骨痹湯對膝骨關(guān)節(jié)炎患者滑液中MMP－13、IL－1、TNF－α、TIMP－1的影響

侯亞平 陳太金

(1湖南省老年醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科，長沙市馬王堆路1號，410016;2湖南省老年醫(yī)院檢驗(yàn)科)

骨關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis，OA)的發(fā)病機(jī)制至今未完全探明，但近年的研究提示基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix metalloproteinases，MMPs)、白介素 －1(IL －1)、腫瘤壞死因子－α(TNF－α)等軟骨損傷因子在OA的發(fā)病中起到主要作用。而組織型金屬蛋白酶抑制劑(Tissue Inhibitor Metalloproteinases，TIMPs)等對 MMPS 的活性起重要的調(diào)節(jié)作用，對于關(guān)節(jié)退變有保護(hù)性作用［1］。中藥治療OA在我國應(yīng)用非常普遍，本研究旨在探討自擬“骨痹湯”對OA上述細(xì)胞因子的影響，以初步了解該方的臨床療效和作用機(jī)理。

1 對象與方法

1.1 研究對象 診斷標(biāo)準(zhǔn)采用美國風(fēng)濕病協(xié)會1995年修訂的標(biāo)準(zhǔn)［2］。所有病例均來自于我院門診及住院確診為原發(fā)性膝骨關(guān)節(jié)炎(KOA)的患者共90例，其中男性53例，69膝;女性37例，50膝;年齡55～65(平均61.2)歲;左膝48例，右膝71例;病程最長者25年，最短者2年，平均6年。90例均有不同程度的關(guān)節(jié)腫脹、疼痛、跛行，蹲起或上、下樓梯時(shí)受限或疼痛加重。X線照片檢查均有不同程度的髕骨上下緣或關(guān)節(jié)邊緣唇樣改變，骨贅形成，脛骨髁間棘突或變尖，部分患者關(guān)節(jié)間隙變窄。排除對象:繼發(fā)性KOA，需服用鎮(zhèn)痛藥者，近期堅(jiān)持服他汀類藥物者。

1.2 研究方法

1.2.1 分組與給藥方法 按隨機(jī)數(shù)字表法將患者隨機(jī)分為3組，骨痹湯治療組30例41膝;仙靈骨葆治療組30例38膝;對照組30例40膝。骨痹湯治療組煎服自擬湯劑(威靈仙、伸筋草、獨(dú)活、蜈蚣、懷牛膝、當(dāng)歸、五加皮、鹿銜草等13味)，日1劑;仙靈骨葆治療組每次服用仙靈骨葆膠囊3片，每日兩次;對照組服用硫酸氨基葡萄糖膠囊0.5g/次，每日3次。所有患者均連續(xù)觀察8周，3組間的性別、年齡及病情分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(表1)。

1.2.2 標(biāo)本的采集與保存 患者關(guān)節(jié)液的采集:分別于治療前、治療后8周關(guān)節(jié)穿刺抽取關(guān)節(jié)腔內(nèi)積液，將其離心后取上清液2mL分裝于 Eppendorf管中，－20℃低溫冰箱保存待測。

1.2.3 MMP－13、IL－1、TNF－α、TIMP－1的測定采用美國R＆D公司提供的酶聯(lián)免疫吸附試劑盒。采用雙抗體夾心ELISA法進(jìn)行測定。在已預(yù)包被抗MMP－13、IL－1、TNF－α、TIMP－1單抗的酶標(biāo)板內(nèi)加入標(biāo)準(zhǔn)品(倍比稀釋6個梯度)和待測關(guān)節(jié)液樣品，再與HRP標(biāo)記二抗結(jié)合，經(jīng)徹底洗滌后加底物TMB顯色，采用雷杜RT－6000酶標(biāo)儀于450nm測定吸光度值。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度對數(shù)為橫坐標(biāo)，以吸光度值為縱坐標(biāo)，去除空白對照組吸光度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算相應(yīng)的回歸方程。

表1 骨痹湯治療組、仙靈骨葆治療組和對照組一般資料比較

2 結(jié)果

本試驗(yàn)從2011年1月至2012年6月共90例患者入組，隨訪至少8周，無失訪病例。隨訪結(jié)束后所有患者關(guān)節(jié)腫脹、疼痛、跛行等臨床癥狀均明顯改善，生活質(zhì)量較治療前提高。

2.1 3組患者治療前后關(guān)節(jié)液內(nèi)MMP－13、IL－1、TNF－α、TIMP－1水平比較 與治療前比較，各組患者治療8周后關(guān)節(jié)液中 MMP－13、IL－1、TNF－α均明顯降低(P＜0.05);TIMP－1水平較治療前明顯升高(P＜0.05)(表2)。

2.2 骨痹湯治療組與仙靈骨葆治療組、常規(guī)治療組療效比較 治療8周后與治療前關(guān)節(jié)液中MMP－13、IL－1、TNF－α、TIMP－1含量的差值反映治療效果。骨痹湯組與仙靈骨葆治療組、對照組療效比較，骨痹湯治療組關(guān)節(jié)液中MMP－13、IL－1、TNF－α下降幅度較其余2組大(P＜0.05)，TIMP－1水平升高顯著高于仙靈骨葆治療組和對照組(P＜0.05)(表3)。

表2 各組患者治療前后時(shí)間關(guān)節(jié)液中MMP－13、IL－1、TNF－α、TIMP－1測定值

3 討論

骨關(guān)節(jié)炎屬中醫(yī)骨痹范疇［3］，多發(fā)于中老年人群，臨床表現(xiàn)以反復(fù)關(guān)節(jié)疼痛，關(guān)節(jié)活動受限為主，極少數(shù)發(fā)展為關(guān)節(jié)畸形。臨床上的各種治療方法均不能達(dá)到治愈骨關(guān)節(jié)炎的目標(biāo)，都是以消除或緩解關(guān)節(jié)疼痛等癥狀，阻止和延緩疾病的進(jìn)展，保護(hù)關(guān)節(jié)功能，改善患者生活質(zhì)量為目標(biāo)［4］。其中有兩個治療關(guān)鍵點(diǎn)一是盡快止痛;二是改善或阻止病情進(jìn)展。

表3 各組患者治療8周后與治療前關(guān)節(jié)液中MMP－13、IL－1、TNF－α、TIMP－1含量的差值(μg/L)

骨痹湯由威靈仙、伸筋草、獨(dú)活、紅花、雞血藤等藥組成，著重活血通絡(luò)、蠲痹止痛;懷牛膝、鹿銜草、五加皮等藥補(bǔ)腎、強(qiáng)筋壯骨以改善病情發(fā)展。臨床應(yīng)用療效很好。本實(shí)驗(yàn)研究顯示“骨痹湯”與治療前比較能明顯降低MMP－13、IL－1、TNF－α(P ＜0.05)，并且顯著升高TIMP－1(P＜0.05)，同時(shí)這兩方面改善的作用好于對照組與仙靈骨葆治療組(P＜0.05)，說明骨痹湯對于OA的病變有可靠的治療作用。其短期療效好于仙靈骨葆，提示只顧及補(bǔ)腎對于OA患者止痛與改善癥狀以達(dá)到預(yù)期治療目標(biāo)是有局限性的。我們對于OA的中醫(yī)病機(jī)認(rèn)識在思考本虛的同時(shí)更要注重標(biāo)實(shí)。

骨痹湯可能通過降低關(guān)節(jié)炎液中MMP－13、IL－1、TNF－α水平，提高TIMP－1水平起到保護(hù)關(guān)節(jié)軟骨的作用。骨痹湯治療KOA短期療效較仙靈骨葆和硫酸氨基葡萄糖好。但是骨痹湯治療OA的遠(yuǎn)期療效及其它方面的作用機(jī)理有待更深入的研究。

［1］杜國輝，賀艷麗，陳建英，等.骨關(guān)節(jié)炎早期診斷的生化指標(biāo)［J］.中國生化藥物雜志，2009，30(3):209 －211.

［2］美國風(fēng)濕協(xié)會.骨關(guān)節(jié)炎診斷標(biāo)準(zhǔn)1995年修訂［J］.中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2010，14(6):417.

［3］國家中醫(yī)藥管理局.中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)［S］.南京:南京大學(xué)出版社，1994:48.

［4］中華醫(yī)學(xué)會風(fēng)濕病學(xué)會.骨關(guān)節(jié)炎及診斷治療指南［J］.中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2010，14(6):418.