宮頸人乳頭瘤病毒感染快速檢測(cè)方法及其臨床意義

顏 敏 (湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北 十堰 442000)

宮頸病變患者生殖道內(nèi)人類乳頭狀病毒(HPV)檢出率很高〔1〕。HPV是一類具有較強(qiáng)傳播能力的病毒，可以通過性接觸，還可以垂直傳播。HPV高危型基因的感染若在人體內(nèi)較長(zhǎng)時(shí)間存在會(huì)引發(fā)宮頸癌變，在患者身體狀況不佳以及生理周期〔2〕、妊娠等免疫力下降時(shí)生殖器HPV感染概率會(huì)增加，若妊娠婦女感染HPV還會(huì)通過母體傳播給嬰兒引起先天性尖銳濕疣或乳頭瘤病等相關(guān)疾病〔3〕，故對(duì)于HPV的檢測(cè)至關(guān)重要。本文通過對(duì)十堰市體檢婦女進(jìn)行宮頸檢查及HPV篩查，分析HPV感染與宮頸病變的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇2007年5月～2011年9月十堰市各大醫(yī)院婦科門診就診的患者2 000例作為研究對(duì)象。

1.2 儀器及試劑 采用美國(guó)ABI公司生產(chǎn)的全自動(dòng)熒光PCR儀器ABI 7000進(jìn)行檢測(cè)。DNA試劑盒均由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司生產(chǎn)。采用HPV分型DNA雜交技術(shù)。

1.3 HPV檢測(cè)方法〔4～6〕①樣本處理：將標(biāo)本置于生理鹽水轉(zhuǎn)移至1.5 ml離心管離心5 min，取沉淀物加50 μl DNA提取物，100℃加熱10 min，離心5 min取上清液備用。②PCR基因擴(kuò)增：PCR 反應(yīng)體積 25 μl，上清液 5 μl，50℃ 下 15 min，95℃10 min后循環(huán)35次，延伸到5 min，72℃進(jìn)行PCR反應(yīng)。③嚴(yán)格按照試劑盒上操作說明進(jìn)行PCR產(chǎn)物的雜交及顯色。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以s表示，采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料采用率表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn);等級(jí)計(jì)量資料采用非參數(shù)檢驗(yàn)(Z檢驗(yàn))。

2 結(jié)果

2.1 病毒檢出率 2 000例受檢婦女中發(fā)生HPV感染663例，其陽性率為33.2%。感染者中宮頸光滑以及輕度糜爛的患者有132例(19.9%)，中重度糜爛531例(80.1%)。

2.2 不同危險(xiǎn)程度基因型宮頸病變程度分析 PCR方法檢出包括 HPV16，HPV18等在內(nèi)的 13類高危基因型 562例(84.8%);包括 HPV11等在內(nèi)的4種低?；蛐?1例(12.2%);另外，還有包括HPVCP8304等在內(nèi)的3種常見基因亞型20例(3.0%)。見表1。

表1 不同危險(xiǎn)程度基因型宮頸病變程度(%)

2.3 HPV感染與年齡的相關(guān)性 HPV感染發(fā)病高峰在26～33歲，且此年齡段的HPV檢出率與其他組比較具有明顯差異性(χ2=132.525，P=0.001)，50歲以上感染率最低。見表2。

表2 不同年齡段HPV感染情況(n)

3 討論

宮頸癌近年來高發(fā)，在女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的首位〔7〕。但宮頸癌前病變會(huì)經(jīng)歷較長(zhǎng)時(shí)間，所以它的檢出較難，通常都是癌癥中晚期才發(fā)現(xiàn)，大大降低了患者的5年有效生存率〔8〕。近年來通過大量研究表明宮頸癌的發(fā)生與HPV的感染具有相關(guān)性〔9〕，且認(rèn)為通過檢測(cè)HPV可以增加宮頸癌變的檢出率。HPV是一種可以在人及動(dòng)物體內(nèi)廣泛存在的環(huán)狀DNA病毒，是一種可以發(fā)生特異性感染的小型病毒，可以特異性地感染人類皮膚、黏膜，并引起良性腫瘤以及生殖器官皮膚黏膜組織的病變。通常尖銳濕疣及其他黏膜上的乳頭狀瘤皆是由HPV引發(fā)的。HPV的直徑約50～55 mm，主要依靠宿主細(xì)胞進(jìn)行繁殖。在100多種亞型中，發(fā)現(xiàn)能從感染的生殖道組織中分離的基因型有30種之多〔10〕。

HPV的感染與年齡具有相關(guān)性，魏穎穎等〔11〕研究顯示HPV的感染在26～28歲是個(gè)高峰，而后隨圍絕經(jīng)的出現(xiàn)成為另一個(gè)高峰。本研究認(rèn)為對(duì)30歲以上婦女做HPV的檢查對(duì)宮頸癌早期篩查具有更重要的意義。HPV的發(fā)生與感染與早年性生活次數(shù)、性伴侶、性行為等均具有密切關(guān)系。所以針對(duì)與20～50歲婦女進(jìn)行HPV感染檢查，可以更及時(shí)地篩查出宮頸病變，減少宮頸癌變的可能，并及時(shí)診治。本研究說明宮頸癌的發(fā)生與基因型有關(guān)，其中HPV-16亞型趨勢(shì)最為顯著。隨感染率上升，宮頸病變級(jí)別也在顯著升高。故在臨床中一定要注意高危型HPV基因的存在，它的持續(xù)感染可能是導(dǎo)致宮頸癌的直接因素。

另外，HPV的感染情況在不同地區(qū)、不同受檢人群中具有顯著差異，且目前亞太地區(qū)常見檢出基因型為HPV-16。最新報(bào)道發(fā)現(xiàn)HPV-16發(fā)生的概率為57.5%，在北美與南非中的發(fā)病率為47.7% ～69.5%〔12〕。所以通過在各地開展HPV流行病學(xué)調(diào)查可以控制宮頸癌的發(fā)病率。

此外，還需要注意HPV的多重感染也是增大患者宮頸癌患病危險(xiǎn)的重要因素。陳志芳等〔13〕認(rèn)為，HPV-16基因單純感染和多重相關(guān)感染具有不同的發(fā)病危險(xiǎn)，HPV的多重感染具有加重宮頸癌變的作用。但通常以HPV-16與HPV-18雙重感染占據(jù)主導(dǎo)。目前雖然無明顯證據(jù)證明其交叉作用對(duì)疾病發(fā)生的作用〔14〕，但在臨床診療過程中不可忽視其對(duì)于HPV感染的促進(jìn)作用。

綜上所述，十堰市HPV感染與宮頸病變嚴(yán)重程度呈正比，高危亞型呈較為明顯趨勢(shì)，所以臨床可以通過檢測(cè)HPV感染病變程度及時(shí)發(fā)現(xiàn)宮頸病變，做到早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療。

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