黔產(chǎn)鉤藤藥材不同采收期及不同加工方法有效成分含量對(duì)比研究

王克英郭思妤祝晶姜洪旭歐恒熙蘭才武

1、貴州省食品藥品檢驗(yàn)所，貴州貴陽(yáng)550004;2、貴州省職業(yè)技術(shù)學(xué)院，貴州金陽(yáng)550081;3、貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院碩士研究生，貴州貴陽(yáng)550004;4、貴州省昌昊發(fā)展有限公司，貴州凱里556000

黔產(chǎn)鉤藤藥材不同采收期及不同加工方法有效成分含量對(duì)比研究

王克英1郭思妤2祝晶3姜洪旭3歐恒熙3蘭才武4

1、貴州省食品藥品檢驗(yàn)所，貴州貴陽(yáng)550004;2、貴州省職業(yè)技術(shù)學(xué)院，貴州金陽(yáng)550081;3、貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院碩士研究生，貴州貴陽(yáng)550004;4、貴州省昌昊發(fā)展有限公司，貴州凱里556000

目的:測(cè)定不同采收期及不同加工方法黔產(chǎn)鉤藤藥材中鉤藤堿和異鉤藤堿的含量，并考察鉤藤堿和異鉤藤堿在不同采收期的含量變化。方法:采用RP－HPLC法，KromosilC18(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱;流動(dòng)相以甲醇－0．2%氨水溶液(65:35)，流速:1.0mL/min，柱溫35℃，進(jìn)樣器溫度5℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為245nm，結(jié)果:不同采收期鉤藤藥材中鉤藤堿和異鉤藤堿含量有顯著變化。以10月～1月份，采集的樣品中鉤藤堿和異鉤藤堿含量較高;不同加工方法鉤藤堿和異鉤藤堿含量也有所不同。結(jié)論:1．以10月～1月份采集的樣品含量較高，符合中國(guó)藥典規(guī)定鉤藤藥材在秋、冬二季采收。2．陰干和曬干的藥材含量較高。為黔產(chǎn)鉤藤藥材提供了最佳加工方法。

黔產(chǎn)鉤藤;HPLC;不同采收期;不同加工方法;含量測(cè)定

鉤藤(Rhynchophylla)作為我國(guó)的傳統(tǒng)中藥，其帶鉤莖枝應(yīng)用歷史悠久，主要分布于我國(guó)南方地區(qū)，貴州道地藥材鉤藤也為同科同屬植物，作為常用的中藥材之一，具有清熱平肝，熄風(fēng)定驚的作用。主要用于頭痛眩暈、感冒夾驚、驚癇抽搐、妊娠子癇，以及高血壓等癥［1］?，F(xiàn)代研究表明，鉤藤的主要有效成分為鉤藤總生物堿(Rhynchophylla total alkaloids，RTA)，其中主要是鉤藤堿(rhynchophylline)和異鉤藤堿(isorhynchophylline)，分別占總堿的28.9%和14.7%，也是鉤藤中含量最大的生物堿成分［7］。具有降血壓、抗心律失常以及抗血小板聚集和抗血栓形成的作用［3－5］。目前，隨著醫(yī)藥科技的發(fā)展，由于鉤藤的深入開發(fā)研究，鉤藤的功能效用在不斷擴(kuò)大，己越來(lái)越受到人們關(guān)注。目前評(píng)價(jià)鉤藤質(zhì)量?jī)?yōu)劣的標(biāo)準(zhǔn)，多以鉤藤堿和異鉤藤堿的含量為指標(biāo)。由于鉤騰藥材使用不斷擴(kuò)大，需求量不斷上升，藥工們可以隨時(shí)采收藥材上市。為了保證藥材質(zhì)量，我們做了不同采收期及不同加工方法的鉤藤藥材質(zhì)量對(duì)比研究。本實(shí)驗(yàn)采取二種藥效成分同時(shí)考察的方法，對(duì)不同生長(zhǎng)季節(jié)及不同加工方法的鉤藤進(jìn)行評(píng)估，為我省鉤藤藥材的采收及加工炮制方法提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀;美國(guó)Waters2695－2996高效液相色譜儀及二極管陣列檢測(cè)器;Empowrer色譜數(shù)據(jù)工作站;KQ－500D A型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);實(shí)驗(yàn)所使用試劑試藥均為分析純。鉤藤堿(純度為98%)和異鉤藤堿(純度為98%)對(duì)照品購(gòu)自上海原葉生物科技有限公司(批號(hào)2010923－2011)。所用鉤藤藥材均由貴州省昌昊中藥發(fā)展有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱:十八烷基鍵和硅膠為填沖劑，KromosilC18柱(4.6 mnl×250 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇－0.2%氨水溶液(65:35);流速:1.0mL·min－1;柱溫:35℃;進(jìn)樣器溫度:5℃;鉤藤堿及異鉤藤堿的檢測(cè)波長(zhǎng)均為245nm;進(jìn)樣量:10μL;理論塔板數(shù)按鉤藤堿和異鉤藤堿峰面積計(jì)算應(yīng)不底于3000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備精密稱取鉤藤堿和異鉤藤堿對(duì)照品加甲醇制成每1mL含60μg和每1mL含80μg的混合溶液，即得。

2.3 通過(guò)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究，鉤藤堿、異鉤藤堿的線性關(guān)系考察、精密度實(shí)驗(yàn)、重復(fù)性實(shí)驗(yàn)、穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)、加樣回收率實(shí)驗(yàn)均符合藥典的要求。見(jiàn)圖1～2。

圖1 鉤藤堿和異鉤藤堿HPLC色譜圖

圖2 黔產(chǎn)鉤藤藥材HPLC色譜圖

2.4 樣品測(cè)定精密取不同采收期及不同加工方法樣品粉末(過(guò)三號(hào)篩)約0.3g，精密稱定，加入氯仿:甲醇(5:1)的混合溶劑20mL，冰箱5℃放置過(guò)夜，加0.5mL氨水，低溫超聲40分鐘，過(guò)濾，用氯仿:甲醇(5:1)的混合溶劑洗滌容器及濾渣，濾液置蒸發(fā)皿中，在65℃水浴上揮干，殘?jiān)蛹状级ㄈ葜?mL容量瓶中，搖勻，微孔濾膜過(guò)濾，既得。分別吸取以上供試品溶液與鉤藤堿和異鉤藤堿混合對(duì)照品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀中，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算樣品中鉤藤堿和異鉤藤堿的含量之和。結(jié)果見(jiàn)表1及表2，所有測(cè)定結(jié)果均以干燥品計(jì)。

表1 不同采收期鉤藤堿和異鉤藤堿的含量(μg/g)(n=3)

表2 不同加工方法鉤藤堿和異鉤藤堿的含量(μg/g)(n=3)

烘干(50－60℃)余慶57050620曬干69868766陰干75030780鮮品81020830烘干(50－60℃)凱里45030485曬干952611010陰干949721021鮮品985691054烘干(50－60℃)錦屏25022292曬干34014350陰干37040410鮮品32020340烘干(50－60℃)荔波56921590曬干61031640陰干59844642鮮品58946635

3 討論

3.1 本實(shí)驗(yàn)以春、夏、秋、冬月份鉤藤藥材為材料，對(duì)不同生長(zhǎng)季節(jié)鉤藤藥材中的2種有效成分(鉤藤堿和異鉤藤堿)含量進(jìn)行了測(cè)定。通過(guò)各不同生長(zhǎng)期的有效成分含量對(duì)比研究，可確定鉤藤藥材最佳采收期。從表3中可以看出不同采收期鉤藤藥材中鉤藤堿和異鉤藤堿含量有顯著變化。從每一個(gè)產(chǎn)地不同采收期鉤藤藥材來(lái)看，基本上都是以10～1月份采集的樣品中鉤藤堿和異鉤藤堿含量較高。可作為最佳采收期，符合中國(guó)藥典規(guī)定鉤藤藥材在秋、冬二季采收規(guī)定。而以3～7月份采集的樣品中鉤藤堿和異鉤藤堿含量較低。通過(guò)本課題的研究證明，為確定鉤藤藥材最佳采期收期提供了科學(xué)的依據(jù)。

3.2 我們將劍河、凱里、錦屏、荔波、余慶等產(chǎn)地的樣品，通過(guò)各種不同的加工方法，對(duì)鉤藤藥材有效成分含量進(jìn)行了對(duì)比研究?？梢钥闯龈鞯氐臉悠分秀^藤堿和異鉤藤堿含量結(jié)果從大到小，為鮮品＞陰干＞曬干＞烘干。通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，鉤藤藥材在加工炮制時(shí)，加熱或溫度過(guò)高致有效成分鉤藤堿和異鉤藤堿分解，使含量下降，從而導(dǎo)致藥效降低。因此，為了鉤藤藥材采收后，在加工炮制時(shí)藥材質(zhì)量不受到影響，采用合理的加工炮制方法是必要的。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典［S］．2010版一部．北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010:240．

［2］郭星等．HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地鉤藤中異鉤藤堿和鉤藤堿的含量［J］．河南中醫(yī)，2010，30(1)．

［3］仲崇林等．反相高效液相色譜法測(cè)定植物鉤藤中鉤藤堿含量［J］．應(yīng)用化學(xué)，2008，23(9)．

［4］王英鋒等．高效液相色譜測(cè)定鉤藤中鉤藤堿異鉤藤堿含量［J］．藥物分析雜志，1999，19(1):56－57．

［5］梁勇等．鉤藤中總生物堿的提取分離研究［J］．中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2006，6(1)．

［6］黃卓謙等．鉤藤煎煮過(guò)程中化學(xué)成分變化的研究［J］．西北大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2008，38(5)．

［7］王盟等．鉤藤總生物堿的研究進(jìn)展［J］．實(shí)用醫(yī)藥雜志，2008，25(3)．

R931.4

A

1007－8517(2012)13－0027－02

貴州省中藥現(xiàn)代化科技產(chǎn)業(yè)研究開發(fā)課題，合同編號(hào):黔產(chǎn)合中藥字【2010】5039號(hào)。

2012.05.02)