結(jié)果表明，Car致炎大鼠氣囊灌洗液中MDA水平明顯增高、血清SOD活力明顯降低，與上述報(bào)道相一致。而TAS使大鼠炎性灌洗液中MDA含量降低、血清SOD活性升高，提示抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)、減少氧自由基的生成，可能是TAS抗炎作用的又一重要機(jī)制。

[1]李洪剛，李廣義.松潘烏頭二萜生物堿的研究[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，1988，3（23）：460.

[2]黨月蘭，胡兆勇，吳福祥.松潘烏頭總堿的鎮(zhèn)痛作用和身體依賴性的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)藥物依賴性通報(bào)，1993，3（2）：242.

[3]楊軍英，黨月蘭.松潘烏頭總堿的抗炎解熱作用[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2003，8（4）：441.

[4]黨月蘭，駱 勤，李淑玉.紅毛五加總甙的抗炎作用[J].中藥藥理與臨床，2000，16（1）：14.

[5]馬建秀，高明堂，馬迎春.棉丹通肺化淤膠囊鎮(zhèn)痛抗炎的實(shí)驗(yàn)研究[J].中藥藥理與臨床，2005，21（3）：49.

[6]李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].第1版.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1991：307.

[7]丁長(zhǎng)海，陳敏珠，魏 偉，等.抗氧自由基藥物研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，1992，8（5）：332.