• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    黃瓜枯萎病菌內(nèi)生拮抗細(xì)菌的篩選與鑒定

    2012-12-02 04:50:24蔡學(xué)清謝玲平胡方平
    武夷科學(xué) 2012年0期
    關(guān)鍵詞:枯萎病內(nèi)生病菌

    蔡學(xué)清,謝玲平,胡方平

    (福建農(nóng)林大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院,福建福州350002)

    由尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum)引起的黃瓜枯萎病是一類經(jīng)土壤傳播的維管束病害,在我國(guó)瓜類種植區(qū)普遍發(fā)生,并己成為生產(chǎn)上制約黃瓜產(chǎn)量和品質(zhì)的重要因素之一。據(jù)統(tǒng)計(jì),每年黃瓜的發(fā)病率可達(dá)20%,甚至高達(dá)80%-90%,導(dǎo)致黃瓜嚴(yán)重減產(chǎn)(李平生,2003)。

    目前對(duì)于該病害的防治主要采用采用化學(xué)防治,而化學(xué)農(nóng)藥則易產(chǎn)生農(nóng)藥殘留及環(huán)境污染等弊端(陳志杰等,2006),因此生物防治成為目前研究的熱點(diǎn)?,F(xiàn)已有一些關(guān)于黃瓜枯萎病的生物防治的研究報(bào)道,如Paulita等從1987年開始研究黃瓜枯萎病的生物防治及其可能的機(jī)制(Paulita and Park,1987);范寰篩選到8株對(duì)黃瓜枯萎病菌有強(qiáng)拮抗作用的細(xì)菌,抑菌直徑達(dá)18-32 mm,對(duì)黃瓜胚根和幼苗生長(zhǎng)均有促生作用,混合培養(yǎng)液防效可達(dá)70.27%(范寰,2000);等從植物根際土壤中分離出了一株具有1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸(ACC)脫氨酶活性的促生拮抗的雙功能假單胞菌M18,用M18活菌浸種春黃瓜種子,黃瓜枯萎病的發(fā)病率下降70%-80%,產(chǎn)量提高20%以上(許煌泉等,1999);從浙江大學(xué)華家池蔬菜所和杭州市蔬菜所的老熟菜地的土壤中分離篩選出對(duì)黃瓜猝倒病和黃瓜中期枯萎病分別具有離體拮抗作用的細(xì)菌 ZJ14(Bacillus subtilis),ZJ32S1(B.subtilis),ZJ45(Pseudomonas aeruginosa)菌株,通過(guò)促芽試驗(yàn)和無(wú)菌土盆栽測(cè)定,發(fā)現(xiàn)ZJ14和ZJ32S1菌株能促進(jìn)黃瓜種子的萌發(fā)和黃瓜苗的生長(zhǎng),增加苗干物質(zhì)重量,對(duì)黃瓜猝倒病和黃瓜中期枯萎病具有防病效果(張震,2004);吳加志進(jìn)行溫室防治實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,芽孢桿菌和假單胞桿菌屬中的一些菌株,對(duì)黃瓜枯萎病具有明顯的防治效果(吳加志,1996);岳東霞等研究證明假單胞菌類對(duì)土傳病原菌黃瓜枯萎病菌和棉花枯萎病菌有抑制作用,對(duì)黃瓜枯萎病的苗期防效達(dá)67.5%(岳東霞等,2002);而洪鵬翔等從番茄、茄子、煙草和辣椒健康植株體內(nèi)分離篩選出3株對(duì)黃瓜枯萎病有20.83%-79.17%的防病效果的內(nèi)生細(xì)菌(洪鵬翔等,2007)。

    植物內(nèi)生細(xì)菌存在于植物體內(nèi),不易受外界環(huán)境的影響,可以較長(zhǎng)時(shí)間發(fā)揮生物學(xué)作用,同時(shí)它們還可以作為外源基因受體菌,構(gòu)建具有內(nèi)生、促生、防病等多功能內(nèi)生生防工程菌。因此,本研究以黃瓜枯萎病菌為對(duì)象,從黃瓜體內(nèi)分離篩選對(duì)該病菌具有抑制作用的細(xì)菌菌株,為防治黃瓜枯萎病生物制劑的產(chǎn)業(yè)化提供有效菌株。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    1.1.1 供試黃瓜品種 黃瓜“鹽津7號(hào)”。

    1.1.2 供試病原菌 黃瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum)和枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)菌株TL-2均由本實(shí)驗(yàn)室分離鑒定并保存。

    1.1.3 培養(yǎng)基(方中達(dá),1998) NA(蛋白胨 5.0 g;牛肉浸膏 3.0 g;葡萄糖 2.5 g;酵母粉1.0 g;瓊脂粉16.0-18.0 g;蒸餾水 1 L;PH 7.0-7.2)、PDA(馬鈴薯 200 g;蛋白胨 5.0 g;葡萄糖(或蔗糖)20.0 g;瓊脂 16.0-18.0 g;蒸餾水 1 L)、KB(蛋白胨 20.0 g;MgSO4·7H2O 1.5 g;K2HPO4·H2O 1.8 g;純甘油 10.0 mL;瓊脂粉 16.0-18.0 g;蒸餾水 1 L;pH 7.2-7.4)、TSA(胰蛋白胨 15.0 g;大豆胨 5.0 g;NaCl 5.0 g;瓊脂 16.0-18.0 g;蒸餾水 1 L;pH 7.2-7.4)、蛋白胨水培養(yǎng)基(蛋白胨 10.0 g;NaCl 5.0 g;蒸餾水 1 L;pH 7.2-7.4)

    1.2 黃瓜內(nèi)生細(xì)菌的分離

    參照何紅等(2002)方法。從黃瓜的莖、花、葉、果上各取組織1.0 g,用70%酒精浸泡30 s,無(wú)菌水漂洗后,置于1%次氯酸鈉中表面消毒3-5 min(其中葉片和花3 min,莖和果5 min),取出后用無(wú)菌水沖洗3次。樣品晾干后分別置于無(wú)菌研缽中并加5 mL無(wú)菌水研磨成漿狀,靜置10-15 min后,每一樣品各取上層澄清液50 μL分別涂布在培養(yǎng)基(NA、KB和TSA)平板上,每種培養(yǎng)基涂布3皿,28℃黑暗培養(yǎng)48-72 h,計(jì)算每一平板的菌落數(shù)。表面消毒后研磨前,取50 μL最后一次無(wú)菌水沖洗液涂布平板或者是采用組織印跡試驗(yàn),將最后一次清洗的植物組織在培養(yǎng)基平板上印一下,同上述條件下培養(yǎng)48 h,觀察有無(wú)菌落產(chǎn)生,以驗(yàn)證消毒方法是否能殺死供試材料表生微生物。根據(jù)菌落形態(tài)、顏色等挑取單菌落,劃線分離、純化后保存,供測(cè)試鑒定。

    1.3 黃瓜枯萎病菌內(nèi)生拮抗細(xì)菌的篩選

    采用對(duì)峙生長(zhǎng)法,測(cè)定所有分離菌株對(duì)黃瓜枯萎病菌的拮抗作用。在PDA平板中央接入直徑為5 mm的真菌菌絲塊,48 h后在平板四個(gè)邊緣距中央中心處接入一小環(huán)細(xì)菌菌落,28℃下黑暗培養(yǎng),設(shè)不接種的處理為對(duì)照,72 h后觀察真菌菌落大小以及形成的抑菌圈和抑菌帶。

    1.4 內(nèi)生拮抗菌株的鑒定

    1.4.1 菌株的培養(yǎng) 將供試菌株接種在NA斜面上,28℃培養(yǎng)18-72 h后備用,或配成3×108cfu·mL-1的菌懸液備用。

    1.4.2 形態(tài)觀察和生理生化測(cè)定 參照方中達(dá)(1998)的方法和東秀珠和蔡妙英(2001)的方法。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 黃瓜內(nèi)生拮抗細(xì)菌的分離結(jié)果

    用三種不同培養(yǎng)基分離黃瓜體內(nèi)的內(nèi)生細(xì)菌,結(jié)果表明(表1),黃瓜不同部位﹙花、莖、葉、果﹚均存在大量的內(nèi)生細(xì)菌,內(nèi)生細(xì)菌數(shù)量為2.9×103-25.6×103cfu·(g·FW)-1。從不同部位來(lái)看,葉片中的細(xì)菌數(shù)量比其他部位多,花中的細(xì)菌數(shù)量比莖中的細(xì)菌數(shù)量多,果中的細(xì)菌數(shù)量最少。從不同培養(yǎng)基來(lái)看,在NA培養(yǎng)基中分離到的細(xì)菌數(shù)量比其他培養(yǎng)基的細(xì)菌數(shù)量多,在TSA培養(yǎng)基中分離到的細(xì)菌數(shù)量最少。由此可見,植物的不同部位其內(nèi)生細(xì)菌的數(shù)量不同,不同的培養(yǎng)基分離植物的同一部位其內(nèi)生細(xì)菌的數(shù)量也不同。

    表1 黃瓜不同器官分離出的內(nèi)生細(xì)菌數(shù)量(×103cfu·(g·FW)-1)Table 1 Population of endophytic bacteria separated from different organs of cucumber(×103cfu·(g·FW)-1)

    2.2 黃瓜枯萎病菌拮抗細(xì)菌的篩選結(jié)果

    分別從黃瓜葉、花、莖、果上分離的內(nèi)生細(xì)菌中共篩選到對(duì)黃瓜枯萎病菌有不同程度拮抗作用的內(nèi)生細(xì)菌20株(表2),占分離總數(shù)的33.3%,其中HY3、HY4、HY6等10株對(duì)黃瓜枯萎病菌的拮抗效果較好,其抑菌帶寬度為4.5-8.5 mm(表3)。

    2.3 內(nèi)生拮抗菌株的鑒定結(jié)果

    2.3.1 菌株的培養(yǎng)性狀 供試菌株在NA培養(yǎng)基上于28℃培養(yǎng)48 h,菌落為灰白色、圓形或近圓形、邊緣不整齊、凸起呈乳頭狀或中央凹陷、表面干燥、不透明。供試的10株菌株的耐鹽性均達(dá)到5%,部分菌株(HY3、HY6、HJ5、HH2、HY7、HH4和 HH)為 7%;另外,供試菌株在4℃均不能生長(zhǎng),除了HY4和HJ6菌株外,其余菌株均可在50℃下生長(zhǎng)(表4)。

    2.3.2 菌株的形態(tài)和染色反應(yīng) 供試菌株的菌體均呈桿狀,周生鞭毛,革蘭氏染色陽(yáng)性,產(chǎn)芽孢,芽孢中生或端生。

    2.3.3 生理生化性狀 從表5可知:供試的所有菌株好氧或兼性厭氧、接觸酶陽(yáng)性,不產(chǎn)生吲哚和苯丙氨酸脫氨酶,能利用檸檬酸鹽、L-阿拉伯糖、乳糖、D-甘露醇、D-葡萄糖和水解淀粉,這與對(duì)照菌株TL2的測(cè)定結(jié)果一致。但是菌株HH7和HY7不能利用D-木糖、菌株HY3不能還原硝酸鹽、菌株HY3、HY6、HY9 V-P測(cè)定呈陰性,這與對(duì)照菌株TL2不一致,而其他的所有菌株的測(cè)定結(jié)果均與對(duì)照菌株TL2一致。參照東秀珠等(2001)編寫的《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》鑒定表明,供試的10個(gè)菌株均為芽孢桿菌屬(Bacillus spp.)。

    表2 黃瓜枯萎病菌內(nèi)生拮抗細(xì)菌的篩選結(jié)果Table 2 Screening of the antagonistic and endophtic bacteria to Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum

    表3 內(nèi)生拮抗菌對(duì)黃瓜枯萎病菌的拮抗能力Table 2 Inhibition activity of endophytic bacterial strains to Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum

    3 討論

    黃瓜內(nèi)生細(xì)菌的分離結(jié)果表明,黃瓜體內(nèi)存在大量的內(nèi)生細(xì)菌,其種群數(shù)量為2.9×103-25.6 ×103cfu·(g·FW)-1這與前人報(bào)道的植物內(nèi)生細(xì)菌數(shù)量(一般在 103-105cfu·g-1之間)基本吻合(Quadt-Hallmann and Kloepper,1996);不同培養(yǎng)基上分離獲得的內(nèi)生細(xì)菌種群數(shù)量不一樣,不同部位內(nèi)生細(xì)菌種群數(shù)量也有一定的差異,其中從葉片中分離到的內(nèi)生細(xì)菌數(shù)量做多,而健康果實(shí)中分離到的內(nèi)生細(xì)菌種群數(shù)量最少,這與何紅等從辣椒植株不同部位分離內(nèi)生細(xì)菌所獲得的研究結(jié)果相同(何紅等,2002)。

    現(xiàn)已報(bào)道的對(duì)黃瓜枯萎病具有防治效果的拮抗菌株絕大部分是從土壤或植物根際土壤分離的,這些拮抗菌株易受外界條件的影響,田間防病效果不穩(wěn)定,存在著一定的缺陷(李長(zhǎng)松,1992);而植物內(nèi)生細(xì)菌存在于植物體內(nèi),不易受外界環(huán)境的影響,可以較長(zhǎng)時(shí)間發(fā)揮生物學(xué)作用(楊海蓮等,1998;Sturz et al.,2000),因此,本研究從黃瓜體內(nèi)分離獲得的對(duì)黃瓜枯萎病菌具有拮抗效果的菌株具有較好的應(yīng)用前景,但對(duì)于這些拮抗菌株對(duì)黃瓜枯萎病的田間防治效果如何?能否應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐有效地控制該病害,還有待于進(jìn)一步研究。

    表4 目標(biāo)菌株在不同溫度和不同鹽度下的生長(zhǎng)狀況Table 4 Growth of the tested bacterial strains at different temperature and sodium chloride concentration

    表5 內(nèi)生細(xì)菌菌株對(duì)碳素化合物的分解和利用及生理生化測(cè)定結(jié)果Table 5 Growth of the tested bacterial strains at different temperature and sodium chloride concentration

    陳志杰,張淑蓮,張鋒,梁銀麗,徐福利.2006.溫室黃瓜病蟲害化學(xué)防治現(xiàn)狀及其無(wú)公害防治對(duì)策.中國(guó)生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),14(2):141-143.

    東秀珠,蔡妙英.2001.常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè).北京:科學(xué)出版社,364-384.

    范寰.2000.防治黃瓜枯萎病拮抗細(xì)菌的篩選.天津輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào),(3):29-40.

    方中達(dá).1998.植病研究方法.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社.

    何紅,蔡學(xué)清,洪永聰,關(guān)雄,胡方平.2002.辣椒內(nèi)生細(xì)菌的分離及拮抗菌的篩選.中國(guó)生物防治,18(4):171-175.

    洪鵬翔,邱思鑫,陳航,趙秀丹,胡方平.2007.4種茄科作物內(nèi)生細(xì)菌的分離及拮抗菌的篩選.福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),36(4):347-351.

    李長(zhǎng)松.1992.拮抗細(xì)菌生物防治植物土傳病害的研究進(jìn)展.生物防治通報(bào),8(4):168-172.

    李平生.2003.黃瓜枯萎病及其防治.現(xiàn)代農(nóng)業(yè),(12):35.

    吳加志.1996.植物土傳,根際和內(nèi)生細(xì)菌用于植物病害生物防治潛力的研究.中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志,8(3):4-13.

    許煌泉,唐瑋寧,鄭有麗,鐘仲賢,徐悌惟.1999.篩選假單胞菌株M18防治大棚黃瓜枯萎病害.上海交通大學(xué)學(xué)報(bào),33(2):210-214.

    楊海蓮,孫曉璐,宋未.1998.植物內(nèi)生細(xì)菌的研究.微生物學(xué)通報(bào),25(4):224-227.

    岳東霞,許長(zhǎng)藹,張要武,陳融.2002.黃瓜枯萎病拮抗細(xì)菌的篩選與防治.天津農(nóng)業(yè)科學(xué),8(4):8-9.

    張震.2004.土傳植物病害拮抗細(xì)菌根圍生態(tài)學(xué)研究.杭州:浙江大學(xué).

    Paulita TC,Park CS,Baker R.1987.Biological control of Fusarium wilt of cucumber with non-pathogenic isolates of Fusarium oxysparum.Canada Journal Microbiology,33:349-353.

    Quadt-Hallmann A,Kloepper JW.1996.Immunological detection and localization of the cotton endophyte Enterobacter asburiae JM22 in different plant species.Canada Journal Microbiology,42(11):1144-1154.

    Sturz AV ,Christie BR,Nowak J.2000.Bacterial endophytes:potential role in developing sustainable systems of crop production.Critical Reviews in Plant Sciences,19(1):1-30.

    猜你喜歡
    枯萎病內(nèi)生病菌
    植物內(nèi)生菌在植物病害中的生物防治
    內(nèi)生微生物和其在作物管理中的潛在應(yīng)用
    “黨建+”激活鄉(xiāng)村發(fā)展內(nèi)生動(dòng)力
    授人以漁 激活脫貧內(nèi)生動(dòng)力
    小病菌影響鴉片戰(zhàn)爭(zhēng)
    特別健康(2018年3期)2018-07-04 00:40:24
    頭狀莖點(diǎn)霉病菌的新寄主高粱及病菌的檢疫鑒定(內(nèi)文第98~101頁(yè))圖版
    油茶炭疽病菌拮抗木霉菌的分離與篩選
    病菌來(lái)了 快穿好防菌衣
    非洲:控制香蕉枯萎病的新方法
    銅、鋅元素對(duì)香蕉枯萎病的防治有顯著效果
    美女高潮喷水抽搐中文字幕| 又紧又爽又黄一区二区| 国产区一区二久久| 亚洲性夜色夜夜综合| 免费黄频网站在线观看国产| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 国产又色又爽无遮挡免费看| 少妇 在线观看| 人人澡人人妻人| 在线观看免费日韩欧美大片| 老司机影院毛片| 啦啦啦 在线观看视频| 在线观看免费视频网站a站| 一边摸一边做爽爽视频免费| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 在线天堂中文资源库| 精品亚洲成国产av| 男人舔女人的私密视频| 国产精品1区2区在线观看. | 一夜夜www| 午夜福利欧美成人| 乱人伦中国视频| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲欧美一区二区三区久久| 少妇的丰满在线观看| 99riav亚洲国产免费| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲成人免费av在线播放| 国产精品98久久久久久宅男小说| 色播在线永久视频| 男女高潮啪啪啪动态图| 午夜老司机福利片| 成人黄色视频免费在线看| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 美女午夜性视频免费| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 老司机深夜福利视频在线观看| 欧美人与性动交α欧美软件| 一区二区三区乱码不卡18| 黄色a级毛片大全视频| 久久久久久久久免费视频了| 91老司机精品| 精品国内亚洲2022精品成人 | 亚洲五月婷婷丁香| 久久中文字幕一级| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 美女国产高潮福利片在线看| 精品一区二区三区av网在线观看 | 高清在线国产一区| 亚洲国产av影院在线观看| 久久精品成人免费网站| 欧美激情高清一区二区三区| 99国产精品免费福利视频| 涩涩av久久男人的天堂| 12—13女人毛片做爰片一| 五月天丁香电影| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产激情久久老熟女| 国产精品一区二区在线不卡| 国产精品一区二区在线不卡| av天堂久久9| 搡老熟女国产l中国老女人| 午夜激情av网站| 亚洲精品久久午夜乱码| 91麻豆av在线| 成人黄色视频免费在线看| 夜夜爽天天搞| 成在线人永久免费视频| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 男女下面插进去视频免费观看| avwww免费| 精品人妻1区二区| 麻豆成人av在线观看| 久热爱精品视频在线9| 亚洲专区字幕在线| 亚洲精品久久午夜乱码| 黄色怎么调成土黄色| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 久久99一区二区三区| 国产亚洲欧美在线一区二区| 久热这里只有精品99| videos熟女内射| 成人av一区二区三区在线看| 91九色精品人成在线观看| 久久国产精品人妻蜜桃| 欧美一级毛片孕妇| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 欧美日韩成人在线一区二区| 亚洲七黄色美女视频| videosex国产| 黄色视频不卡| av视频免费观看在线观看| 丝袜喷水一区| 久久人人97超碰香蕉20202| 日韩一区二区三区影片| 国产精品久久久久久精品电影小说| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 国产av国产精品国产| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 色尼玛亚洲综合影院| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 18在线观看网站| 欧美激情高清一区二区三区| 国产精品一区二区在线观看99| 久久av网站| 他把我摸到了高潮在线观看 | av网站免费在线观看视频| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 看免费av毛片| 成人18禁在线播放| 亚洲成国产人片在线观看| 777米奇影视久久| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 桃花免费在线播放| 国产麻豆69| 国产单亲对白刺激| 女警被强在线播放| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 99精品久久久久人妻精品| 成年人黄色毛片网站| 欧美日韩视频精品一区| 久久这里只有精品19| 夜夜夜夜夜久久久久| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 亚洲三区欧美一区| 超碰97精品在线观看| 免费在线观看影片大全网站| 中文亚洲av片在线观看爽 | 色老头精品视频在线观看| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 国产精品熟女久久久久浪| 久久精品国产综合久久久| netflix在线观看网站| 精品卡一卡二卡四卡免费| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 9热在线视频观看99| 少妇 在线观看| 女同久久另类99精品国产91| 丰满饥渴人妻一区二区三| 久久久久久人人人人人| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 精品亚洲成国产av| 国产xxxxx性猛交| 国产av一区二区精品久久| 国产精品国产av在线观看| 欧美变态另类bdsm刘玥| 人妻一区二区av| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 亚洲av成人一区二区三| av国产精品久久久久影院| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 日韩免费高清中文字幕av| 欧美激情久久久久久爽电影 | 超碰成人久久| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 国产精品久久久久久精品电影小说| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 在线观看免费日韩欧美大片| 一区在线观看完整版| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产精品免费大片| 国产人伦9x9x在线观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 日韩免费高清中文字幕av| 欧美日韩精品网址| 一边摸一边做爽爽视频免费| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产精品影院久久| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 女人久久www免费人成看片| 男女之事视频高清在线观看| 人成视频在线观看免费观看| 丝袜人妻中文字幕| 两性夫妻黄色片| 夜夜夜夜夜久久久久| 欧美国产精品一级二级三级| 9191精品国产免费久久| 美女国产高潮福利片在线看| 中文亚洲av片在线观看爽 | 曰老女人黄片| 久热爱精品视频在线9| 老司机靠b影院| 久久人人97超碰香蕉20202| 乱人伦中国视频| 日韩欧美国产一区二区入口| 丁香六月天网| 波多野结衣av一区二区av| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 热99久久久久精品小说推荐| 亚洲第一青青草原| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲九九香蕉| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 久久久久久久精品吃奶| 99riav亚洲国产免费| 日本一区二区免费在线视频| av片东京热男人的天堂| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 在线播放国产精品三级| xxxhd国产人妻xxx| 国产免费视频播放在线视频| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 丰满饥渴人妻一区二区三| 97在线人人人人妻| 日韩欧美一区视频在线观看| 人妻一区二区av| 18禁美女被吸乳视频| 最新的欧美精品一区二区| 日韩有码中文字幕| 亚洲精品国产一区二区精华液| 精品国内亚洲2022精品成人 | 一进一出抽搐动态| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 欧美精品高潮呻吟av久久| a级片在线免费高清观看视频| 亚洲人成77777在线视频| 一区二区三区精品91| 久久这里只有精品19| 欧美黄色淫秽网站| 精品国内亚洲2022精品成人 | 亚洲国产av影院在线观看| 国产成人啪精品午夜网站| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 中文亚洲av片在线观看爽 | 成人特级黄色片久久久久久久 | 天堂动漫精品| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 交换朋友夫妻互换小说| 美女主播在线视频| 一级片'在线观看视频| 国产免费视频播放在线视频| 成年版毛片免费区| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲中文av在线| 啪啪无遮挡十八禁网站| 狂野欧美激情性xxxx| 男男h啪啪无遮挡| 国产老妇伦熟女老妇高清| 妹子高潮喷水视频| 日韩成人在线观看一区二区三区| 久久天堂一区二区三区四区| 一个人免费在线观看的高清视频| 亚洲人成电影观看| 黄片大片在线免费观看| 亚洲熟女精品中文字幕| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产精品一区二区免费欧美| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 国产视频一区二区在线看| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产高清激情床上av| 国产在线免费精品| 天天操日日干夜夜撸| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 久久精品亚洲av国产电影网| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 久久这里只有精品19| 久久人妻av系列| 一本综合久久免费| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产深夜福利视频在线观看| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 一区二区av电影网| 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲伊人色综图| 黑丝袜美女国产一区| 色婷婷av一区二区三区视频| 丝袜美足系列| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 女性生殖器流出的白浆| 国产极品粉嫩免费观看在线| 久久99热这里只频精品6学生| 久久久久久免费高清国产稀缺| a级片在线免费高清观看视频| a级毛片在线看网站| 精品午夜福利视频在线观看一区 | 久久久久久久大尺度免费视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 免费在线观看黄色视频的| 成人精品一区二区免费| 亚洲专区中文字幕在线| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 男女边摸边吃奶| 国产精品欧美亚洲77777| 夜夜骑夜夜射夜夜干| www.自偷自拍.com| 性高湖久久久久久久久免费观看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国产精品久久电影中文字幕 | 操美女的视频在线观看| 美国免费a级毛片| 91成人精品电影| 成在线人永久免费视频| 首页视频小说图片口味搜索| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产精品亚洲一级av第二区| 国产一卡二卡三卡精品| 一区二区三区精品91| 久久99热这里只频精品6学生| 在线观看www视频免费| a级片在线免费高清观看视频| 日本av免费视频播放| 欧美大码av| 美女视频免费永久观看网站| 亚洲精品美女久久av网站| 成人手机av| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 91九色精品人成在线观看| 午夜福利视频在线观看免费| 人成视频在线观看免费观看| 国产精品欧美亚洲77777| 麻豆乱淫一区二区| 捣出白浆h1v1| 在线观看免费午夜福利视频| 黄色毛片三级朝国网站| 国产在线一区二区三区精| 国产有黄有色有爽视频| 一本色道久久久久久精品综合| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 国产日韩欧美在线精品| 男女下面插进去视频免费观看| 亚洲欧洲日产国产| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 少妇精品久久久久久久| 国产精品一区二区在线观看99| 99香蕉大伊视频| 国产成人精品久久二区二区免费| 大型黄色视频在线免费观看| 91av网站免费观看| 99久久精品国产亚洲精品| av电影中文网址| 亚洲第一av免费看| 高清黄色对白视频在线免费看| 成人三级做爰电影| 超碰成人久久| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| av超薄肉色丝袜交足视频| 一级片'在线观看视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲第一av免费看| 日韩人妻精品一区2区三区| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 999精品在线视频| 免费高清在线观看日韩| 成人国语在线视频| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲伊人久久精品综合| 搡老熟女国产l中国老女人| 日本五十路高清| 亚洲七黄色美女视频| 正在播放国产对白刺激| 婷婷成人精品国产| 久久中文字幕人妻熟女| 欧美中文综合在线视频| 国产精品98久久久久久宅男小说| 黄片小视频在线播放| 久久久国产成人免费| 免费在线观看日本一区| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产成人精品久久二区二区91| 亚洲avbb在线观看| 国产视频一区二区在线看| 成年人免费黄色播放视频| 欧美黄色淫秽网站| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 91精品三级在线观看| 三级毛片av免费| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| av在线播放免费不卡| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 成人三级做爰电影| 一边摸一边做爽爽视频免费| 老汉色av国产亚洲站长工具| 女人精品久久久久毛片| 国产精品一区二区精品视频观看| 国产在线视频一区二区| 国产成人免费观看mmmm| 一二三四在线观看免费中文在| 成年人免费黄色播放视频| 首页视频小说图片口味搜索| 国产精品99久久99久久久不卡| 久久av网站| 国产熟女午夜一区二区三区| 真人做人爱边吃奶动态| 国产精品国产高清国产av | 欧美精品高潮呻吟av久久| 日韩人妻精品一区2区三区| 精品少妇久久久久久888优播| 纯流量卡能插随身wifi吗| 黄频高清免费视频| 亚洲精品国产色婷婷电影| 18禁观看日本| 国产福利在线免费观看视频| 久久99热这里只频精品6学生| 亚洲美女黄片视频| 久久九九热精品免费| 国产1区2区3区精品| av欧美777| 中文字幕人妻熟女乱码| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 亚洲精品成人av观看孕妇| 精品乱码久久久久久99久播| 制服诱惑二区| 99九九在线精品视频| 欧美午夜高清在线| 极品人妻少妇av视频| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 国产亚洲精品一区二区www | 动漫黄色视频在线观看| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 午夜久久久在线观看| 少妇粗大呻吟视频| 久久精品国产亚洲av高清一级| 看免费av毛片| 午夜福利欧美成人| 欧美日韩一级在线毛片| 日韩免费高清中文字幕av| 国产精品久久久av美女十八| 一级,二级,三级黄色视频| 免费在线观看日本一区| 久久久国产欧美日韩av| 1024视频免费在线观看| 色视频在线一区二区三区| 午夜免费成人在线视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 国精品久久久久久国模美| 一个人免费看片子| 在线观看免费日韩欧美大片| 热re99久久国产66热| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 久久久久国内视频| 国产成人免费无遮挡视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 成年人黄色毛片网站| 成人永久免费在线观看视频 | 大码成人一级视频| 在线观看免费视频日本深夜| 性高湖久久久久久久久免费观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 欧美日韩亚洲高清精品| 交换朋友夫妻互换小说| 久久 成人 亚洲| 少妇被粗大的猛进出69影院| 成人国语在线视频| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 18禁美女被吸乳视频| 色视频在线一区二区三区| 一个人免费看片子| 国产熟女午夜一区二区三区| 无限看片的www在线观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 成人国语在线视频| 成人av一区二区三区在线看| 久久精品91无色码中文字幕| 午夜福利影视在线免费观看| 91精品三级在线观看| 精品久久蜜臀av无| 不卡一级毛片| 满18在线观看网站| 一级毛片精品| 成年动漫av网址| 久久香蕉激情| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 男女高潮啪啪啪动态图| 国产野战对白在线观看| 成人手机av| 老司机亚洲免费影院| 深夜精品福利| 少妇的丰满在线观看| 欧美日韩亚洲高清精品| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 国产成人av激情在线播放| 丝袜在线中文字幕| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 99久久99久久久精品蜜桃| 啦啦啦 在线观看视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 成人国语在线视频| 悠悠久久av| 一级,二级,三级黄色视频| 国产亚洲精品一区二区www | 日本黄色日本黄色录像| av天堂久久9| 一区福利在线观看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 久久性视频一级片| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 色视频在线一区二区三区| 久久毛片免费看一区二区三区| 亚洲精品乱久久久久久| 亚洲专区中文字幕在线| 久久性视频一级片| 欧美精品亚洲一区二区| 久久精品国产亚洲av高清一级| 丝袜美足系列| 性高湖久久久久久久久免费观看| 91老司机精品| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 亚洲欧美一区二区三区黑人| 午夜免费鲁丝| 国产av一区二区精品久久| 久久久久国产一级毛片高清牌| 亚洲伊人色综图| 视频区图区小说| 亚洲五月色婷婷综合| 啪啪无遮挡十八禁网站| av电影中文网址| 午夜福利在线免费观看网站| 精品国内亚洲2022精品成人 | 日韩中文字幕欧美一区二区| 欧美精品一区二区大全| 欧美精品啪啪一区二区三区| 午夜福利在线免费观看网站| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 男女床上黄色一级片免费看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 免费黄频网站在线观看国产| 日本wwww免费看| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 中文欧美无线码| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 丝袜人妻中文字幕| 麻豆成人av在线观看| 成人黄色视频免费在线看| 国产成人欧美| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 久久免费观看电影| 我的亚洲天堂| 考比视频在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 三上悠亚av全集在线观看| 国产成人影院久久av| 国产精品国产高清国产av | a级片在线免费高清观看视频| 成年女人毛片免费观看观看9 | 国产成人精品久久二区二区免费| 精品国产乱码久久久久久男人| 欧美激情久久久久久爽电影 | 亚洲国产av新网站| 精品亚洲成a人片在线观看| 99久久精品国产亚洲精品| 日韩欧美国产一区二区入口| 国产区一区二久久| 国产在线观看jvid| 国产精品免费大片| 黄片小视频在线播放| 一级毛片精品| 日韩欧美免费精品| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 十八禁人妻一区二区| 久久婷婷成人综合色麻豆| 精品国产乱码久久久久久小说| 国产高清视频在线播放一区| a在线观看视频网站| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 夜夜爽天天搞| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 中文字幕人妻丝袜制服| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 国产免费视频播放在线视频| 啦啦啦 在线观看视频| 久久青草综合色| 老汉色av国产亚洲站长工具| 久久久久久久久免费视频了| 国产精品免费一区二区三区在线 | 免费观看av网站的网址| 国产在视频线精品| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲国产欧美网| 国产亚洲欧美在线一区二区| 国产av国产精品国产| 十八禁网站网址无遮挡| 黄色怎么调成土黄色| www.999成人在线观看| 91老司机精品| 99精品欧美一区二区三区四区| 色视频在线一区二区三区| 99国产精品免费福利视频| 午夜免费鲁丝| 久久久水蜜桃国产精品网| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 法律面前人人平等表现在哪些方面| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 午夜激情久久久久久久| 成年动漫av网址| 黑人猛操日本美女一级片| 午夜福利一区二区在线看| 一级毛片电影观看| 亚洲视频免费观看视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲久久久国产精品| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产在线免费精品| 在线观看免费高清a一片| 久久精品人人爽人人爽视色| 丰满少妇做爰视频| 国产有黄有色有爽视频|