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    HPLC法測定蒙藥額力根-7中羥基紅花黃色素A含量

    2012-11-29 08:00:56王惠敏
    中國民族醫(yī)藥雜志 2012年12期
    關鍵詞:黃色素紅花羥基

    趙 英 王惠敏

    (內蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院,內蒙古 呼和浩特 010017)

    本品主要由紅花、黃精、石膏、牛黃、瞿麥、香青蘭等7味藥材組成。具有清肝熱作用,用于肝熱目赤、黃疸、肝區(qū)疼痛、發(fā)燒口渴、頭痛等,收載衛(wèi)生部藥品標準蒙成分冊〔1〕。

    1 儀器、試劑及樣品

    1100 型高效液相色譜儀(美國 Agilentg公司制造);TJ-912色譜分析平臺。非羅門 Kromasil C18柱(200×4.6 mm,5μm)。超聲波清洗機(B2500-MT,上海必能信超聲波清洗機有限公司);BT224S電子分析天平(北京賽多利斯儀器公司)

    甲醇、乙腈:色譜純,由天津協和昊鵬試劑公司生產;磷酸為分析純;水為三蒸水。羥基紅花黃色素A(含量測定用,批號111637-200503)由中國藥品生物制品檢定所提供。額力根-7(批號20060805,20020712,20080301)由內蒙古中蒙醫(yī)醫(yī)院蒙藥制劑中心出品。

    2 方法與結

    2.1 色譜條件:色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠,本試驗用非羅門 Kromasil C18柱(200 ×4.6 mm,5μm);流動相:甲醇-乙腈 –磷酸-水(30:5:0.2:110);流速:1mL·min-1;測定波長403nm;柱溫30℃。以上條件均可基線分離樣品中羥基紅花黃色素A,按理論板數峰計算應不低于 3000〔2〕。

    2.2 測定溶液的制備

    2.2.1 對照品溶液的制備:精密稱取羥基紅花黃色素A對照品6.25mg,置25mL量瓶內,加25%甲醇溶解至刻度,取對照品溶液 0.1、0.5、1、2、4、8 mL,分別加到 10 mL 棕色量瓶容量瓶內,加25%甲醇至刻度。

    2.2.2 供試品溶液的制備:取本品(批號20060805),粉碎,研細,過100目篩,精密稱重25mg,置50mL具塞錐形瓶中,精密加25%甲醇10mL,稱定重量,超聲處理(功率100W,頻率40kHz)40min,放冷,再稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,靜止,濾過,即的。

    2.2.3 陰性試驗:依照樣品制備方法制備不含紅花的額力根-7陰性制劑,依照色譜條件測定,陰性對照品在羥基紅花黃色素A保留時間內無干擾峰出現,表明其它藥材對羥基紅花黃色素A的測定無干擾。見圖1、2、3。

    2.3 線性關系考察:精密吸取對照品溶液10μL,按色譜條件測定峰面積,以峰面積積分值為縱坐標,對照品含量為橫坐標,繪制標準曲線,作回歸分析?;貧w方程:Y=Y=2337653χ -31123,r=0.999。羥基紅花黃色素 A 在 0.0025~0.2mg范圍內線性關系良好。

    2.4 精密度試驗:精密吸取同一供試品溶液10μL,連續(xù)進樣5次,測定羥基紅花黃色素A,峰面積RSD為0.5%。

    2.5 重復性試驗:取同批次樣品,按2.2項下的方法制備樣品5 份。測定結果,平均含量為1.34mg·g-1,RSD 為1.4%

    2.6 穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液10μL,分別于樣品制備后第0、2、8、12h測定羥基紅花黃色素A峰面積,峰面積值RSD為0.8%。樣品溶液在12h內穩(wěn)定。

    2.7 回收率試驗:取已知羥基紅花黃色素A含量的額力根-7樣品,置10mL容量瓶內,分別精密加入羥基紅花黃色素A對照品溶液,加25%甲醇至刻度,溶液轉入置50mL具塞錐形瓶中,按供試品方法制備,提取,過濾。按色譜條件測定,平均回收率與RSD為102.7%、2.9%。2.8 樣品測定:分別吸取對照品溶液與樣品溶液10μL,依上述色譜條件測定3批樣中羥基紅花黃色素A含量,3批樣品分別為 1.35、1.22、1.16 mg·g-1,平均含量分別為1.24mg·g-1。

    表1 額力根-7中羥基紅花黃色素A回收率測定

    3 討論

    本試驗的提取方法與“索氏”提取法進行對比測定,“索氏”法樣中羥基紅花黃色素A溶出時間長,而超聲處理方法溶出羥基紅花黃色素A方法簡便、省時。提取時間測定,樣品超聲處理40min后羥基紅花黃色素A含量不再增加。耐用性試驗 ,用 Agilent XDB-C8柱 (150×4.6 mm,5μm)在本試驗條件下測定樣品,羥基紅花黃色素A基線分離。3批樣品測定表明,羥基紅花黃色素A含量差異較大,可能藥材質量或投料制備有關。采用HPLC法測定額力根-7羥基紅花黃色素A指標性成分,可作為該藥質量控制的方法之一。

    〔1〕國家藥典委員會編輯.衛(wèi)生部藥品標準蒙藥分冊〔S〕.1998,167

    〔2〕國家藥典委員會編輯.中國藥典一部〔S〕.中國醫(yī)藥出版社,2010,143

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