靜脈注射sCD14對嚴(yán)重燙傷內(nèi)毒素血癥小鼠血清C-反應(yīng)蛋白和降鈣素原以及血糖水平的影響

萬 玲，胡曉潞，張 萍，王 湞，王占科

(解放軍第九四醫(yī)院檢驗科，南京軍區(qū)檢驗醫(yī)學(xué)?？浦行?，江西 南昌 330002)

內(nèi)毒素是通過其細(xì)胞膜上的受提發(fā)揮作用，有文獻(xiàn)報告，細(xì)胞膜內(nèi)毒素受體為膜白細(xì)胞分化抗原14(mCD14)[1]。嚴(yán)重創(chuàng)傷患者血液LPS水平升高與感染等有關(guān)，靶組織細(xì)胞mCD14與血液中內(nèi)毒素結(jié)合，啟動內(nèi)毒素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，導(dǎo)致機(jī)體全身炎癥反應(yīng)綜合征 (SIRS)和多器官功能不全綜合征(MODS)[2]?？扇苄园准?xì)胞分化抗原14(sCD14)游離存在于血液和各種體液中，可通過競爭膜受體與LPS結(jié)合，對LPS病理效應(yīng)起到抑制作用[3]，sCD14對嚴(yán)重創(chuàng)傷感染機(jī)體C-反應(yīng)蛋白和降鈣素原以及血糖水平的影響，國內(nèi)外報道不多。本文以嚴(yán)重燙傷內(nèi)毒素血癥小鼠為創(chuàng)傷感染動物模型，觀察靜脈注射sCD14對嚴(yán)重創(chuàng)傷感染機(jī)體C-反應(yīng)蛋白和降鈣素原以及血糖水平的影響，旨在證明sCD14可作為拮抗炎癥反應(yīng)的有效藥物并改善糖代謝障礙提供實驗依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 燙傷模型制作與分組 昆明種小鼠 (南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供,合格證號JXA2000176)18～20g，雌雄不拘，自由喂養(yǎng)，按30%體表面積背部剪毛，89oC熱水浸泡9s，制作III度燙傷模型(燙傷皮膚病理切片見圖1)，隨機(jī)分為sCD14治療組(n=20)、及sCD14治療對照組(n=20,除不注射藥物外，其他與藥物治療組同)；另設(shè)正常對照組(n=20,不進(jìn)行燙傷，其余同燙傷模型組)。

圖1 嚴(yán)重燙傷小鼠Ⅲ度燙傷皮膚病理切片(HE染色，×400)

1.2 材料來源 基因工程產(chǎn)品sCD14從深圳晶美生物工程有限公司購買。血糖和C-反應(yīng)蛋白測定試劑盒從寧波美康生物診斷有限公司購買；降鈣素原測定試劑盒從羅氏診斷公司購買。

1.3 治療方法 基因工程產(chǎn)品sCD14用生理鹽水稀釋，參考文獻(xiàn)[4]，每天按5mg/kg體重，分2次尾靜脈注射，連續(xù)3d。治療對照組和正常對照組只注射生理鹽水，其它同治療組。各組小鼠均在治療3d后，第4d斷頭處死，肝素抗凝，收集血液標(biāo)本，4 000r/min離心，分離血漿。血糖測定小鼠，需要空腹8h以上。

1.4 測定方法 血清C-反應(yīng)蛋白采用免疫比濁法，血糖采用葡萄糖氧化酶法，通過AU2700全自動生化分析儀測定；降鈣素原采用磁珠電化學(xué)發(fā)光法，通過全自動羅氏電化學(xué)發(fā)光測定儀測定。

2 結(jié)果

2.1 血清C-反應(yīng)蛋白和降鈣素原以及血糖水平變化見表1。

表1 各組小鼠血清C-反應(yīng)蛋白和降鈣素原以及血糖水平變化

由表1結(jié)果可見，sCD14治療組小鼠血清C-反應(yīng)蛋白和降鈣素原以及血糖水平均明顯低于治療對照組(P<0.01),但均明顯高于正常對照組(P<0.01)。

3 討論

sCD14為體內(nèi)天然存在的單鏈多肽分子，其N端可與LPS結(jié)合，但由于sCD14沒有在細(xì)胞膜上，也缺少膜CD14的跨膜區(qū)和膜內(nèi)區(qū)，因此，屬于無效結(jié)合。在生理情況下，正常人和動物血清中可檢測到sCD14水平[5]。在嚴(yán)重感染情況下，血清sCD14水平明顯升高[6]，sCD14在LPS高濃度條件下，是LPS負(fù)反饋效應(yīng)的表現(xiàn)，可拮抗LPS病理作用，sCD14升高但仍相對LPS升高不足，導(dǎo)致sCD14和LPS比值下降，可能促進(jìn)創(chuàng)傷MODS發(fā)生與發(fā)展[7]。

CRP(C反應(yīng)蛋白)是一種能與肺炎球菌C多糖體反應(yīng)形成復(fù)合物的急性時相反應(yīng)蛋白。CRP可作為炎癥反應(yīng)的非特異性標(biāo)志物，并應(yīng)用于臨床診斷，血清CRP可作為評價感染后炎癥反應(yīng)嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)[8]。PCT是降鈣素前體，屬于一種無激素活性的糖蛋白，由116個氨基酸組成。在生理情況下，PCT通過甲狀腺的C細(xì)胞產(chǎn)生并裂解出降鈣素；嚴(yán)重感染時血PCT水平明顯增高，此時PCT主要由甲狀腺外組織產(chǎn)生[9]。嚴(yán)重全身性細(xì)菌、真菌、寄生蟲、急性瘧疾感染，血漿PCT濃度異常升高，而且升高程度與感染炎癥嚴(yán)重程度及預(yù)后有關(guān)。血糖水平是反映糖代謝障礙程度的重要指標(biāo)，感染導(dǎo)致的過度炎癥反應(yīng)可誘發(fā)胰島素抵抗和胰島B細(xì)胞功能障礙，造成高血糖反應(yīng)[3]。

我們結(jié)果表明，治療對照組血清C-反應(yīng)蛋白和降鈣素原以及血糖水平明顯高于正常對照組，提示嚴(yán)重內(nèi)毒素血癥燙傷小鼠存在過度炎癥反應(yīng)和糖代謝障礙。我們結(jié)果還表明，sCD14可有效降低嚴(yán)重創(chuàng)傷機(jī)體C-反應(yīng)蛋白和降鈣素原以及血糖水平，提示sCD14具有拮抗LPS病理作用發(fā)揮抗炎效果。此外，我們結(jié)果表明，sCD14治療組血清C-反應(yīng)蛋白和降鈣素原以及血糖水平雖然相對治療對照組下降，但仍高于正常對照組，提示sCD14不能完全拮抗LPS的病理作用，也可能是嚴(yán)重感染機(jī)體內(nèi)毒素血癥不是造成C-反應(yīng)蛋白和降鈣素原以及血糖水平升高的唯一原因。

sCD14通過與LPS無效結(jié)合，在高濃度LPS條件下，拮抗LPS的病理作用，也有文獻(xiàn)報道，sCD14可延長LPS在體內(nèi)的半衰期，促進(jìn)LPS的病理作用[6]。在嚴(yán)重創(chuàng)傷感染、SIRS以及MODS條件下，LPS過度升高，sCD14作為防治創(chuàng)傷MODS的有效藥物，已引起國內(nèi)外高度重視[4]，我們結(jié)果支持sCD14可作為防治嚴(yán)重創(chuàng)傷MODS有效藥物的觀點。

[1]Stelter F.Structure and function relationships of CD14[J].Chem Immunol,2000,74(1):25-41.

[2]吳榮謙,宋旭華,徐迎新,等.促炎癥和抗炎癥細(xì)胞因子基因表達(dá)與膿毒癥小鼠肝損傷的關(guān)系 [J].中華普通外科雜志,2001,16(2):301-105.

[3]王占科.可溶性CD14和可溶性TNFR-p55與創(chuàng)傷MODS診斷和干預(yù)[J].現(xiàn)代診斷與治療，2008,19(5):257.

[4]于永洲,王占科.可溶性白細(xì)胞分化抗原14和可溶性腫瘤壞死因子受體-p55實驗治療嚴(yán)重燙傷小鼠實驗研究 [J].中國藥房,2007,18(34):2653-2655.

[5]寧雙飛.可溶性細(xì)胞因子受體及可溶性粘附分子[J].國外醫(yī)學(xué)免疫學(xué)分冊，2003,26(2):57-59.

[6]Gordon L,Carrillo EH,Davis E,et al.Early elevation of soluble CD14 may help identify trauma patients at high risk for infection[J].JTrauma,2001,50(2):810.

[7]王占科，馮青青，祝仲珍，等.創(chuàng)傷失血性多器官功能不全綜合征患者血漿可溶性白細(xì)胞分化抗原14相對內(nèi)毒素變化及其臨床價值[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2004;27(4):237-238.

[8]羅向軍,郭彩宏,李芳芳,等.COPD病人急性發(fā)作期C反應(yīng)蛋白與纖維蛋白原變化[J].齊魯醫(yī)學(xué)雜志,2008,23(6):526-529.

[9]邱錫榮，張為民，許志堅,等.血清降鈣素原在感染性疾病診斷中的應(yīng)用價值[J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué)，2011,29(5):543-544,566.