電子溫針對(duì)胰島素抵抗糖尿病周?chē)窠?jīng)病模型大鼠神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制的研究

李凌雁，王麗巖△，肖洪彬，侯 靜

(1.大慶醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校，黑龍江 大慶163312;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江哈爾濱150040)

糖尿病是繼心血管疾病及腫瘤之后第3位威脅人類(lèi)健康和生命的非傳染性慢性病，其中90%以上為2型糖尿病。研究發(fā)現(xiàn)74%的2型糖尿病患者存在胰島素抵抗(IR)。糖尿病周?chē)窠?jīng)病變(DPN)是胰島素抵抗性糖尿病最常見(jiàn)的慢性并發(fā)癥[1]。目前臨床主要采用藥物治療，效果不佳，毒副作用大。因此尋求安全有效的防治DPN的方法尤為迫切。電子溫針[2]是將溫針、電針與傳統(tǒng)針刺完美結(jié)合，與傳統(tǒng)溫針灸相比具有獨(dú)特的控溫功能，能確保銀針針體溫度恒定，并可根據(jù)治療需要設(shè)置具體參數(shù)，操作簡(jiǎn)單，安全可靠。本研究擬從降糖及抗氧化應(yīng)激的角度揭示電子溫針對(duì)DPN神經(jīng)修復(fù)過(guò)程的干預(yù)機(jī)制，現(xiàn)將研究過(guò)程及結(jié)果概述如下。

1 材料

1.1 主要試劑

鏈脲佐菌素，上?？婆d實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司生產(chǎn);彌可保(甲鈷銨針)日本衛(wèi)材珠式會(huì)社制造(500 ug/支);TOCA測(cè)定試劑盒等，南京建成生物工程研究所生產(chǎn);胰島素試劑盒，北京北方生物技術(shù)研究所生產(chǎn)等。

1.2 主要儀器

血糖儀，德國(guó)羅氏公司;Medlab－u/4cs生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)，南京美易科技有限公司;溫針電熱針綜合治療儀，北京中西泰安技術(shù)服務(wù)有限公司，型號(hào):M150002。

2 研究方法

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及造模

選取重量(220±30)g，雄性wistar大鼠60只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)取10只大鼠作為空白組，其余大鼠造模后隨機(jī)分組。除空白組外，各組均高脂飼料(豬油12%、花生10%、糖15%、蛋黃粉10%、鹽5%、豬膽鹽0.03%、基礎(chǔ)飼料47%)喂養(yǎng)[3]，第8周時(shí)將鏈脲佐菌素用檸檬酸－檸檬酸鈉緩沖液0.1 mol/L在避光條件下配成濃度為0.2%(PH值為4.2～4.5)的溶液，按劑量30 mg/kg腹腔單次注射，72 h后尾靜脈取血測(cè)試血糖(FBG)、空腹胰島素水平(FINS)，計(jì)算胰島素敏感指數(shù)(ISI)。血糖＞16.7 mmol/L為糖尿病大鼠?？瞻捉M注射相同體積的0.1 mol/L檸檬酸－檸檬酸鈉緩沖液(PH值為4.2)。

用以上造模方法獲得造模成功的糖尿病胰島素抵抗大鼠48只。所有大鼠飼養(yǎng)8周后進(jìn)行坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度測(cè)定，其傳導(dǎo)速度與空白組相比顯著減慢即為糖尿病周?chē)窠?jīng)病變?cè)炷３晒Γ蕴闯赡Ｕ?。如此獲得糖尿病周?chē)窠?jīng)病變大鼠42只，造模成功后的大鼠隨機(jī)分為模型組(14只)、藥物組(14只)、電子溫針組(14只)，各治療組均在成模后開(kāi)始治療，共治療8周。

2.2 干預(yù)方法

電子溫針組大鼠穴位依據(jù)人體穴位及大鼠穴位圖譜，結(jié)合大鼠解剖結(jié)構(gòu)定位，用自制大鼠固定器固定，使大鼠成俯臥位，取背部夾脊穴(T6～L3各椎骨棘突正中旁開(kāi)約0.5寸，左右各取5穴)、雙側(cè)脾俞、腎俞、足三里、環(huán)跳，以溫?zé)犭娽樖┲?，設(shè)定參數(shù)為疏密波，溫度37～45℃，時(shí)間35 min，隔日1次，共治療8周;藥物組60 μg/kg彌可保隔日注射于下肢肌肉治療8周;空白組和模型組隔日捆綁固定 1次，每次 30 min，共8周。

2.3 觀(guān)察指標(biāo)及方法

2.3.1 血糖(FPG)、空腹胰島素水平(FINS)、胰島素敏感性指數(shù)(ISI) 血糖儀測(cè)定血糖;放免法檢測(cè)空腹胰島素水平;依據(jù)我國(guó)學(xué)者李光偉提出的ISI=1/(FPG×FINS)公式計(jì)算[4]。

2.3.2 血清和坐骨神經(jīng)丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、總抗氧化能力(T－AOC)含量測(cè)定 在治療后8周，用濃度10%水合氯醛(350 mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠，心臟穿刺取血后分離血清，在－20℃的條件下保存。取出坐骨神經(jīng)立即冷凍下保存，準(zhǔn)確進(jìn)行組織稱(chēng)重，按重量體積比加生理鹽水制成10%的勻漿，4000轉(zhuǎn)/分離心10 min，取上清液，用生理鹽水稀釋成1∶9的1%組織勻漿待測(cè)。應(yīng)用化學(xué)比色檢測(cè)法測(cè)血清和坐骨神經(jīng)中MDA、SOD和T－AOC含量。

2.3.3 坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度[5]將大鼠俯臥固定于檢測(cè)板上，剝離出雙側(cè)梨狀肌下緣坐骨神經(jīng)，將坐骨神經(jīng)約1 cm置于4%多聚甲醛中固定24～48 h。將暴露分離的坐骨神經(jīng)放在生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)的刺激器上，用4 mA、0.2 ms脈沖電流刺激后肢末，記錄感覺(jué)神經(jīng)動(dòng)作電位，計(jì)算出兩個(gè)動(dòng)作電位的潛伏期差值(t2－t1)，以及刺激點(diǎn)至記錄點(diǎn)距離長(zhǎng)度，通過(guò)v=d/t2－t1算出感覺(jué)神經(jīng)傳導(dǎo)速度。

2.4 統(tǒng)計(jì)方法

統(tǒng)計(jì)分析利用SPSS17.0軟件做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理，計(jì)算各組間變化差異。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 電子溫針對(duì)大鼠的FPG、FINS、ISI的影響

表1 電子溫針對(duì)大鼠FPG、FINS、ISI的影響(±s)

表1 電子溫針對(duì)大鼠FPG、FINS、ISI的影響(±s)

注:與空白對(duì)照組比較，＊＊P＜0.01;與模型組比較，*P＜0.05。

組別 只數(shù)FPG(Ummol/L)FINS(mIU/L) ISI空白對(duì)照組 10 5.26±0.37 26.1±2.91 －4.10±0.28模型組 14 21.43±2.90＊＊ 48.7±2.92＊＊ －6.86±0.48＊＊藥物對(duì)照組 14 20.95±1.90＊＊ 48.6±1.90 －6.34±0.37電子溫針組 14 10.06±1.25* 40.76±1.69* －5.88±0.68*

從表1可見(jiàn)，模型組大鼠血糖、血漿胰島素均較正常組顯著升高，胰島素敏感性指數(shù)明顯下降，差異具有非常顯著性意義(P＜0.01)，提示胰島素抵抗性糖尿病大鼠造模成功。電子溫針組治療8周后，大鼠空腹血糖、血漿胰島素均較模型組明顯降低，胰島素敏感性指數(shù)明顯上升，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，治療前后兩組相比，具有顯著性差異(P＜0.05)。但電子溫針組與空白組比較，各項(xiàng)指標(biāo)具有顯著性差異(P＜0.05)，說(shuō)明電子溫針組大鼠的血糖、血漿胰島素水平并未達(dá)到正常，可能與治療時(shí)間有關(guān)系。

3.2 電子溫針對(duì)大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度的影響

表2 大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度治療前后變化對(duì)比(±s)

表2 大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度治療前后變化對(duì)比(±s)

注:與模型組比較，＊＊P＜0.01，*P＞0.05。

組別 只數(shù) 坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度(m/s)治療前 治療后空白對(duì)照組 10 38.43±3.86 39.14±3.82模型組 14 28.31±3.28 27.59±2.39藥物對(duì)照組 14 28.13±3.15* 32.08±3.68＊＊電子溫針組 14 27.48±2.78* 33.01±2.52＊＊

從表2可見(jiàn)，治療前、后各組坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度與空白組相比均明顯下降(P＜0.01)，提示糖尿病周?chē)窠?jīng)病變大鼠模型造模成功。治療前，治療組與模型組進(jìn)行對(duì)比無(wú)顯著差異(P＞0.05)，能說(shuō)明具有可比性。治療后，治療組與模型組進(jìn)行對(duì)比坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度呈現(xiàn)顯著增高(P＜0.01)，其中，電子溫針組與藥物組進(jìn)行對(duì)比未呈現(xiàn)明顯差異性(P＞0.05)，提示電子溫針與彌可保藥物治療均能有效提高糖尿病周?chē)窠?jīng)病變大鼠的坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度，二者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

3.3 電子溫針對(duì)糖尿病周?chē)窠?jīng)病變大鼠血清中MDA、SOD和T－AOC水平的影響

表3 大鼠血清中MDA、SOD和T－AOC水平的比較(nmol/ml，±s)

表3 大鼠血清中MDA、SOD和T－AOC水平的比較(nmol/ml，±s)

注:與空白對(duì)照組比較，＊＊P＜0.01;與模型組比較，△P＜0.05;與藥物對(duì)照組比較，▲P＜0.05。

組別 只數(shù) MDA SOD T－AOC空白對(duì)照組 10 8.07±1.57 148.85±7.16 7.09±1.79模型組 14 18.22±1.98＊＊ 115.46±7.80＊＊ 2.53±0.84＊＊藥物對(duì)照組 14 17.47±1.87＊＊ 123.55±90.97＊＊ 3.55±1.12＊＊電子溫針組 14 11.88±1.89△▲ 165.02±10.96△▲ 9.52±2.80△▲

從表3結(jié)果可以看出，模型組大鼠血清中MDA水平明顯高于空白組(P＜0.01)，而 SOD、T－AOC水平則明顯低于空白組(P＜0.05)。與模型組相比電子溫針能有效減低坐骨神經(jīng)中MDA水平，提高SOD和TAOC水平(均P＜0.05)，電子溫針組與藥物組進(jìn)行對(duì)比有顯著差異(P＜0.05)，說(shuō)明其具有抗氧化應(yīng)激和清除氧自由基的作用。

3.4 電子溫針對(duì)糖尿病周?chē)窠?jīng)病變大鼠坐骨神經(jīng)中MDA、SOD和T－AOC水平的影響

表4 大鼠坐骨神經(jīng)中MDA、SOD和T－AOC的比較(nmol/ml，±s)

表4 大鼠坐骨神經(jīng)中MDA、SOD和T－AOC的比較(nmol/ml，±s)

注:與空白對(duì)照組比較，＊＊P＜0.01，*P＜0.05;與模型組比較，△P＜0.05;與藥物對(duì)照組比較，▲P＜0.05。

組別 只數(shù) MDA SOD T－AOC空白對(duì)照組 10 1.33±0.81 34.06±4.47 4.16±0.79模型組 14 8.66±1.77＊＊ 22.61±5.31* 2.46±0.48*藥物對(duì)照組 14 7.44±1.32＊＊ 25.59±3.66＊＊ 3.24±0.52＊＊電子溫針組 14 4.34±0.98△▲ 55.88±4.58△▲ 6.07±1.32△▲

從表4結(jié)果顯示模型大鼠坐骨神經(jīng)MDA的水平明顯高于空白組(P＜0.01)，而SOD和 T－AOC水平則明顯低于空白組(P＜0.05)。與模型組相比，電子溫針組能有效減低坐骨神經(jīng)中MDA的水平，提高SOD和T－AOC水平(均 P＜0.05)，電子溫針組與藥物對(duì)照組相比有顯著性差異(P＜0.05)，說(shuō)明其具有抗氧化應(yīng)激和清除氧自由基的作用。

4 討論

電子溫針治療8周后，大鼠FBG、FINS較模型組明顯降低，ISI明顯升高，其與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明該治療有效干預(yù)了代謝紊亂、降低了血糖、改善了胰島素抵抗程度，這是電子溫針對(duì)胰島素抵抗性糖尿病大鼠周?chē)窠?jīng)結(jié)構(gòu)和功能的保護(hù)作用機(jī)制之一。

電子溫針可以減少糖尿病周?chē)窠?jīng)病變大鼠坐骨神經(jīng)纖維的功能損傷，具有神經(jīng)保護(hù)作用，可以減低血清及坐骨神經(jīng)中MDA水平、增高SOD和T－AOC水平，具有抗氧化應(yīng)激和清除氧自由基作用，減少神經(jīng)細(xì)胞受氧化應(yīng)激的損傷，這可能是對(duì)周?chē)窠?jīng)的結(jié)構(gòu)和功能起到保護(hù)作用的又一機(jī)制。

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