Rap1 gAP蛋白表達(dá)與卵巢癌之間的關(guān)系

付海燕 孫立新

卵巢癌是婦女常見(jiàn)的三大惡性腫瘤之一，而腫瘤的發(fā)生發(fā)展是多種基因改變和多階段致癌的復(fù)雜過(guò)程，原癌基因的激活和抑癌基因的失活是其發(fā)生的主要機(jī)制。Rap1是Ras家族GTP酶中的一員，在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、黏附中起著重要作用［1］。Rap1 gAP是新近發(fā)現(xiàn)一種腫瘤相關(guān)的抑制基因，通過(guò)調(diào)控Rap1的活性，參與細(xì)胞增殖、分化及整合蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞基質(zhì)粘附和鈣調(diào)蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞間的粘附等生命活動(dòng)的調(diào)節(jié)。本文比較了卵巢癌、卵巢良性腫瘤及正常卵巢組織中的Rap1 gAP蛋白表達(dá)情況，研究其與卵巢癌發(fā)病之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2010年2月至2010年12月之間于我院因多發(fā)子宮肌瘤或子宮肌腺癥行全子宮及雙附件切除患者10例(A組)，年齡為50～55歲，平均(52.3±1.767);卵巢良性腫瘤切除患側(cè)卵巢者10例(B組)，年齡50～60歲，平均(54.4±3.239);行卵巢癌分期術(shù)20例年齡為50～60歲，平均(55.25±2.489)歲，術(shù)后按照FIGO的手術(shù)-病理分期分為Ⅰ-Ⅱ期10例(C組)，年齡為50～60歲，平均(55.2±3.155)歲;Ⅲ-Ⅳ期10例(D組)，年齡為53～58歲，平均(55.3±1.767)歲。切除正常卵巢組織的病例均為50歲以上、無(wú)生育要求、要求行子宮全切同時(shí)行雙附件切除的多發(fā)子宮肌瘤或子宮肌腺癥患者，無(wú)倫理學(xué)糾紛。

1.2 研究方法 使用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)Rap1 gAP蛋白在卵巢組織的表達(dá)。結(jié)果分為陽(yáng)性、弱陽(yáng)性及陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料使用用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

表1 Rap1 gAP蛋白在卵巢組織中的表達(dá)(例，%)

2.1 Rap1 gAP表達(dá)陽(yáng)性率的比較:①A高于其他三組:A組與B組比較，P=0.178，χ2=1.818;A組與 C組比較，P=0.068，χ2=3.333;A 組與 D 組比較，P=0.019，χ2=5.495*(差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。②B組高于C組和D組:B組與C組比較，P=0.606，χ2=0.207;B 組與 D 組比較，P=0.264，χ2=1.250;③C組高于 D組:C組與 D組比較，P=0.531，χ2=0.351。

2.2 Rap1 gAP表達(dá)弱陽(yáng)性率的比較 A組高于其他三組，P=0.606，χ2=0.207;其余三組弱陽(yáng)性率相同均為20%。

2.3 Rap1 gAP表達(dá)陰性率的比較 ①A組低于其余三組:A組與B組比較，P=0.051，χ2=3.810;A組與C組比較，P=0.019，χ2=5.495*(差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義);A組與D組比較，P=0.006，χ2=7.500*(差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。②B組低于C組和D組:B組與C組比較，P=0.653，χ2=0.202;B組與D組比較，P=0.361，χ2=0.833。③C組低于D組:C組與D組比較，P=0.639，χ2=0.220。

3 討論

卵巢癌是婦女常見(jiàn)的三大惡性腫瘤之一，其中60%～90%是卵巢上皮性癌(ovarian epithelial carcinoma，簡(jiǎn)稱卵巢癌)。早期癥狀不多，而且，由于其位置深居盆腔，缺乏早期癥狀和體征，易受臨床忽視，因而75% ～80% 的患者確診時(shí)已屬晚期，失去手術(shù)根治的機(jī)會(huì)，治愈率不到20%，5年生存率低于30%，死亡率高居?jì)D科惡性腫瘤之首［2］。因此，研究卵巢癌發(fā)生的相關(guān)機(jī)理，對(duì)于該病的防治有著非常重要的作用。

近數(shù)十年來(lái)，經(jīng)全世界的婦科腫瘤學(xué)專家的不懈努力，成功地探索出在腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)的基礎(chǔ)上輔助化療的治療策略，一部分患者雖然已經(jīng)達(dá)臨床緩解，但仍然有70%左右最終還要復(fù)發(fā)，其主要原因就是卵巢上皮細(xì)胞癌手術(shù)及化療后的復(fù)發(fā)率高所致。

卵巢惡性腫瘤轉(zhuǎn)移率和治療后復(fù)發(fā)率高是目前治療卵巢癌的難點(diǎn)之一，其侵襲轉(zhuǎn)移是一個(gè)多階段多步驟的復(fù)雜過(guò)程，涉及到細(xì)胞之間粘附性的改變，細(xì)胞外基質(zhì)的降解，腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸等過(guò)程，侵襲轉(zhuǎn)移的過(guò)程是極其復(fù)雜，但細(xì)胞與細(xì)胞，細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的相互作用致細(xì)胞之間粘附性的改變，卻貫穿于腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移過(guò)程的始終［3］。因此，在腫瘤細(xì)胞發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移的過(guò)程中，參與細(xì)胞間相互作用的細(xì)胞黏附分子是腫瘤細(xì)胞惡性行為的基礎(chǔ)，也是許多致癌因素綜合作用的最終靶位點(diǎn)，也是腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟。

Rap1是Ras家族GTP酶中的一員，在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、黏附中起著重要作用。一系列的研究表明活化形式的Rap1能夠促進(jìn)細(xì)胞間粘附連接的形成，Rapl缺失可以抑制內(nèi)皮細(xì)胞由整合素介導(dǎo)的粘附、遷移功能。人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞Rapl缺失后，酪氨酸激酶p125EAK磷酸化減低。而p125FAK是調(diào)節(jié)細(xì)胞局部的粘附形成、肌動(dòng)蛋白重組、細(xì)胞遷移等功能過(guò)程中重要的效應(yīng)因。Rapl有兩種結(jié)合形式:GDP結(jié)合形式和GTP結(jié)合形式。Rapl和GTP結(jié)合的時(shí)候，處于活化狀態(tài)，而和GDP結(jié)合以后，其活性喪失，Rap1 gAP是小分子G蛋白R(shí)apl的GTP酶激活蛋白，它可以加速Rapl由與GTP結(jié)合的活化形式轉(zhuǎn)變?yōu)榕cGDP結(jié)合的去活化形式的過(guò)程。

腫瘤的發(fā)生發(fā)展是多種基因改變和多階段致癌的復(fù)雜過(guò)程，原癌基因的激活和抑癌基因的失活是其發(fā)生的主要機(jī)制。Rap1 gAP是新近發(fā)現(xiàn)一種腫瘤相關(guān)的抑制基因，通過(guò)調(diào)控Rap1的活性，參與細(xì)胞增殖、分化及整合蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞基質(zhì)粘附和鈣調(diào)蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞間的粘附等生命活動(dòng)的調(diào)節(jié)。它在胰腺癌和口腔癌細(xì)胞中可以抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移和侵潤(rùn)［4］。在胰腺癌中，Rap1 gAP表達(dá)明顯下降，轉(zhuǎn)入Rap1 gAP基因的細(xì)胞的遷移能力降低，侵潤(rùn)能力也明顯降低，而且將轉(zhuǎn)染Rap1 gAP基因的胰腺癌細(xì)胞和未轉(zhuǎn)染Rap1 gAP基因的胰腺癌細(xì)胞分別注入SCID小鼠胰腺尾部，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染Rap1 gAP基因的胰腺癌細(xì)胞形成的腫瘤比未轉(zhuǎn)染Rap1 gAP基因的胰腺癌細(xì)胞形成的腫瘤要小的多。在口腔癌中，Rap1 gAP下調(diào)Rap1的活性、ERK的活性和細(xì)胞增殖;在轉(zhuǎn)染Rap1 gAP基因的SCC細(xì)胞中，cyclinD1、cdk4、cdk6等周期蛋白表達(dá)均下降;并且將轉(zhuǎn)染Rap1 gAP基因的SCC細(xì)胞注入裸鼠體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)其引起的腫瘤比對(duì)照小的多。

Shuk-Mei Ho等人發(fā)現(xiàn)在卵巢癌細(xì)胞中，Rap1 gAP的表達(dá)下調(diào)［5］。然而，Rap1 gAP在卵巢癌患者發(fā)病、轉(zhuǎn)移等方面的研究尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。為研究卵巢癌與 Rap1 gAP蛋白表達(dá)之間的關(guān)系，以期揭示卵巢癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制我們開(kāi)展了此項(xiàng)研究。

本文資料顯示:①正常卵巢組Rap1 gAP蛋白表達(dá)陽(yáng)性率高于良性腫瘤組及兩卵巢癌組，與Ⅲ-Ⅳ期卵巢癌組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;弱陽(yáng)性率也高于其余三組;陰性率低于其余三組;與兩卵巢癌組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②良性腫瘤組該蛋白表達(dá)陽(yáng)性率高于兩卵巢癌組;弱陽(yáng)性率與兩卵巢癌組相同;陰性率低于兩卵巢癌組。③Ⅰ-Ⅱ期卵巢癌組Rap1 gAP蛋白表達(dá)陽(yáng)性率高于Ⅲ-Ⅳ期卵巢癌組。根據(jù)以上研究結(jié)果顯示:卵巢癌患者中Rap1 gAP蛋白表達(dá)的下調(diào)和缺失率高于正常卵巢組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;良性卵巢腫瘤患者的Rap1 gAP蛋白表達(dá)的下調(diào)和缺失率介于正常和卵巢癌患者之間，但由于病例數(shù)較少，尚不能證明其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

［1］Mammalian Rap1 controls telomere function and gene expression through binding to telomeric and extratelomeric sites.Teo H，Ghosh S，Luesch H.Nat Cell Biol，2010，12(8):758-67.Epub 2010 Jul 11．

［2］孔繁斗，等.宮頸癌組織中Rap1 gAP蛋白表達(dá)及其與HPV感染的相關(guān)性.大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，32(2):142-45．

［3］Lymph node involvement in epithelial ovarian cancer:sites and risk factors in a series of 355 patients.Fournier M，Stoeckle E，Guyon F.Int J Gynecol Cancer，2009 Nov;19(8):1307-13．

［4］Nellore A，Pazianak，MaC，et al．oss of Rap1 gAP in Papillary thyroid cancer，J Clin Endocrinol Metab，2009，94(3):1026-32．

［5］Shuk-Mei Ho1，Kin-Mang Lau1，Samuel Chi-ho Mok and Viqar Syed.Profling follicle stimulating hormone-induced gene expression changes in normal and malignant human ovarian surface epithelial cells.Oncogene，2003，22，4243-4256．