• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    幾種天然產(chǎn)物對痛風性關節(jié)炎的影響初探

    2012-11-24 06:59:42胥紅梅張葳芮張澤生3
    天然產(chǎn)物研究與開發(fā) 2012年10期
    關鍵詞:東哥痛風性阿里

    史 珅,賀 偉,胥紅梅,李 森,張葳芮,張澤生3,

    1天獅集團有限公司博士后工作站;2天津市天獅生命科學與技術研究院,天津301700; 3天津科技大學博士后流動站;4天津科技大學食品營養(yǎng)與安全省部共建教育部重點實驗室; 5天津科技大學食品工程與生物技術學院,天津300457

    幾種天然產(chǎn)物對痛風性關節(jié)炎的影響初探

    史 珅1,2,3,4,5*,賀 偉4,5,胥紅梅4,5,李 森4,5,張葳芮1,2,張澤生3,4,5

    1天獅集團有限公司博士后工作站;2天津市天獅生命科學與技術研究院,天津301700;3天津科技大學博士后流動站;4天津科技大學食品營養(yǎng)與安全省部共建教育部重點實驗室;5天津科技大學食品工程與生物技術學院,天津300457

    為了探討幾種天然產(chǎn)物對痛風性關節(jié)炎模型大鼠的影響,通過對wistar大鼠踝關節(jié)注射尿酸鈉結(jié)晶,制作痛風性關節(jié)炎模型,并預先對實驗大鼠灌胃給藥褐藻糖膠、檸檬酸鉀和東哥阿里提取物,通過檢測踝關節(jié)腫脹度、步態(tài)積分及血清樣本中炎癥因子變化,研究其對痛風性關節(jié)炎的預防和緩解作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn),三種活性物質(zhì)均可顯著降低痛風性關節(jié)炎實驗大鼠造模24 h踝關節(jié)腫脹度;東哥阿里提取物對實驗大鼠步態(tài)積分有降低作用;褐藻糖膠與東哥阿里提取物對髓過氧化物酶有顯著降低作用;東哥阿里提取物可以顯著降低炎癥因子IL-1β、IL-8、NO和5-HT的血清濃度;因而推測,三種活性物質(zhì)均對尿酸鈉引起的痛風性關節(jié)炎有預防和緩解作用,其中東哥阿里提取物在減輕關節(jié)腫脹、緩解痛感及抑制炎癥發(fā)展方面有顯著作用。

    尿酸;痛風性關節(jié)炎;褐藻糖膠;檸檬酸鉀;東哥阿里;大鼠

    痛風是長期嘌呤代謝障礙,血尿酸增高引起組織損傷的綜合病癥。臨床表現(xiàn)以急性痛風性關節(jié)炎最為常見[1],嚴重者可致關節(jié)活動障礙、畸形,腎尿酸結(jié)石及痛風性腎實質(zhì)病變等[2]。局部急性炎癥反應一般表現(xiàn)為紅、腫、熱、痛和功能障礙五個方面。

    尿酸為一種弱酸性物質(zhì),溶解度很低,易呈針狀結(jié)晶析出沉積在溫度較低的遠側(cè)端肢體(如足趾)和酸度較高的組織(如運動后的肌肉、關節(jié)腔)。主要侵犯部位是關節(jié)的滑囊膜和關節(jié)軟骨、腎臟和皮下軟組織,因為關節(jié)軟骨、滑膜內(nèi)及關節(jié)周圍組織中血管較少[3],運動后更易發(fā)生缺氧,加速糖分解而形成乳酸,于是pH降低,尿酸鈉沉積增多;此外基質(zhì)中含黏多糖酸及結(jié)締組織較豐富,因此尿酸鹽容易沉積。大量尿酸鹽結(jié)晶進入關節(jié)腔后,尿酸鹽結(jié)晶通過刺激炎性介質(zhì)的合成和釋放來誘發(fā)和維持強烈的炎性反應。

    本文旨在研究褐藻糖膠、檸檬酸鉀及東哥阿里提取物對痛風性關節(jié)炎的預防和緩解作用。實驗采用Wistar雄性大鼠為實驗動物,對其灌胃上述三種活性物質(zhì)的生理鹽水溶液14 d,在給藥11 d時通過對大鼠右踝關節(jié)注射尿酸鈉溶液制作痛風性關節(jié)炎模型,在造模后24 h測定其踝關節(jié)腫脹程度,并在不同時間點觀察其步態(tài),造模72 h后對大鼠股動脈取血,檢測血清中的炎癥因子及相關指標,以初步探討三種物質(zhì)對痛風性關節(jié)炎的影響和作用機制。

    1 對象與方法

    1.1 材料

    生化試劑盒(南京建成生物工程研究所),紫外可見可變波長分光光度計(日本島津),酶聯(lián)免疫生化試劑盒(RD,進口分裝),MK-32酶標儀(美國賽默飛世爾科技公司)。

    Wistar大白鼠,SPF級,雄性,體重300±20 g,購自北京維通利華實驗動物技術有限公司,合格證號:SCXK(京)2006-0009。尿酸(Ameresco),生理鹽水(天津市北方天醫(yī)化學試劑廠)。

    褐藻糖膠(Fucoidan≥60%,上海森一生物科技有限公司),檸檬酸鉀(≥99%,北京鳳禮精求商貿(mào)有限責任公司),東哥阿里提取物(100∶1,上海森一生物科技有限公司),-20℃保存。

    1.2 方法

    飼養(yǎng)條件為屏障系統(tǒng)動物房,溫度22±2℃,相對濕度40%~60%,控制照明時間為14∶10 h。將健康大鼠隨機分成5組,每組8只,分別為空白對照組、模型對照組、褐藻糖膠組、檸檬酸鉀組和東哥阿里提取物組。褐藻糖膠、檸檬酸鉀和東哥阿里提取物給藥劑量為200 mg/kg·bw/d,空白組和模型組灌胃等量生理鹽水。

    尿酸鈉結(jié)晶(monosodium urate,MSU)及尿酸鈉溶液的制備[4]:194 mL蒸餾水加6 mL 1M NaOH,煮沸,加1 g尿酸,用1N HCl調(diào)pH至7.2,攪拌冷卻,4℃冰箱保存24 h,去上清,用濾紙將沉淀物水分吸干,放入70℃干燥箱烘2 h,取出,刮下粉末,放入研缽內(nèi)研成細末,用孔徑250 μm的金屬篩過篩,制成尿酸鈉結(jié)晶。取1 g尿酸鈉加9 mL生理鹽水,l mL吐溫80,經(jīng)乳化機乳化,配制成10 mL 10%尿酸鈉溶液,高溫滅菌后備用。

    動物模型的制作:第11 d灌胃給藥后,將50 μL濃度為10%的尿酸鈉溶液注入踝關節(jié)腔,空白組注射等體積滅菌生理鹽水,在踝關節(jié)同一固定位置用油性筆畫一位置作為標記用于測量踝關節(jié)的體積。

    1.3 樣本的采集及測試方法

    關節(jié)腫脹度的測定:根據(jù)排水容積法自制腫脹測量儀,測量大鼠造模踝關節(jié)同一部位的足容積,實驗時分別在造模0 h和24 h測量大鼠的踝關節(jié)體積,并計算造模24 h時大鼠踝關節(jié)腫脹率。

    步態(tài)積分的評定:造模后24、48 h觀察各組大鼠的步態(tài),進行評分并統(tǒng)計學分析,按Coderre等[5]介紹的步態(tài)分級標準進行評分,0分:正常行走,后肢正常壓力,兩側(cè)后肢平等負重;1分:輕微跛行,受試下肢略有彎曲,模型側(cè)后肢負重輕度減少,可完全觸地;2分:中度跛行,受試下肢剛觸及地面,后肢壓力中度減少,腿屈曲僅有部分肢體負重,接觸地;3分:重度跛行,受試下肢離開地面,三足著地行走,后肢負重嚴重減少,少接觸地。

    炎癥因子的測定:造模72 h后股動脈取血,收集血液,4℃、1500 g離心15 min分離血清,Elisa試劑盒測定相關炎癥因子水平。髓過氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)的測定采用南京建成生化試劑盒。

    統(tǒng)計學方法:實驗數(shù)據(jù)均用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行處理,用單因素方差分析ANOVA(one-way analysis of variance)。分析實驗結(jié)果以均值士標準偏差(±s)表示,P<0.05具有顯著性差異,P<0.01具有極顯著性差異。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 實驗大鼠體重變化

    圖4-1是實驗大鼠給藥階段的體重變化趨勢圖。由圖可見,各組實驗大鼠體重增長趨勢基本一致,給藥各實驗原料對實驗大鼠正常生長無顯著影響。

    圖1 實驗大鼠體重變化趨勢Fig.1 Body weight trends of Experimental rats

    2.2 實驗大鼠踝關節(jié)腫脹度和步態(tài)積分

    造模24 h各組大鼠踝關節(jié)腫脹率的變化見圖2,模型組實驗大鼠踝關節(jié)腫脹度顯著(P<0.01)高于空白對照組。褐藻糖膠、檸檬酸鉀和東哥阿里提取物在造模后24 h均顯著(P<0.05)降低了實驗大鼠踝關節(jié)的腫脹度。

    圖2 實驗大鼠造模后24 h踝關節(jié)腫脹率Fig.2 Rate of ankle swelling of rats in 24 hours after modeling

    造模24、48 h后對大鼠的步態(tài)進行了觀測評價,各實驗原料對MSU致痛風關節(jié)炎大鼠步態(tài)的影響見圖3和圖4。與正常組大鼠相比,模型組大鼠注射MSU溶液后,活動減少,右后肢彎曲,行走時后肢抬起。由圖3可見,造模24 h時,褐藻糖膠組和東哥阿里提取物組實驗大鼠的步態(tài)積分均值較模型組降低;由圖4可見,造模48 h時,東哥阿里提取物組的步態(tài)積分均值較模型組降低。

    2.3 實驗大鼠炎癥相關指標

    圖5 實驗大鼠血清髓過氧化物酶活力Fig.5 Myeloperoxidase activity in serum of experimental rats

    MPO是指征中性粒細胞活性的重要直接指標,圖5是痛風性關節(jié)炎實驗大鼠血清MPO的比較。其中,模型對照組大鼠血清MPO顯著(P<0.05)高于空白對照組,可見該炎癥模型中,中性粒細胞活性增強,參與炎癥發(fā)生發(fā)展。在給藥組中,褐藻糖膠組和東哥阿里提取物組顯著(P<0.05)低于模型對照組。

    炎癥介質(zhì)中,本文主要關注了白細胞介素1β (Interleukin-1β,IL-1β)、白細胞介素8(Interleukin-8,IL-8)、一氧化氮(Nitric oxide,NO)和五羥色胺(5-Serotonin,5-HT),表1是各因子在血清中水平的比較。與空白組比較,模型組血清IL-1β顯著(P<0.01)高于空白對照組;東哥阿里提取物組顯著(P<0.01)降低。模型組實驗大鼠血清IL-8水平顯著(P<0.05)高于空白對照組;其中東哥阿里提取物組顯著(P<0.05)低于模型對照,且與空白對照組無顯著差異。模型組的NO水平高于空白組,表明造模使大鼠體內(nèi)NO水平升高,從而加速炎癥反應。與模型組比較,褐藻糖膠組、檸檬酸鉀組和東哥阿里提取物組實驗大鼠血清NO水平顯著降低(P<0.01)。模型組的5-HT高于空白組,表明以尿酸鈉結(jié)晶復制痛風性關節(jié)炎的方法造成實驗大鼠關節(jié)炎模型并引起痛感,與模型對照組比較,東哥阿里提取物組實驗大鼠血清5-HT水平顯著降低(P<0.01),推斷其對本模型中炎癥相關痛感有緩解作用。

    表1 實驗大鼠血清炎癥細胞因子比較Table 1 Comparison of Inflammatory cytokines in Experimental tats serum

    總之,褐藻糖膠、檸檬酸鉀和東哥阿里提取物三種活性物質(zhì)均能顯著(P<0.01)降低NO的水平,東哥阿里提取物可以同時顯著(P<0.01)降低IL-1β、IL-8、NO和5-HT的水平,對上述炎癥因子的生成有抑制作用。

    炎癥的發(fā)生多表現(xiàn)為紅、熱、腫、痛和功能障礙的特征,本實驗中褐藻糖膠、檸檬酸鉀和東哥阿里提取物對關節(jié)注射尿酸鈉引起的關節(jié)腫脹有顯著(P<0.01)抑制作用,推測三者對相關炎癥有緩解或抑制的效果;結(jié)合該推斷進行了髓過氧化物酶(MPO)、白介素、NO的檢測發(fā)現(xiàn)三者均可以降低血清MPO和NO的水平。MPO是中性粒細胞的功能標志和激活標志,是中性粒細胞所特有,其水平及活性變化代表著嗜中性多形核白細胞(Neutrophilic polymorphonuclear leukocytes,PMN)的功能和活性狀態(tài),即使在有強吞噬作用的巨噬細胞中也極少或完全沒有這種酶。在細胞化學上,一般將MPO作為中性粒細胞的標志。其功能為將氯氧化物和氧化氫轉(zhuǎn)變?yōu)榇温人猁}。在炎癥狀態(tài)下,它被釋入細胞外液,此酶參與含低密度脂蛋白的脂類氧化。PMN介導的炎癥是痛風性關節(jié)炎的核心所在,而增強的中性粒細胞-內(nèi)皮細胞黏連,是急性痛風產(chǎn)生的本質(zhì)。循環(huán)中的PMN正常情況下呈非活化狀態(tài),在趨化因子和激活因子作用下可被激活,繼而侵入炎癥組織,引起組織損傷。激活因子通過與PMN細胞膜表面受體相結(jié)合,誘導PMN的呼吸爆發(fā),激活的PMN在趨化因子作用下與血管內(nèi)皮細胞(Vascular endothelial cells,VEC)粘附并進入組織中,PMN粘附并穿越VEC向炎癥部位游走,是急性炎癥損傷過程的重要特征,PMN與VEC表面粘附因子的相互作用是其分子生物學基礎[6]。越來越多的證據(jù)表明[7-10]痛風性關節(jié)炎的核心是中性粒細胞介導的炎癥,在正常情況下組織中少見PMN,組織中PMN較循環(huán)中PMN重要,一般循環(huán)中PMN是非活化狀態(tài),必須在趨化因子和激活因子作用下被激活,繼而侵入炎癥組織引起組織損傷并在組織損傷中起重要作用[11]。NO的合成和釋放可以促進炎癥反應,促進血管擴張,增強血管通透性,水腫,產(chǎn)生細胞毒性等,研究認為急慢性炎癥的發(fā)生均與體內(nèi)NO含量升高有關系。東哥阿里提取物組實驗大鼠MPO和NO血清中含量的降低,提示痛風性關節(jié)炎癥的紅腫表現(xiàn)及功能障礙的抑制機制與NO的調(diào)控和中性粒細胞的激活密切相關。

    IL-1β是在PMN趨化、激活過程中起重要作用的炎癥細胞因子,是炎癥反應的重要調(diào)節(jié)劑[12]。IL-1β作為調(diào)節(jié)炎癥的始動因素,可增高微血管壁的通透性和炎性細胞趨化作用,激活炎性細胞,導致炎癥反應加重或發(fā)展,并可誘導IL-6、IL-8等二級前炎癥細胞因子。在痛風性關節(jié)炎的發(fā)生發(fā)展過程中,各個細胞因子非單獨作用,而是結(jié)合成網(wǎng)絡共同參與,互相影響。IL-1β主要由單核巨噬細胞產(chǎn)生,多存在于血及組織液中,可以誘導血管內(nèi)皮細胞表達細胞黏附因子,活化巨噬細胞及粒細胞,刺激單核-巨噬細胞等合成IL-1、IL-6、IL-8及腫瘤壞死因子(Tumor necrosis factor,TNF-α)等。IL-8生物學活性主要是趨化中性粒細胞、嗜酸(堿)性粒細胞、淋巴細胞等到炎癥局部引起炎癥或變態(tài)反應。另外,IL-8還能激活PMN、嗜堿性粒細胞,擴張血管,促進血管增生及粒細胞增生,是一個有效的PMN激活和趨化因子。因而,實驗中發(fā)現(xiàn)模型組與空白對照組的腫脹、肢體功能和MPO水平與上述白介素水平呈正相關性,而攝入東哥阿里提取物的實驗大鼠血清中IL-1β和IL-8水平降低也與肢體腫脹、功能障礙及中性粒細胞活性的減輕密切相關。

    急性痛風性關節(jié)炎的主要表現(xiàn)為關節(jié)疼痛,尿酸鈉溶液引起的實驗性痛風性關節(jié)炎模型主要表現(xiàn)為痛覺高敏及出現(xiàn)疼痛反應伴隨肢體功能障礙。中樞5-HT和外周5-HT分屬兩個獨立系統(tǒng),在外周5-HT屬致痛物質(zhì),在中樞5-HT屬鎮(zhèn)痛物質(zhì),實驗中主要測定了血液中的5-HT,屬于致痛物質(zhì),此指標的升高指征實驗動物的痛感增強,反之則痛感降低。本實驗中檢測了實驗大鼠血清5-HT的水平,結(jié)果如表1所示。模型組的5-HT高于空白組,表明以尿酸鈉結(jié)晶復制痛風性關節(jié)炎的方法造成實驗大鼠關節(jié)炎模型并引起痛感,與模型對照組比較,東哥阿里提取物組實驗大鼠血清5-HT水平顯著降低(P<0.01),推斷其對本模型中炎癥相關痛感有緩解作用,結(jié)合步態(tài)積分進行分析,發(fā)現(xiàn)東哥阿里提取物可以降低尿酸鈉結(jié)晶造成的關節(jié)炎的痛感和對肢體正常功能的影響。

    經(jīng)比較可知,在褐藻糖膠、檸檬酸鉀和東哥阿里提取物三種天然活性物質(zhì)中,東哥阿里提取物可以有效緩解和抑制尿酸鈉結(jié)晶引起的痛風性關節(jié)炎,對其臨床表現(xiàn)出的關節(jié)腫脹、患處疼痛和肢體功能障礙有較好的緩解作用,并且初步推斷其作用機制與通過抑制血清中炎癥因子IL-1β、IL-8、NO和5-HT的增高從而降低中性粒細胞的活化和向患處趨化的幾率密切相關。

    1 Shi XY(施雪筠).Physiology(生理學).Beijing:Chinese Medicine Press,2001.105.

    2 Zhu J(朱君),Yu JW(余俊文).The advances in epidemiological and risk factors study on gout and hyperuricemia.Progress in Modern Biomedicine(現(xiàn)代生物醫(yī)學進展),2008,8:191.

    3 Schumacher HR Jr.Febuxostat:A non-purine selective inhibitor of xanthine oxidase for the management of hyperuricaemia in patients with gout.Expert Opin Investig Drugs,2005,5:893-903.

    4Chen WZ(陳文照),Gu HP(谷煥鵬),Wen CP(溫成平).The effect of Tongfengning on IL-1,IL-6 content in synovial of gout arthritisrats.China J Chin Tradit Med Pharm (中國醫(yī)藥學報),2004,19:93-94.

    5 Coderre TJ,Wall PD.Ankle joint urate arthritis in rat:provide a useful tool for the evaluation of analysis and antiarthritis agents.Pharmacology Biochemistry and Behavior,1988,29 (03):46.

    6 Lee J,An J,Yang HJ,et al.Reparatory and Preventive Effects of Oriental Herb Extract Mixture(OHEM)on Hyperuricemia and Gout.Food Sci Biotechnol,2010,19:517-524.

    7 Pollmann G,Kullich W,Klein G.Therapy of hyperuricemia and gout.Wien Med Wochenschr,1997,147:382-387.

    8 Terkeltaub R,Baird S,Sears P,et al.The murine homolog of the interleukin-8 receptor CXCR-2 is essential for the occurrence of neutrophilic inflammation in the air pouch model of acute urate crystal-induced gouty synovitis.Arthritis Rheum,1998,41:900-909.

    9 Weinberger A.Gout,uric acid metabolism,and crystal-induced inflammation.Curr Opin Rheumatol,1995,7:359-363.10 Araki M.The role of E-selection for neutrophil activation and tumor metastasis in vivo.Leukema,1997,11(suppl3):209-212.

    11 Chen GL(陳光亮).Effects and mechanisms of total saponin of Dioscorea and Achyranthes on gout.Anhui:Anhui Medical University(安徽醫(yī)科大學),PhD.2004.

    12 Zhu XX(朱萱萱),Chen Z(陳震),Ji W(紀偉),et al.The experimental study on Hot Bi Xiao treating acute gouty arthritis.Drug standard of China(中國藥品標準),2002,3:57.

    Effects of Several Natural Extracts on Gouty Arthritis in Rats

    SHI Shen1,2,3,4,5*,HE Wei4,5,XU Hong-mei4,5,LI Sen4,5,ZHANG Wei-rui1,2,ZHANG Ze-sheng3,4,51Tiens Group Co.Ltd,Post-doctoral workstation;2Tianjin Tiens Academy of Life Science and Technology,Tianjin 301700,China;3Tianjin University of Science and Technology,Post-doctoral mobile station;4Key Laboratory of Food Nutrition and Safety,Ministry of Education,Tianjin University of Science and Technology;5Department of Food Engineering and Biotechnology,Tianjin University of Science and Technology,Tianjin 300457,China

    Gouty arthritis is one of the most painful symptoms of gout patients.This research aimed to investigate the effect of several natural extracts on acute gouty arthritis in rats induced by monosodium urate(MSU)crystals.The animal model of acute gouty arthritis on wistar rats was made through injecting MSU in ankle joints.The rats were administrated orally with Fucoidan,Potassium Citrate and Tongkat Ali extracts.And the joint swelling,gait score and several inflammatory factors in serum were measured to discuss the prevention and relief effects in the inflammation-related limb swelling,pain,dysfunction of the natural extracts on acute gouty arthritis and investigated the mechanism preliminarily.As a result,the three kinds of natural extracts could significantly reduce the joint swelling after induction MSU in rats 24 h later.This showed that the three could inhibit the symptoms inflammation-related limb joint swelling.Tongkat Ali extracts could decrease the gait score.It means that the limb inflammation,pain and dysfunction had been reduced on the rats.Anti-inflammatory mechanisms of the three active substances were explored,by further testing of experimental rat serum biochemical indices.Fucoida and Tongkat Ali extracts could significantly reduce the level of Myeloperoxidase.It indicated that both the mitigation of the inflammatory response may be related to the activation of neutrophils.And Tongkat Ali extracts could significantly decrease the IL-1β,IL-8,NO and 5-HT of model rats.It showed that Tongkat Ali extracts had a certain inhibitory effect on the occurrence,development and other aspects of inflammation,while the symptoms of limb dysfunction was reduced by inhibiting the pain related inflammatory factor such as 5-HT.In conclusion,the three kinds of natural extracts can relieve the attack of acute gouty arthritis induced MSU in rats.And the Tongkat Ali extracts play an important role in reducing the joint swelling,relieving the pain and the inhibition of inflammation.

    uric acid;urate arthritis;fucoidan;potassium citrate;Tongkat Ali;rat

    1001-6880(2012)10-1362-06

    2011-12-22 接受日期:2012-05-25

    *通訊作者 E-mail:shishen1030@163.com

    R284.2

    A

    猜你喜歡
    東哥痛風性阿里
    東哥
    痛風性關節(jié)炎的辨治經(jīng)驗
    云上阿里
    炎黃地理(2021年1期)2021-06-08 00:27:03
    辰辰帶你游阿里
    關愛的力量——我與“東哥”的故事
    師道·教研(2019年5期)2019-06-24 10:50:48
    痛風性關節(jié)炎的中醫(yī)治療
    X線、CT、MRI在痛風性關節(jié)炎診斷中的應用對比
    都是紅包惹的禍
    阿里戰(zhàn)略
    阿里是個好榜樣
    美女 人体艺术 gogo| 国精品久久久久久国模美| 不卡av一区二区三区| 免费在线观看影片大全网站| 日韩欧美三级三区| 一级,二级,三级黄色视频| e午夜精品久久久久久久| 窝窝影院91人妻| 在线观看www视频免费| 国产主播在线观看一区二区| 久久久久久久久久久久大奶| 国产亚洲欧美98| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 久久久精品区二区三区| 亚洲视频免费观看视频| 国产精品成人在线| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲专区国产一区二区| 他把我摸到了高潮在线观看| 久久精品成人免费网站| www.精华液| 欧美性长视频在线观看| av在线播放免费不卡| 性色av乱码一区二区三区2| 性少妇av在线| 成人精品一区二区免费| 国产在线一区二区三区精| 黄色视频不卡| 国产极品粉嫩免费观看在线| 制服人妻中文乱码| 麻豆成人av在线观看| 成年动漫av网址| 亚洲av日韩在线播放| 国产精品亚洲av一区麻豆| 9191精品国产免费久久| 乱人伦中国视频| 99国产精品免费福利视频| 一区二区三区精品91| 亚洲精品国产色婷婷电影| 老司机在亚洲福利影院| a级片在线免费高清观看视频| 亚洲精华国产精华精| 国产亚洲欧美在线一区二区| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 久久人妻av系列| 在线观看免费视频日本深夜| 久久久久精品人妻al黑| 精品一区二区三区四区五区乱码| 色播在线永久视频| av中文乱码字幕在线| 一个人免费在线观看的高清视频| 女人被狂操c到高潮| 精品久久久精品久久久| 丁香欧美五月| 1024视频免费在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产亚洲精品第一综合不卡| 成在线人永久免费视频| 老司机午夜福利在线观看视频| 亚洲专区字幕在线| 人妻 亚洲 视频| 视频在线观看一区二区三区| 怎么达到女性高潮| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产亚洲欧美在线一区二区| 在线av久久热| 欧美性长视频在线观看| 亚洲视频免费观看视频| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 成人永久免费在线观看视频| av欧美777| cao死你这个sao货| xxx96com| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 俄罗斯特黄特色一大片| 日韩欧美在线二视频 | 亚洲精华国产精华精| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产精品一区二区精品视频观看| 国产不卡av网站在线观看| 久久久久国内视频| 窝窝影院91人妻| 好男人电影高清在线观看| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲五月婷婷丁香| 国产精品久久电影中文字幕 | 涩涩av久久男人的天堂| 51午夜福利影视在线观看| 欧美一级毛片孕妇| 亚洲熟女毛片儿| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 精品一区二区三区四区五区乱码| 老司机在亚洲福利影院| 国产精品免费一区二区三区在线 | 日韩免费高清中文字幕av| videos熟女内射| 午夜亚洲福利在线播放| 成人影院久久| 成人国产一区最新在线观看| 中文字幕人妻丝袜制服| 欧美另类亚洲清纯唯美| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产一区二区三区综合在线观看| 女人精品久久久久毛片| 麻豆成人av在线观看| 人妻一区二区av| 欧美精品一区二区免费开放| av电影中文网址| 精品国产一区二区三区四区第35| 青草久久国产| av国产精品久久久久影院| 韩国精品一区二区三区| 免费人成视频x8x8入口观看| 黄色怎么调成土黄色| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 精品福利永久在线观看| 一级毛片女人18水好多| 国产在线一区二区三区精| 性色av乱码一区二区三区2| 午夜成年电影在线免费观看| 超碰97精品在线观看| 美女高潮到喷水免费观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 人妻 亚洲 视频| 国产av又大| 99国产精品99久久久久| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 十八禁人妻一区二区| 亚洲色图综合在线观看| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 丝袜人妻中文字幕| 在线观看舔阴道视频| 亚洲第一av免费看| 国产欧美日韩一区二区精品| 久久精品国产综合久久久| 天天影视国产精品| 欧美色视频一区免费| av国产精品久久久久影院| 免费看a级黄色片| 狠狠狠狠99中文字幕| 午夜成年电影在线免费观看| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 久久久久国内视频| 午夜福利影视在线免费观看| 男女床上黄色一级片免费看| 国产区一区二久久| 中文亚洲av片在线观看爽 | 在线十欧美十亚洲十日本专区| av在线播放免费不卡| 嫁个100分男人电影在线观看| av国产精品久久久久影院| 亚洲美女黄片视频| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 中文字幕人妻丝袜制服| 精品国产乱子伦一区二区三区| 99久久人妻综合| 免费人成视频x8x8入口观看| 热re99久久国产66热| 国产精品久久久av美女十八| 99香蕉大伊视频| 成人永久免费在线观看视频| 久久久久精品人妻al黑| 国产男女内射视频| 成人国产一区最新在线观看| av网站免费在线观看视频| xxx96com| 国产一区在线观看成人免费| 久久久国产成人免费| 亚洲一区二区三区不卡视频| 99热只有精品国产| 国产单亲对白刺激| 国产精品综合久久久久久久免费 | 搡老岳熟女国产| 免费看十八禁软件| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 两个人免费观看高清视频| 久久九九热精品免费| 在线国产一区二区在线| 黄片小视频在线播放| x7x7x7水蜜桃| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产一区二区三区综合在线观看| 欧美丝袜亚洲另类 | 中文字幕高清在线视频| 日本欧美视频一区| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 在线观看66精品国产| 黄色视频不卡| 成人18禁在线播放| 国产亚洲一区二区精品| 午夜亚洲福利在线播放| 国产成人免费无遮挡视频| 国产成人系列免费观看| 在线观看免费午夜福利视频| a级毛片黄视频| 久久久水蜜桃国产精品网| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 成年版毛片免费区| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 丝袜美腿诱惑在线| 亚洲人成伊人成综合网2020| 国产片内射在线| 日韩中文字幕欧美一区二区| av视频免费观看在线观看| 国产精品av久久久久免费| 久99久视频精品免费| 人妻丰满熟妇av一区二区三区 | 亚洲熟妇熟女久久| 99久久国产精品久久久| 91精品国产国语对白视频| 乱人伦中国视频| 老司机影院毛片| 免费在线观看亚洲国产| 国产成人精品久久二区二区免费| 成人国产一区最新在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 很黄的视频免费| 国产在视频线精品| 国产一区有黄有色的免费视频| 欧美激情高清一区二区三区| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 国产成人精品无人区| 亚洲免费av在线视频| 久久香蕉精品热| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 一a级毛片在线观看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 欧美成人午夜精品| 国产成人精品久久二区二区91| xxxhd国产人妻xxx| 亚洲成人国产一区在线观看| 亚洲精品国产一区二区精华液| 日韩免费av在线播放| 天天操日日干夜夜撸| 我的亚洲天堂| 另类亚洲欧美激情| 老司机午夜福利在线观看视频| 飞空精品影院首页| 国产精品偷伦视频观看了| 成人永久免费在线观看视频| 90打野战视频偷拍视频| 精品国内亚洲2022精品成人 | 女人被狂操c到高潮| 国产精品久久久久久精品古装| 69av精品久久久久久| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 免费黄频网站在线观看国产| 热99re8久久精品国产| 亚洲熟女毛片儿| 天堂中文最新版在线下载| 亚洲精品av麻豆狂野| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 亚洲国产看品久久| e午夜精品久久久久久久| 老汉色∧v一级毛片| 交换朋友夫妻互换小说| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 黄色视频不卡| 国产成人av激情在线播放| 在线观看免费视频网站a站| 精品一区二区三区四区五区乱码| 中文字幕制服av| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 欧美日韩成人在线一区二区| 国产精品免费视频内射| 日韩欧美免费精品| 9191精品国产免费久久| 欧美日本中文国产一区发布| av一本久久久久| 在线视频色国产色| 一进一出抽搐动态| 久久香蕉精品热| 最近最新中文字幕大全免费视频| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 天堂√8在线中文| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 精品久久久久久,| 中文字幕人妻熟女乱码| 久久久精品区二区三区| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 国产男女超爽视频在线观看| 日日爽夜夜爽网站| 99在线人妻在线中文字幕 | 国产成人精品在线电影| 一级毛片精品| 国产一区二区三区综合在线观看| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 国产又色又爽无遮挡免费看| 99久久综合精品五月天人人| 久久国产乱子伦精品免费另类| 操出白浆在线播放| 国产精品综合久久久久久久免费 | 一本一本久久a久久精品综合妖精| 一级片'在线观看视频| av天堂在线播放| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 身体一侧抽搐| 青草久久国产| 在线观看66精品国产| 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产成人精品久久二区二区免费| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 在线av久久热| 无遮挡黄片免费观看| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 欧美日韩亚洲高清精品| 99香蕉大伊视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 男女下面插进去视频免费观看| 亚洲欧美一区二区三区久久| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 99精品欧美一区二区三区四区| 多毛熟女@视频| 国产精品久久久av美女十八| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 午夜福利视频在线观看免费| 成人国语在线视频| 午夜福利视频在线观看免费| 国产成人欧美在线观看 | 午夜成年电影在线免费观看| 久热这里只有精品99| 欧美成人免费av一区二区三区 | 亚洲精品美女久久av网站| 久久99一区二区三区| 男男h啪啪无遮挡| 国产精品二区激情视频| 精品少妇久久久久久888优播| 他把我摸到了高潮在线观看| 国产精品永久免费网站| av天堂在线播放| 男人的好看免费观看在线视频 | 免费不卡黄色视频| 午夜两性在线视频| 国产成人影院久久av| 97人妻天天添夜夜摸| 亚洲一码二码三码区别大吗| 欧美精品啪啪一区二区三区| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲中文av在线| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 在线免费观看的www视频| 国产高清videossex| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 高清在线国产一区| 黄片小视频在线播放| 国产精品永久免费网站| 热99久久久久精品小说推荐| 最近最新中文字幕大全电影3 | 中文字幕人妻熟女乱码| 纯流量卡能插随身wifi吗| 在线观看免费日韩欧美大片| 欧美亚洲日本最大视频资源| 69精品国产乱码久久久| 久久人人97超碰香蕉20202| 日韩有码中文字幕| 韩国精品一区二区三区| e午夜精品久久久久久久| 午夜免费成人在线视频| 国产单亲对白刺激| 精品视频人人做人人爽| av一本久久久久| 国产精品久久久人人做人人爽| 校园春色视频在线观看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 91麻豆av在线| 久久亚洲精品不卡| 欧美大码av| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 中亚洲国语对白在线视频| 一级a爱视频在线免费观看| 一级片免费观看大全| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 在线观看午夜福利视频| 国产一区二区三区视频了| 香蕉国产在线看| 妹子高潮喷水视频| 久久香蕉激情| 婷婷精品国产亚洲av在线 | 丰满的人妻完整版| 黑人欧美特级aaaaaa片| 在线天堂中文资源库| 日日爽夜夜爽网站| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲中文字幕日韩| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 久久久久久久午夜电影 | 老熟女久久久| 亚洲成a人片在线一区二区| 精品亚洲成a人片在线观看| 国产亚洲欧美98| 欧美av亚洲av综合av国产av| 国产激情久久老熟女| 日韩欧美一区视频在线观看| 丰满迷人的少妇在线观看| 亚洲久久久国产精品| 日日夜夜操网爽| 国产免费现黄频在线看| 中文字幕高清在线视频| 午夜亚洲福利在线播放| 国产精品1区2区在线观看. | 亚洲色图av天堂| 久久久久久久久久久久大奶| 成人特级黄色片久久久久久久| 青草久久国产| 嫩草影视91久久| 性少妇av在线| 国产又色又爽无遮挡免费看| 久久午夜综合久久蜜桃| 黄色视频不卡| 国产成+人综合+亚洲专区| 亚洲av第一区精品v没综合| 色老头精品视频在线观看| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲成人免费电影在线观看| 99香蕉大伊视频| av线在线观看网站| 亚洲成国产人片在线观看| 久久国产乱子伦精品免费另类| 色综合欧美亚洲国产小说| 两个人免费观看高清视频| 久久影院123| 男女床上黄色一级片免费看| 热re99久久国产66热| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 国产乱人伦免费视频| 久久久久国内视频| 欧美日韩亚洲高清精品| 十分钟在线观看高清视频www| 国产xxxxx性猛交| www.熟女人妻精品国产| 老汉色av国产亚洲站长工具| 在线观看舔阴道视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 免费人成视频x8x8入口观看| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产野战对白在线观看| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产不卡一卡二| 久久午夜综合久久蜜桃| 女人久久www免费人成看片| 搡老熟女国产l中国老女人| 高清黄色对白视频在线免费看| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产av又大| 老熟女久久久| 国产精品免费大片| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 日韩欧美国产一区二区入口| 成人三级做爰电影| 国产91精品成人一区二区三区| 久久青草综合色| 亚洲性夜色夜夜综合| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 最新的欧美精品一区二区| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国产精品亚洲av一区麻豆| 人妻 亚洲 视频| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 免费观看a级毛片全部| av线在线观看网站| 午夜久久久在线观看| 99精品欧美一区二区三区四区| 国产成人精品久久二区二区免费| 久久久久久久精品吃奶| 999精品在线视频| 久久这里只有精品19| 国产真人三级小视频在线观看| av天堂久久9| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| av不卡在线播放| 国产精品久久视频播放| 久久久久久人人人人人| 精品欧美一区二区三区在线| 亚洲,欧美精品.| 真人做人爱边吃奶动态| 久久久久久久精品吃奶| 亚洲五月色婷婷综合| 波多野结衣一区麻豆| 精品亚洲成a人片在线观看| 国产精品 欧美亚洲| 天堂√8在线中文| 欧美乱色亚洲激情| 亚洲人成电影观看| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产精品久久电影中文字幕 | svipshipincom国产片| 亚洲精品美女久久av网站| 中文字幕精品免费在线观看视频| a在线观看视频网站| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 日韩欧美在线二视频 | 欧美精品啪啪一区二区三区| 成年人黄色毛片网站| 男女午夜视频在线观看| 黄色丝袜av网址大全| 亚洲av日韩精品久久久久久密| www日本在线高清视频| 中文欧美无线码| 丝瓜视频免费看黄片| 午夜久久久在线观看| 在线天堂中文资源库| 99久久99久久久精品蜜桃| 老鸭窝网址在线观看| 纯流量卡能插随身wifi吗| 欧美成人免费av一区二区三区 | 成人18禁在线播放| 视频区欧美日本亚洲| 老司机在亚洲福利影院| 亚洲人成电影免费在线| av欧美777| 亚洲精品av麻豆狂野| 久久99一区二区三区| 黄色 视频免费看| 大码成人一级视频| 91精品三级在线观看| 中文字幕精品免费在线观看视频| 青草久久国产| 国产精品久久久av美女十八| 午夜免费鲁丝| 最近最新中文字幕大全免费视频| 老司机靠b影院| 欧美成人免费av一区二区三区 | 久久ye,这里只有精品| 成人免费观看视频高清| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 日本一区二区免费在线视频| 在线观看免费视频网站a站| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 免费人成视频x8x8入口观看| 精品电影一区二区在线| 午夜成年电影在线免费观看| 91成年电影在线观看| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 女警被强在线播放| 国产免费av片在线观看野外av| 国产成人精品久久二区二区免费| 视频在线观看一区二区三区| 新久久久久国产一级毛片| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 精品国产一区二区久久| 国产一卡二卡三卡精品| 欧美乱色亚洲激情| 免费观看a级毛片全部| 国产又色又爽无遮挡免费看| 国产1区2区3区精品| 大型av网站在线播放| 精品电影一区二区在线| 成人18禁在线播放| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 久久香蕉精品热| 国产国语露脸激情在线看| 久久国产乱子伦精品免费另类| 大片电影免费在线观看免费| 亚洲伊人色综图| 一二三四社区在线视频社区8| 精品国产一区二区久久| 99国产极品粉嫩在线观看| 操出白浆在线播放| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产精品亚洲av一区麻豆| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 99热只有精品国产| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 啦啦啦视频在线资源免费观看| 黄色视频,在线免费观看| 女性被躁到高潮视频| 视频在线观看一区二区三区| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 99精品久久久久人妻精品| 男女午夜视频在线观看| 国产精品免费大片| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 真人做人爱边吃奶动态| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 老司机在亚洲福利影院| 欧美乱妇无乱码| 亚洲伊人色综图| 人妻久久中文字幕网| 99热只有精品国产| 亚洲中文日韩欧美视频| 精品免费久久久久久久清纯 | 在线观看免费日韩欧美大片| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 真人做人爱边吃奶动态| 超色免费av| 精品一区二区三卡| 精品国产乱子伦一区二区三区| 老鸭窝网址在线观看| 国产亚洲精品第一综合不卡| xxxhd国产人妻xxx| 1024视频免费在线观看| 亚洲国产精品sss在线观看 | 一本综合久久免费| 久久久国产成人免费| 国产精品国产av在线观看| 亚洲一区二区三区不卡视频| 一级作爱视频免费观看| 一进一出好大好爽视频| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 免费在线观看黄色视频的| 亚洲成人国产一区在线观看| 久久久久国产精品人妻aⅴ院 | 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 9191精品国产免费久久|