HPLC法測(cè)定楊硼洗劑中水楊酸和硼酸的含量

張玉璽 楊姣 劉春鶴 姚曉穎 王麗紅

楊硼洗劑是我院自制的外用制劑，用于治療真菌性皮膚疾患。通過(guò)參閱相關(guān)水楊酸、硼酸在其他劑型中含量測(cè)定的文獻(xiàn)［1-3］，我們建立了用HPLC法測(cè)定楊硼洗劑中水楊酸和硼酸兩種成分含量的方法。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 高效液相色譜儀(Agilent 1100，美國(guó));電子天平(AG204，瑞士)。

1.2 試劑 水楊酸、硼酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所);甲醇為色譜級(jí)，水為重蒸餾水;樣品為醫(yī)院制劑。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱Diamonsil C18(150 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇-水(45∶55);流速:1.3 ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)289nm;進(jìn)樣 20 μL;柱溫:25℃。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取水楊酸對(duì)照品、硼酸對(duì)照品各16 mg，置100 ml棕色量瓶中，加流動(dòng)相適量使溶解，稀釋至刻度，搖勻，得對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 精密吸取楊硼洗劑1 ml，置100 ml棕色量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，以0.45 μm濾膜過(guò)濾即得供試品溶液。

2.4 陰性樣品制備 按處方配比制備缺水楊酸、硼酸的陰性楊硼洗劑，按供試液制備方法制備成陰性樣品溶液。

在此色譜條件下，陰性樣品、對(duì)照品和供試液的色譜圖見(jiàn)圖1。水楊酸和硼酸的理論塔板數(shù)均不低于2500，相鄰兩組分間的分離度大于2，保留時(shí)間分別為3.6 min和5.7 min，陰性樣品無(wú)干擾。

2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0 ml于10 ml棕色量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。在“2.1”項(xiàng)下色譜條件下分別進(jìn)樣20 μL，以對(duì)照品濃度為縱坐標(biāo)(Y)，峰面積為橫坐標(biāo)(X)進(jìn)行線性回歸。水楊酸的回歸方程為Y=12.56X-201.23(r=0.9962);硼酸的回歸方程為Y=19.12X+121.2(r=0.998)。實(shí)驗(yàn)表明水楊酸和硼酸分別在16～128 μg/ml的濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.2”項(xiàng)下水楊酸、硼酸濃度為160 μg/ml的對(duì)照品溶液 20 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)得水楊酸峰面積的RSD為1.21%(n=6)，硼酸峰面積的RSD為0.82%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取“2.3”項(xiàng)下的供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別于制備后 0，2，4，6，8，24 h 測(cè)定峰面積，測(cè)得供試品溶液中水楊酸峰面積的RSD=0.81%(n=6)，硼酸峰面積的RSD=1.41%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)楊硼洗劑樣品6份，按“2.3”項(xiàng)下方法的制備后，在“2.1”項(xiàng)下色譜條件各進(jìn)樣3次測(cè)定，測(cè)得水楊酸和硼酸的RSD分別為0.82%和0.76%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取同一批號(hào)已知濃度的供試品溶液1 ml置于10 ml棕色量瓶中，共9份，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。再精密吸取上述溶液各1 ml置于10 ml棕色量瓶中，分別精密加入水楊酸、硼酸濃度為160 μg/ml的對(duì)照品溶液 1.0，1.0，2.0，2.0，3.0，3.0 ml，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，并按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.1 0 樣品含量測(cè)定 取3批楊硼洗劑，按“2.3”項(xiàng)下方法制備，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件各進(jìn)樣20 μL，測(cè)定色譜峰面積，計(jì)算兩種成分含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

3.1 從紫外光譜可見(jiàn)水楊酸和硼酸在289nm波長(zhǎng)處均有較大的吸收，故選擇此波長(zhǎng)作為含量測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)以甲醇-水(45∶55)作為流動(dòng)相時(shí)，兩種組分離效果好，兩峰的分離度和保留時(shí)間也較合理，因此選用此流動(dòng)相配比做為測(cè)定用流動(dòng)相。

3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用本法同時(shí)測(cè)定楊硼洗劑中的水楊酸和硼酸的含量，方法簡(jiǎn)單、快速，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，分離效果好。陰性對(duì)照表明，在該色譜條件下，其他輔料對(duì)兩種主成分的測(cè)定無(wú)干擾，可用本法作為該制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

［1］李季靜，楊小孟，胡鳳婷.RP-HPLC法測(cè)定氯霉素水楊酸酊中氯霉素和水楊酸的含量．首都醫(yī)藥，2009，15(5):62．

［2］李長(zhǎng)福.HPLC法測(cè)定復(fù)方水楊酸擦劑中水楊酸和苯甲酸的含量.中國(guó)傷殘醫(yī)學(xué)，2011，3(19):37．

［3］冀宛麗，趙家太.HPLC法同時(shí)測(cè)定阿司匹林咀嚼片中阿司匹林和水楊酸的含量．生命科學(xué)儀器，2007，10(5):39．