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    養(yǎng)殖河豚魚的海洋尾絲蟲病病例

    2012-11-23 06:16:24麻麗丹王殿夫于曉婕
    中國獸醫(yī)雜志 2012年3期
    關(guān)鍵詞:纖毛蟲丹東體表

    麻麗丹,王殿夫,于曉婕,吳 斌

    (1.丹東出入境檢驗(yàn)檢疫局,遼寧 丹東118000;2.遼東學(xué)院動(dòng)物科學(xué)系,遼寧 丹東118000;3.四川大學(xué)生命科學(xué)院,四川 成都610207;4.遼寧出入境檢驗(yàn)檢疫局,遼寧 大連116001)

    2007年,遼寧丹東河豚魚養(yǎng)殖場時(shí)常發(fā)生一種由盾纖毛蟲感染導(dǎo)致的寄生蟲病,造成河豚不同程度的死亡,而且該病每年反復(fù)發(fā)作,給該產(chǎn)業(yè)帶來一定的經(jīng)濟(jì)損失,本文介紹了對該寄生蟲的分離培養(yǎng)和鑒定結(jié)果[1-2]。

    1 材料與方法

    1.1 材料 患病河豚魚取自遼寧丹東東港的河豚魚養(yǎng)殖場,患病河豚魚臨床表現(xiàn)為攝食不佳,病魚浮游水表面,不底棲,病魚體色發(fā)黑,黏液增多,體表潰爛,肌肉出現(xiàn)潰爛出血,背部白濁、脫皮,頭部紅腫,鰓蓋內(nèi)側(cè)腫脹、充血、積水,鰓褪色或糜爛,腹部膨脹,局部紅腫、出血或潰爛,鰭出血或潰爛,嚴(yán)重時(shí)腹腔積水,腹腔壁潰爛,肝臟出血或糜爛,腸道松弛、擴(kuò)張、透明、積水,腎臟液化。

    1.2 寄生蟲的分離鑒定

    1.2.1 寄生蟲的活體觀察和培養(yǎng) 寄生蟲的活體觀察:本病可根據(jù)外觀癥狀初步診斷后,從病魚或?yàn)l死魚的病灶組織上取少許樣品,制成水封片,在顯微鏡下觀察到大量蟲體,進(jìn)行觀察和拍照。

    寄生蟲的培養(yǎng):取健康的河豚魚1條,去內(nèi)臟去皮后取肌肉并用剪刀絞成細(xì)小的塊狀,放入玻璃燒杯內(nèi)并加入一定量的已滅菌海水,加熱煮沸30 min,用滅菌4層紗布過濾后放4℃冰箱保存?zhèn)溆?。培養(yǎng)基為海水:魚肉湯的比例為10∶1進(jìn)行配制,同時(shí)在培養(yǎng)基中加入一定量的青霉素(終濃度為25 mg/L)和鏈霉素(終濃度為25mg/L)。接種時(shí)用滅菌鑷子刮取魚病料部位的黏液,接完種后蓋上硅膠塞,并置于15℃~20℃的130r/min震蕩水域中震蕩培養(yǎng)24h,爾后室溫放置保存。

    1.2.2 Wilbert之蛋白銀法染色觀察[3]蛋白銀染色技術(shù)最早為一組織染色法,Bodion(1937)首先將之應(yīng)用于原生動(dòng)物上,經(jīng)過幾十年來不斷的改進(jìn),已成為纖毛蟲纖毛圖示顯示的最重要和最基本的方法。主要用以顯示蟲體的皮層及內(nèi)部結(jié)構(gòu),如纖毛下器、毛基體、核器及各種表膜下纖維系統(tǒng)等,而銀線系統(tǒng)則不被染色。具體步驟為:(1)蟲體于胚胎皿中用Bouin液或飽和升汞(HgCl2)固定20min左右,固定過程中可每隔0.5min將胚胎皿輕輕同方向旋轉(zhuǎn)以便蟲體集中在中央。(2)蒸餾水洗3~4次(Bouin液以水洗至無色為準(zhǔn)),操作時(shí)用粗口吸管自固定液表面小心吸去上層液,為防止蟲體浮起,應(yīng)至少留1mL余液于胚胎皿中,后用大口吸管(保持吸管垂直位)逐滴加入蒸餾水(應(yīng)靠近水面,并環(huán)繞四周但離開凹槽壁小心滴入,注意勿使水滴沿胚胎皿壁切入水底面攪動(dòng)蟲體)。(3)以最細(xì)微吸管小心將蟲體“吹”至皿中心。(4)用0.1%~0.2%次氯酸鈉或次氯酸鉀微量直接供到蟲體處以漂白至“透明”(約1~2min)。(5)蒸餾水洗2次(以完全清洗為度)。(6)將胚胎皿中蛋白銀濃度控制在約0.5%,加蓋后于50℃~60℃的恒溫箱底板上保持30~50 min(視不同種類的嗜染狀況及蟲體大小而調(diào)整時(shí)間)。(7)室溫下用0.1%~0.2%的顯影液顯影1~5min(或更短)。(8)鏡檢后用5%硫代硫酸鈉定影約5min。(9)蒸餾水洗1次(此時(shí)應(yīng)清潔蟲體),將蟲體轉(zhuǎn)入載玻片上并與等量的戴白膠混勻,用眉毛筆調(diào)體位(在必要時(shí),如需腹面朝上等),除去余液,至溫箱烘片約10min。(10)常規(guī)脫水封片(70%酒精起-80%-90%-95%-100%-無水酒精和二甲苯混合液(1∶1)-二甲苯-二甲苯,以上過程每步約2~5min。其中在無水酒精中每步應(yīng)不少于5min,以確保徹底脫水)。

    2 結(jié)果

    2.1 寄生蟲的活體觀察結(jié)果 在顯微鏡下蟲體略成葵花籽形,長50~75μm,寬20~50μm,內(nèi)質(zhì)不透明,常有多個(gè)食物泡及內(nèi)儲顆粒,初步判斷為盾纖毛蟲,患病魚體和寄生蟲分別見圖1、2。

    2.2 盾纖毛蟲的Wilbert之蛋白銀法染色結(jié)果蟲體的前半部稍向內(nèi)側(cè)彎曲,頂端裸毛區(qū)形成明顯的喙?fàn)钔黄?,呈指狀或尖角狀。體被纖毛,后端有1根較長的尾毛,大核位于身體的中央,近球形,被鑒定為海洋尾絲蟲。蛋白銀法染色結(jié)果分別見圖2。

    該蟲可在魚體外行兼性寄生,通常是機(jī)會性地聚集在河豚魚體因損傷而潰爛的體表部位并大量繁殖,從而對宿主產(chǎn)生進(jìn)一步的協(xié)同加害作用,造成河豚魚類大量死亡,對養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)造成巨大的損失。

    3 討論

    盾纖毛蟲屬兼性寄生蟲,一般情況下營自由生活,以懸浮的微小顆粒物質(zhì)(細(xì)菌、微藻、原蟲等)為食;但在某些環(huán)境下,這些纖毛蟲可以表現(xiàn)為寄生性,吞噬某些軟體動(dòng)物、甲殼類及魚類的細(xì)胞和組織殘?jiān)⒃谄浣M織內(nèi)生長、繁殖。蟲體呈瓜子形,體表被有均勻一致的纖毛,大小大約為20~45μm(根據(jù)不同種類略有區(qū)別)。由于寄主生活的環(huán)境各不相同,因此盾纖毛蟲病的病原在不同的魚上也不盡相同。日本Ototake首次從以部分體表發(fā)白為特征而大批死亡的發(fā)病牙鲆魚群患病稚魚體表和內(nèi)臟大量檢出膜口類纖毛蟲,即盾纖類纖毛蟲。目前我國海水魚工廠化養(yǎng)殖中所發(fā)現(xiàn)的盾纖類纖毛蟲主要有能夠寄生于養(yǎng)殖大菱鲆的各組織器官的蟹棲異阿腦蟲、可引發(fā)牙鲆體表潰爛綜合征的指狀擬舟蟲以及紅鰭東方純冬季室內(nèi)越冬時(shí)的體表潰爛綜合征的水滴偽康纖蟲和貪食邁阿密蟲[4-5]。

    通過調(diào)查我們發(fā)現(xiàn),丹東河豚魚養(yǎng)殖場所用水源,主要是入圍海水,海水周圍即人類生活區(qū),養(yǎng)殖用水從蓄水池流入魚池,未進(jìn)行過濾消毒等處理便使用,冬季室內(nèi)越冬期間養(yǎng)殖水中大量海洋尾絲蟲滋生,從而造成越冬期間河豚魚體表潰爛綜合征。因此在養(yǎng)殖過程中,保持良好的養(yǎng)殖環(huán)境尤其是良好水質(zhì)很重要。

    [1]竇海鴿,劉彥,王亞軍.河豚養(yǎng)殖中幾種常見疾病及防治技術(shù)[J].北京水產(chǎn),2004,5(3):26-28.

    [2]姜長波.中國北方河豚魚養(yǎng)殖現(xiàn)狀與展望[J].河北漁業(yè),2001(5):36-48,42.

    [3]李福江,王潔,從裕泉,等.大菱鲆盾纖毛蟲病防治措施[J].齊魯漁業(yè),2005:22(10):28.

    [4]宋京輝,張?jiān)?大菱鲆盾纖毛蟲防治新技術(shù)[J].科學(xué)養(yǎng)魚,2005(1):49-50.

    [5]宋微波,朱明壯,陳子桂,等.海水養(yǎng)殖水體中危害性纖毛蟲.原生動(dòng)物研究I.盾纖目習(xí)見類群的口器結(jié)構(gòu)及鑒別特征[J].青島海洋大學(xué)學(xué)報(bào),2000,30(2):207-216.

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