• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    成年斑胸草雀弓狀皮質(zhì)櫟核投射神經(jīng)元電生理特性的性別差異

    2012-11-14 08:39:11范博強侯國強李東風(fēng)
    關(guān)鍵詞:鳴禽去極化核團

    范博強,侯國強,潘 璇,李東風(fēng)

    (華南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,廣東廣州 510631)

    成年斑胸草雀弓狀皮質(zhì)櫟核投射神經(jīng)元電生理特性的性別差異

    范博強,侯國強,潘 璇,李東風(fēng)*

    (華南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,廣東廣州 510631)

    利用離體腦片膜片鉗技術(shù)檢測RA投射神經(jīng)元電生理活動的主動和被動特性,對其性別差異進行探討,發(fā)現(xiàn)鳴禽RA投射神經(jīng)元電生理特性在發(fā)放頻率和誘發(fā)動作電位幅值方面存在明顯的性別差異.

    成年斑胸草雀; 弓狀皮質(zhì)櫟核投射神經(jīng)元; 電生理特性; 性別差異

    鳴禽是研究學(xué)習(xí)記憶神經(jīng)機制的理想動物模型.鳴禽的鳴唱學(xué)習(xí)依賴于腦內(nèi)的一組離散的核團以及它們之間的連接通路,其被稱之為鳴唱控制系統(tǒng)[1].鳴唱控制系統(tǒng)由發(fā)聲運動通路和前端腦學(xué)習(xí)通路組成.其中發(fā)聲運動通路由高級發(fā)聲中樞(high vocal centre, HVC)直接發(fā)出投射神經(jīng)元與前運動核團弓狀皮質(zhì)櫟核(robust nucleus of the arcopallium, RA)形成突觸連接.發(fā)聲運動通路的主要功能在于控制鳴曲的發(fā)出,直接參與鳴禽的發(fā)聲運動行為.而前端腦通路也是由HVC發(fā)出,最后通過新紋狀體前部巨細胞核外側(cè)部(lateral magnocellular nucleus of the anterior neostriatum, LMAN)將前端腦通路中的信息傳遞給RA.其主要功能是鳴曲的習(xí)得及對鳴唱可塑性的調(diào)節(jié)[2].RA作為運動指令信息輸出核團,其核團內(nèi)的生理活動變化成為2條通路影響鳴唱的最直接作用靶點.因此,RA核團在鳴唱系統(tǒng)中占有重要的地位.RA核團主要由2類神經(jīng)元組成:投射神經(jīng)元和中間神經(jīng)元,其電生理特性具有明顯的差異[3].

    鳴禽的鳴唱有著明顯的性別差異.對鳴禽性別差異的研究多是從激素水平對鳴禽相關(guān)鳴唱核團進行研究,很少有從單個神經(jīng)元水平比較鳴禽性別差異的報道[4-5].鳴禽鳴唱系統(tǒng)在單個神經(jīng)元水平上是否存在與核團水平類似的性別差異?單個神經(jīng)元的電生理特性是否存在性別差異?這些需要進一步深入研究.本研究利用離體腦片膜片鉗技術(shù),對不同性別的斑胸草雀中RA核團投射神經(jīng)元電生理特性進行比較,觀察其在電生理特性方面的差異.

    1 材料與方法

    1.1實驗動物

    健康的成年雌性和雄性斑胸草雀(Taeniopygiaguttata)各10只,體質(zhì)量10~15 g,由華南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院動物房提供.

    1.2試劑

    切片液(mmol/L)為:Sucrose 248,KCl 5,NaHCO328,Glucose 10,MgSO4·7H2O 1.3,NaH2PO4·H2O 1.26;人工腦脊液(mmol/L)為:NaCl 125,NaHCO325,NaH2PO4·H2O 1.27,KCl 2.5,MgSO4·7H2O 1.2,CaCl22.0,Glucose 25;用蔗糖調(diào)節(jié)滲透壓至350 mOsm.電極內(nèi)液(mmol/L)為:KMeSO4120,NaCl 5,HEPES 10,EGTA 2,Mg-ATP 2,Na-GTP 0.3,pH 7.2,滲透壓330 mOsm.

    1.3主要儀器

    微電極拉制器(P-97, Sutter Instrument, USA)、振動切片機(NVSIM1, WPI, USA)、正置顯微鏡(OLYMPUS, DP30BW, JAPAN)、微操縱器(MP-285, Sutter Instrument)、膜片鉗放大器(MultiClamp 700B, Axon Instrument)、數(shù)/模轉(zhuǎn)換器(DIGIDATA 1322A, Axon Instrument)、pClamp9.2軟件(Axon Instruments)等.

    1.4腦片的制備

    麻醉后快速斷頭,迅速取腦置于已預(yù)通15 min 95%O2+5%CO2混合氣(體積分數(shù),下同)的冰水混合的切片液中冷卻30 s~1 min,然后用振動切片機切取含有RA核團的腦片,約250~300 μm,轉(zhuǎn)移到37 ℃的孵育槽,通以95%O2+5%CO2混合氣,孵育30 min,然后在35 ℃人工腦脊液中孵育1 h,之后保持室溫孵育.在此條件下腦片可存活8~10 h,通氣時注意防止腦片隨氣泡翻動.

    1.5膜片鉗全細胞式記錄

    1.5.1 微電極的制備 硬質(zhì)玻璃毛坯管(Sutter Instrument)拉制微電極.在全細胞記錄中應(yīng)用的記錄電極尖端的阻抗一般為3~5 MΩ.

    1.5.2 膜片鉗記錄 取孵育好的腦片放到記錄槽內(nèi)并將腦片輕輕壓住,在顯微鏡下尋找合適的RA投射神經(jīng)元[6].先封接形成細胞吸附式,然后在電壓鉗模式下破膜為全細胞式.分別在2種模式下記錄RA投射神經(jīng)元的自發(fā)與誘發(fā)電位.每個細胞記錄時間大約為15~20 min.

    1.6統(tǒng)計學(xué)分析

    實驗記錄到的信號輸入膜片鉗放大器,并由數(shù)模轉(zhuǎn)換器最終轉(zhuǎn)入相連的計算機,記錄信號的監(jiān)測、存儲及分析處理以及通過記錄電極給予細胞的指令電壓均由pClamp 9.2軟件完成.所得實驗數(shù)據(jù)采用t檢驗由Origin 8.0進行統(tǒng)計分析并作圖.數(shù)據(jù)用平均值±標準差(Mean±SD)表示.

    2 結(jié)果與分析

    2.1RA核團及其神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)觀察

    在低倍顯微鏡下(5×),雄鳥RA核團呈卵圓形,輪廓清晰,與周圍組織界限明顯.雌鳥RA核團外形與雄鳥類似,輪廓界限較雄鳥略模糊.在高倍鏡下(40×),可明顯觀察到密集交錯的神經(jīng)纖維和微細血管.

    2.2吸附式記錄模式下RA核團單個投射神經(jīng)元自發(fā)放頻率

    在吸附式膜片鉗記錄模式下比較了RA核團投

    射神經(jīng)元自發(fā)放頻率的性別差異(圖1).雌鳥RA投射神經(jīng)元的平均發(fā)放頻率為(6.53±1.53)Hz(n=20),雄鳥RA投射神經(jīng)元的平均發(fā)放頻率為(11.63±0.32)Hz(n=27),雄鳥RA投射神經(jīng)元自發(fā)放頻率明顯大于雌鳥(P<0.01).

    圖1 成年雌雄斑胸草雀RA投射神經(jīng)元自發(fā)放頻率

    Figure 1 The spontaneous firing rates of RA projection neurons in female and male zebra finches

    2.3向RA投射神經(jīng)元注入去極化電流引起動作電位發(fā)放頻率的變化

    在全細胞電流鉗模式下,以神經(jīng)元的靜息電位為基礎(chǔ)給予去極化階躍電流刺激,根據(jù)去極化電流誘導(dǎo)的穩(wěn)定反應(yīng),繪制隨注入電流增加而誘發(fā)動作電位頻率增加的F-I曲線圖.比較雌鳥和雄鳥F-I曲線斜率,可以看出給予不同的去極化電流刺激,隨著注入電流的增加,雄鳥RA投射神經(jīng)元所誘發(fā)出動作電位的頻率均明顯高于雌鳥(圖2).圖2A和2C中雌鳥F-I曲線的斜率為(63.26±3.41)Hz/nA,雄鳥F-I曲線的斜率為(117.1± 1.04)Hz/nA.雄鳥F-I曲線的斜率顯著大于雌鳥(P<0.05).圖2B和2D中雌鳥F-I曲線的斜率為(75.95±7.16)Hz/nA,雄鳥F-I曲線的斜率為(122.52±5.91)Hz/nA.雄鳥F-I曲線的斜率顯著大于雌鳥(P<0.05).

    2.4向RA投射神經(jīng)元注入去極化電流激發(fā)動作電位幅值的變化

    對RA投射神經(jīng)元分別注入不同強度的去極化電流,比較隨去極化電流注入誘發(fā)RA投射神經(jīng)元動作電位幅值的變化.對于不同強度的去極化電流,雄鳥RA神經(jīng)元動作電位的幅值保持相對恒定,而雌鳥RA神經(jīng)元對于強度過大的電流其動作電位的幅值會明顯降低.而在不同強度去極化電流注入的情況下,雌鳥RA神經(jīng)元所誘發(fā)動作電位的幅值均要顯著大于雄鳥(圖3).

    注:(A),(C):給予RA神經(jīng)元去極化電流刺激,起始強度0 pA,脈沖時間1 600 ms,躍階為200 pA,,連續(xù)4個刺激;(B),(D):給予RA神經(jīng)元去極化電流刺激,起始強度0 pA,脈沖時間1 000 ms,躍階為100 pA,連續(xù)9個刺激

    圖2 注入電流時成年雌雄斑胸草雀RA投射神經(jīng)元發(fā)放頻率

    Figure 2 The firing frequency-injected current relationship of RA projection neurons between female and male zebra finches

    注:(A),(C):給予RA神經(jīng)元去極化電流刺激,起始強度0 pA,脈沖時間1 600 ms,躍階為200 pA,連續(xù)4個刺激;(B),(D):給予RA神經(jīng)元去極化電流刺激,起始強度0 pA,脈沖時間1 000 ms,躍階為100 pA,連續(xù)9個刺激.

    圖3 注入電流時雌雄成年斑胸草雀RA投射神經(jīng)元動作電位幅值

    Figure 3 The peak amplitude -injected current relationship of RA projection neurons between female and male zebra finches

    3 討論

    3.1RA核團形態(tài)學(xué)的性別差異

    鳴禽的鳴唱控制核團具有明顯的性二態(tài)性,雄鳥的HVC,RA核團體積要明顯大于雌鳥[5].雄鳥RA核團內(nèi)神經(jīng)元分布更稀疏,每一個神經(jīng)元占據(jù)相對更大的位置,擁有著更多的突觸連接,表明雄鳥RA神經(jīng)元執(zhí)行著更復(fù)雜的功能.這些結(jié)果提示,鳴禽鳴唱系統(tǒng)結(jié)構(gòu)的性二態(tài)性與鳴禽鳴唱能力的性別差異具有很大關(guān)聯(lián).

    3.2RA投射神經(jīng)元自發(fā)放頻率的性別差異

    MEITZEN等[7]發(fā)現(xiàn)改變成年白冠雀光周期和體內(nèi)睪酮的水平,RA投射神經(jīng)元的電生理特性會發(fā)生改變.長日照會提高雄鳥體內(nèi)睪酮水平,其RA投射神經(jīng)元的胞體會增大,自發(fā)放頻率,膜時間常數(shù)和膜電容都會上升.性激素影響神經(jīng)元興奮性在其他動物也有發(fā)現(xiàn),雄珍蟾魚的發(fā)聲要遠多于雌魚,其運動神經(jīng)元的發(fā)放頻率也要高于雌魚[8].LIU等[6]應(yīng)用吸附式膜片鉗技術(shù)證明成年斑胸草雀RA神經(jīng)元自發(fā)放頻率也具有明顯的性別二態(tài)性,雄鳥RA神經(jīng)元自發(fā)放頻率明顯高于雌鳥.雄鳥的鳴唱能力顯著高于雌鳥,提示自發(fā)放頻率的增加導(dǎo)致產(chǎn)生更多的動作電位,使神經(jīng)元更好地響應(yīng)突觸輸入.造成雌雄RA單個神經(jīng)元自發(fā)放活動差異的原因可能與雌雄鳴禽體內(nèi)及相關(guān)腦區(qū)內(nèi)激素水平有關(guān).

    3.3注入電流引起RA投射神經(jīng)元動作電位發(fā)放頻率的性別差異

    在細胞吸附式記錄的基礎(chǔ)上進一步破膜形成全細胞記錄.全細胞記錄可以獲得整個細胞的功能變化信息.本實驗中雄鳥RA投射神經(jīng)元在吸附式電壓鉗和全細胞式電流鉗下,均表現(xiàn)出穩(wěn)定的自發(fā)放.而雌鳥只在吸附式電壓鉗下表現(xiàn)出較穩(wěn)定的自發(fā)放,當形成全細胞式之后在電流鉗下幾乎記錄不到自發(fā)放,表明雄鳥RA投射神經(jīng)元的自發(fā)放比雌鳥更穩(wěn)定和持久.

    對RA投射神經(jīng)元分別注入不同強度的去極化電流,均可以誘導(dǎo)出穩(wěn)定的動作電位.將注入去極化電流期間動作電位發(fā)放的平均頻率與注入電流強度作圖,得到F-I曲線,該曲線反應(yīng)了神經(jīng)元對輸入信號的反應(yīng).結(jié)果表明,無論注入強度較大或較小的去極化電流,雄鳥F-I曲線斜率都明顯大于雌鳥,同時注入同樣電流所誘發(fā)的動作電位頻率,雄鳥也是顯著高于雌鳥,說明雄鳥RA投射神經(jīng)元對于電流刺激能引起更高頻率的動作電位發(fā)放.

    綜上所述,無論是自發(fā)放還是注入去極化電流誘發(fā)動作電位,雄鳥RA投射神經(jīng)元的發(fā)放頻率均顯著高于雌鳥,這一結(jié)果與雄鳥更善于鳴唱的行為相對應(yīng).造成這一現(xiàn)象的原因可能和鳴禽體內(nèi)激素水平有關(guān).

    3.4注入電流引起RA投射神經(jīng)元動作電位幅值的性別差異

    對RA投射神經(jīng)元分別注入去極化電流,均誘導(dǎo)出穩(wěn)定的動作電位.對于不同強度的去極化電流,雄鳥動作電位的幅值保持相對恒定,而雌鳥對于強度過大的電流,其動作電位的幅值會明顯降低.表明雄鳥RA投射神經(jīng)元可以承受更大強度的電流刺激,這與雄鳥更擅長鳴唱的行為對應(yīng),提示雄鳥RA投射神經(jīng)元可以接受更強的突觸輸入[6].比較注入電流誘發(fā)動作電位幅值可以發(fā)現(xiàn)存在明顯的性別差異,雌鳥RA投射神經(jīng)元誘發(fā)出動作電位的幅值明顯高于雄鳥,即使在受到強度過大電流刺激而導(dǎo)致動作電位幅值下降時也要高于雄鳥,提示成年斑胸草雀RA投射神經(jīng)元電生理特性在多個指標存在性別差異.

    本實驗結(jié)果,證明了成年斑胸草雀RA不僅在核團形態(tài)上存在明顯的性別差異,在單個神經(jīng)元水平自發(fā)放和誘發(fā)放頻率,動作電位幅值等指標上也存在明顯的性別差異.造成這些差異的原因可能和鳴禽體內(nèi)激素水平有關(guān),其具體機制尚有待進一步研究.

    [1] MOONEY R. Neural mechanisms for learned birdsong [J]. Learn Mem, 2009, 16: 655-669.

    [2] ANDALMAN A S, FEE M S. A basal ganglia-forebrain circuit in the songbird biases motor output to avoid vocal errors [J]. PNAS, 2009, 106(30): 12518-12523.

    [3] SPIRO J E, DALVA M B, MOONEY R. Long-range inhibition within the zebra finch song nucleus RA can coordinate the firing of multiple projection neurons[J]. J Neurophysiol, 1999, 81: 3007-3020.

    [4] MEITZEN J, PERKEL D J, BRENOWITZ E A. Seasonal changes in intrinsic electrophysiological activity of song control neurons in wild song sparrows [J]. J Comp Physiol A Neuroethol Sens Neural Behav Physiol, 2007, 193: 677- 683.

    [5] KONISHI M, AKUTAGAWA E. Neuronal growth atrophy and death in a sexually dimorphic song nucleus in the zebra finch brain [J]. Nature, 1985, 315: 145-147.

    [6] LIU X L, HOU G Q, LIAO S Q, et al. Sexual dimorphism of the electrophophysiological properties of the projection neurons in the robust nucleus of the arcopallium in adult zebra finches[J]. Neurosci Bull, 2010, 26(2):147-152.

    [7] MEITZEN J, WEAVER A L, BRENOWITZ E A, et al. Plastic and stable electrophysiological properties of adult avian forebrain song-control neurons across changing breeding conditions [J]. J Neurosci, 2009, 29(20): 6558-6567.

    [8] BASS A H, BAKER R. Sexual dimorphisms in the vocal control system of a teleost fish: Morphologyofphy siologically identified neurons [J]. J Neurobiol, 1990, 21: 1155- 1168.

    Keywords: adult zebra finch; projection neuron of robust nucleus of the arcopallium (RA); electrophysiological properties; sexual dimorphism

    SexualDimorphismoftheElectrophysiologicalPropertiesofProjectionNeuronsintheRobustNucleusoftheArcopalliuminAdultZebraFinches(Taeniopygiaguttata)

    FAN Boqiang, HOU Guoqiang, PAN Xuan, LI Dongfeng*

    (School of Life Science, South China Normal University, Guangzhou 510631, China)

    Songbird is an ideal animal model for studying the mechanism of learning and memory of languages. The song system of zebra finches is highly sexually different. Uncover the mechanism underlying sexual-difference is important for the neural basis of birdsong. The role of single neuron on sexual-difference is rarely reported. Our current studies focus on RA single projection neurons. The active and passive electrophysiological properties were examined by cell attached patch or whole-cell patch recordings. We report here that the firing rate and peak amplitude of action potential in RA projection neurons in adult zebra finches are sexual dimorphism.

    2011-06-24

    國家自然科學(xué)基金項目(30970363;31172092)

    *通訊作者, dfliswx@126.com

    1000-5463(2012)01-0109-04

    Q424

    A

    【責(zé)任編輯 成 文】

    猜你喜歡
    鳴禽去極化核團
    鳥鳴:多彩的旋律
    鳴禽家族
    基于ROI的體積測量和基于頂點的形態(tài)學(xué)分析對2型糖尿病患者皮層下灰質(zhì)核團形態(tài)改變及其與認知障礙的相關(guān)性研究
    發(fā)電機定子繞組極化去極化測試系統(tǒng)設(shè)計
    霜降
    牡丹(2021年11期)2021-07-20 06:31:16
    電纜等溫松弛電流的時間特性與溫度特性研究
    絕緣材料(2020年9期)2020-09-28 06:46:40
    聽覺剝奪對成年雄性斑胸草雀鳴唱行為和LMAN核團的影響
    去極化氧化還原電位與游泳池水衛(wèi)生指標關(guān)系研究
    種菜
    神經(jīng)肽Y的促攝食作用及其調(diào)控機制
    精品少妇一区二区三区视频日本电影| 啦啦啦免费观看视频1| 国产淫语在线视频| 免费观看a级毛片全部| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 精品欧美一区二区三区在线| 一级毛片女人18水好多| 在线观看舔阴道视频| 97人妻天天添夜夜摸| 欧美成人午夜精品| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 色播在线永久视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| 欧美日韩av久久| 免费日韩欧美在线观看| 精品人妻1区二区| 人妻 亚洲 视频| 久久精品人人爽人人爽视色| 免费人妻精品一区二区三区视频| 天天操日日干夜夜撸| 永久免费av网站大全| 桃红色精品国产亚洲av| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 丰满迷人的少妇在线观看| 国产精品久久久久久精品电影小说| 一个人免费看片子| 国产免费福利视频在线观看| 大码成人一级视频| 欧美久久黑人一区二区| 老司机影院成人| 久久久久久久大尺度免费视频| 欧美在线黄色| 亚洲九九香蕉| 久久性视频一级片| 国产成人啪精品午夜网站| 窝窝影院91人妻| 欧美人与性动交α欧美软件| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 视频区欧美日本亚洲| 亚洲黑人精品在线| 99久久国产精品久久久| 午夜久久久在线观看| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲国产精品成人久久小说| 成年av动漫网址| 久久亚洲精品不卡| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 亚洲国产欧美一区二区综合| 国产av又大| 国产男人的电影天堂91| 美国免费a级毛片| 啦啦啦啦在线视频资源| av天堂在线播放| 18禁国产床啪视频网站| 永久免费av网站大全| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 中国国产av一级| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 日韩中文字幕欧美一区二区| 精品一品国产午夜福利视频| 啦啦啦免费观看视频1| 国产精品.久久久| 伊人亚洲综合成人网| 久久这里只有精品19| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 亚洲av成人一区二区三| 一区二区三区激情视频| 欧美变态另类bdsm刘玥| 啪啪无遮挡十八禁网站| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 黄色a级毛片大全视频| 成年人午夜在线观看视频| 天堂俺去俺来也www色官网| 在线观看一区二区三区激情| 99国产综合亚洲精品| 后天国语完整版免费观看| 久久久国产一区二区| 亚洲av成人一区二区三| 三上悠亚av全集在线观看| 在线永久观看黄色视频| 精品免费久久久久久久清纯 | 亚洲少妇的诱惑av| 在线精品无人区一区二区三| 在线观看免费日韩欧美大片| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| av不卡在线播放| 国产xxxxx性猛交| 99国产精品一区二区蜜桃av | 久久精品久久久久久噜噜老黄| 亚洲色图综合在线观看| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲综合色网址| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 日韩电影二区| 十八禁人妻一区二区| 亚洲情色 制服丝袜| 蜜桃国产av成人99| 久久毛片免费看一区二区三区| 国产亚洲精品久久久久5区| 99精品久久久久人妻精品| 久久久精品94久久精品| 又黄又粗又硬又大视频| 久久久国产欧美日韩av| 免费高清在线观看日韩| 一区二区av电影网| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 男女无遮挡免费网站观看| 午夜福利免费观看在线| 国产区一区二久久| 午夜福利视频精品| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久 | 亚洲成人国产一区在线观看| 欧美精品一区二区大全| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| a在线观看视频网站| 少妇的丰满在线观看| netflix在线观看网站| 丝袜在线中文字幕| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 亚洲国产日韩一区二区| 国产黄频视频在线观看| 中文字幕最新亚洲高清| 91九色精品人成在线观看| 中文字幕制服av| 高清视频免费观看一区二区| 制服诱惑二区| 一级毛片精品| 亚洲全国av大片| 免费在线观看完整版高清| 亚洲国产欧美一区二区综合| 免费av中文字幕在线| 老司机深夜福利视频在线观看 | 国产在线观看jvid| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 成人三级做爰电影| 下体分泌物呈黄色| 欧美变态另类bdsm刘玥| 亚洲一码二码三码区别大吗| av网站在线播放免费| 我要看黄色一级片免费的| 久久国产精品影院| 1024香蕉在线观看| 欧美精品一区二区免费开放| 欧美精品av麻豆av| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲欧美色中文字幕在线| 99国产综合亚洲精品| 黄色片一级片一级黄色片| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 午夜两性在线视频| 黄片小视频在线播放| 这个男人来自地球电影免费观看| 9色porny在线观看| 国产一级毛片在线| 久久久水蜜桃国产精品网| 国产黄色免费在线视频| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 另类精品久久| 美女高潮到喷水免费观看| 欧美日韩视频精品一区| xxxhd国产人妻xxx| 欧美+亚洲+日韩+国产| 亚洲精品美女久久av网站| 国产精品成人在线| 久久久精品94久久精品| 日韩中文字幕欧美一区二区| 久久久水蜜桃国产精品网| 一区在线观看完整版| 亚洲情色 制服丝袜| 一区二区三区激情视频| 久久av网站| 亚洲一区二区三区欧美精品| svipshipincom国产片| a 毛片基地| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产亚洲精品久久久久5区| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 中文字幕精品免费在线观看视频| 精品亚洲成国产av| 国产成人精品无人区| 少妇的丰满在线观看| 色播在线永久视频| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 成年美女黄网站色视频大全免费| 一级片'在线观看视频| 老司机亚洲免费影院| 天天影视国产精品| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产精品一区二区精品视频观看| 一区福利在线观看| 欧美在线一区亚洲| 多毛熟女@视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 天天添夜夜摸| 久久性视频一级片| 亚洲av片天天在线观看| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 又紧又爽又黄一区二区| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 青青草视频在线视频观看| 天堂俺去俺来也www色官网| 在线精品无人区一区二区三| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲成人免费电影在线观看| 黄色视频不卡| 大码成人一级视频| 97精品久久久久久久久久精品| 在线天堂中文资源库| 精品久久蜜臀av无| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产黄频视频在线观看| 黄色片一级片一级黄色片| 又黄又粗又硬又大视频| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 亚洲国产中文字幕在线视频| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 一本综合久久免费| 亚洲七黄色美女视频| 一级片'在线观看视频| 亚洲欧美激情在线| 欧美日本中文国产一区发布| 国产成人av教育| 咕卡用的链子| 国产xxxxx性猛交| 亚洲一区二区三区欧美精品| 91老司机精品| 成年av动漫网址| 在线看a的网站| 高清在线国产一区| 三上悠亚av全集在线观看| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲国产中文字幕在线视频| 激情视频va一区二区三区| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 电影成人av| 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 性少妇av在线| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 天天操日日干夜夜撸| 99久久综合免费| 亚洲视频免费观看视频| 亚洲avbb在线观看| 精品亚洲成a人片在线观看| 欧美日韩成人在线一区二区| 国产精品1区2区在线观看. | 欧美+亚洲+日韩+国产| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 一区二区三区乱码不卡18| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 法律面前人人平等表现在哪些方面 | 亚洲国产成人一精品久久久| 最新的欧美精品一区二区| 人妻人人澡人人爽人人| 美女高潮到喷水免费观看| 国产片内射在线| 丝袜喷水一区| 亚洲伊人久久精品综合| 91字幕亚洲| 大香蕉久久成人网| 亚洲精品成人av观看孕妇| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 精品国产国语对白av| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| av天堂久久9| 欧美av亚洲av综合av国产av| 一区二区av电影网| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 老司机在亚洲福利影院| 51午夜福利影视在线观看| 在线观看免费高清a一片| 亚洲视频免费观看视频| 一级片'在线观看视频| 午夜免费成人在线视频| 精品一区二区三区四区五区乱码| 热re99久久精品国产66热6| 国产成人精品无人区| 99九九在线精品视频| 亚洲国产日韩一区二区| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 美女午夜性视频免费| 亚洲天堂av无毛| 久久人人爽人人片av| 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产1区2区3区精品| 蜜桃在线观看..| 欧美日韩福利视频一区二区| 一边摸一边做爽爽视频免费| a级毛片在线看网站| 热99国产精品久久久久久7| 色94色欧美一区二区| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 人妻一区二区av| 久久久精品94久久精品| 考比视频在线观看| 男女高潮啪啪啪动态图| 精品一品国产午夜福利视频| 国产精品免费大片| 午夜免费观看性视频| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 男人舔女人的私密视频| 99九九在线精品视频| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产精品 欧美亚洲| 国产一区有黄有色的免费视频| 少妇人妻久久综合中文| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 日本av免费视频播放| 秋霞在线观看毛片| 亚洲av国产av综合av卡| 国产视频一区二区在线看| 男女下面插进去视频免费观看| 美国免费a级毛片| 国产免费现黄频在线看| 91精品国产国语对白视频| 国产91精品成人一区二区三区 | 老司机在亚洲福利影院| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 男人爽女人下面视频在线观看| 90打野战视频偷拍视频| 9191精品国产免费久久| 91成年电影在线观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 精品人妻在线不人妻| 大片电影免费在线观看免费| 男人添女人高潮全过程视频| 国产成人欧美在线观看 | 国产精品久久久久久精品古装| 中国美女看黄片| 下体分泌物呈黄色| 人成视频在线观看免费观看| 国产精品一区二区精品视频观看| 中亚洲国语对白在线视频| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 久久人妻熟女aⅴ| 丰满少妇做爰视频| 国产精品av久久久久免费| 国产av国产精品国产| 在线永久观看黄色视频| 久久久精品94久久精品| 少妇被粗大的猛进出69影院| 制服人妻中文乱码| 中文字幕人妻丝袜一区二区| av国产精品久久久久影院| 99re6热这里在线精品视频| √禁漫天堂资源中文www| avwww免费| 热99re8久久精品国产| 久久人人97超碰香蕉20202| 中文字幕人妻熟女乱码| 18禁观看日本| 99热国产这里只有精品6| 悠悠久久av| 国产欧美日韩一区二区精品| 妹子高潮喷水视频| 欧美日韩视频精品一区| 蜜桃国产av成人99| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 18禁观看日本| av片东京热男人的天堂| 国产精品久久久av美女十八| 中文精品一卡2卡3卡4更新| av在线老鸭窝| 一级片'在线观看视频| 美女中出高潮动态图| 91麻豆av在线| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 丰满迷人的少妇在线观看| 国产伦理片在线播放av一区| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产欧美亚洲国产| 精品高清国产在线一区| 大陆偷拍与自拍| 久久精品国产综合久久久| 国产精品av久久久久免费| 一本综合久久免费| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 水蜜桃什么品种好| 最新的欧美精品一区二区| 一区二区三区激情视频| 久久香蕉激情| av天堂在线播放| 亚洲免费av在线视频| 国产一区有黄有色的免费视频| 精品欧美一区二区三区在线| 考比视频在线观看| 黄色a级毛片大全视频| 亚洲九九香蕉| 五月天丁香电影| 美女大奶头黄色视频| 欧美精品亚洲一区二区| 久久久久国内视频| 免费在线观看影片大全网站| 久久香蕉激情| 精品人妻1区二区| 99热网站在线观看| 在线观看一区二区三区激情| 免费av中文字幕在线| 18禁国产床啪视频网站| 天堂8中文在线网| 成年人免费黄色播放视频| 一区二区三区四区激情视频| 久久女婷五月综合色啪小说| 91九色精品人成在线观看| 国产伦人伦偷精品视频| 欧美日韩精品网址| 18在线观看网站| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 国产av又大| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 亚洲av男天堂| h视频一区二区三区| 国产精品免费大片| 99精品欧美一区二区三区四区| 一区二区三区四区激情视频| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产精品熟女久久久久浪| 欧美精品一区二区大全| 热re99久久精品国产66热6| 最黄视频免费看| 精品人妻1区二区| 成人国语在线视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 欧美另类一区| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 久久 成人 亚洲| 免费高清在线观看日韩| a级毛片黄视频| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 蜜桃国产av成人99| 99久久精品国产亚洲精品| 巨乳人妻的诱惑在线观看| av一本久久久久| 亚洲久久久国产精品| 久久99热这里只频精品6学生| 大香蕉久久网| 老司机深夜福利视频在线观看 | 一区在线观看完整版| a 毛片基地| 色精品久久人妻99蜜桃| 少妇粗大呻吟视频| 成人国语在线视频| 国产精品国产av在线观看| 9色porny在线观看| 成人免费观看视频高清| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 精品免费久久久久久久清纯 | 中国国产av一级| www.999成人在线观看| 午夜日韩欧美国产| 最近最新中文字幕大全免费视频| 国产精品一二三区在线看| 欧美日韩一级在线毛片| 国产在线观看jvid| 青春草亚洲视频在线观看| 国产在线视频一区二区| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 亚洲黑人精品在线| 老司机靠b影院| 两人在一起打扑克的视频| av欧美777| 淫妇啪啪啪对白视频 | 一级毛片女人18水好多| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 黄色视频在线播放观看不卡| 欧美成狂野欧美在线观看| av线在线观看网站| 欧美中文综合在线视频| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 在线观看舔阴道视频| 久久久久久久久久久久大奶| 欧美日韩亚洲高清精品| 首页视频小说图片口味搜索| kizo精华| 国产免费一区二区三区四区乱码| 一级片免费观看大全| 国产成人欧美| 国产麻豆69| h视频一区二区三区| 久久久久久久精品精品| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 亚洲熟女毛片儿| 99热国产这里只有精品6| 亚洲第一av免费看| 人人澡人人妻人| 一个人免费在线观看的高清视频 | 精品国产一区二区三区久久久樱花| 老司机在亚洲福利影院| 精品熟女少妇八av免费久了| 欧美97在线视频| 91老司机精品| 中文字幕人妻丝袜制服| 天堂俺去俺来也www色官网| 少妇人妻久久综合中文| 他把我摸到了高潮在线观看 | 18禁观看日本| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 精品少妇黑人巨大在线播放| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 久久久久国内视频| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 久久久久精品国产欧美久久久 | 精品一区二区三区av网在线观看 | 电影成人av| 亚洲国产成人一精品久久久| av网站在线播放免费| 一二三四社区在线视频社区8| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 欧美日韩成人在线一区二区| 亚洲精品一区蜜桃| 国产高清videossex| 国产精品九九99| a级毛片黄视频| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 国产亚洲精品第一综合不卡| www.熟女人妻精品国产| 性高湖久久久久久久久免费观看| 丝袜脚勾引网站| 日韩有码中文字幕| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 看免费av毛片| 欧美xxⅹ黑人| 飞空精品影院首页| 亚洲国产欧美在线一区| 久久中文看片网| netflix在线观看网站| 久久久久国内视频| 国产在线一区二区三区精| 国产亚洲欧美精品永久| 岛国毛片在线播放| 色婷婷久久久亚洲欧美| 最黄视频免费看| 一区福利在线观看| 真人做人爱边吃奶动态| 欧美精品一区二区大全| 男人舔女人的私密视频| 国产成人啪精品午夜网站| 女性生殖器流出的白浆| 久热爱精品视频在线9| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲国产看品久久| 在线观看免费高清a一片| 亚洲黑人精品在线| 午夜精品国产一区二区电影| 国产男人的电影天堂91| 国产一区二区三区综合在线观看| 手机成人av网站| 99热国产这里只有精品6| av欧美777| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 在线看a的网站| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 成人国语在线视频| 99re6热这里在线精品视频| www日本在线高清视频| 精品熟女少妇八av免费久了| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 免费在线观看日本一区| 久久99一区二区三区| 12—13女人毛片做爰片一| 老司机福利观看| 啦啦啦 在线观看视频| 国产免费一区二区三区四区乱码| 最近最新免费中文字幕在线| av天堂在线播放| 国产精品一区二区免费欧美 | 大片免费播放器 马上看| 男女边摸边吃奶| 国产亚洲精品第一综合不卡| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | svipshipincom国产片| 黑丝袜美女国产一区| 久热爱精品视频在线9| 性少妇av在线| 黄片小视频在线播放| 欧美国产精品va在线观看不卡| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 在线观看一区二区三区激情| 淫妇啪啪啪对白视频 | 亚洲中文日韩欧美视频| 手机成人av网站| 极品人妻少妇av视频| 深夜精品福利| av不卡在线播放| 视频区图区小说| 欧美午夜高清在线| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产黄色免费在线视频| 国产亚洲欧美在线一区二区| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 亚洲免费av在线视频| 欧美日本中文国产一区发布| 一二三四在线观看免费中文在| 少妇人妻久久综合中文| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲伊人久久精品综合| www.999成人在线观看| 日韩 亚洲 欧美在线| 亚洲av男天堂| 日韩三级视频一区二区三区| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 日韩中文字幕视频在线看片| 国产欧美亚洲国产| 亚洲三区欧美一区|