• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    成年斑胸草雀弓狀皮質(zhì)櫟核投射神經(jīng)元電生理特性的性別差異

    2012-11-14 08:39:11范博強侯國強李東風(fēng)
    關(guān)鍵詞:鳴禽去極化核團

    范博強,侯國強,潘 璇,李東風(fēng)

    (華南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,廣東廣州 510631)

    成年斑胸草雀弓狀皮質(zhì)櫟核投射神經(jīng)元電生理特性的性別差異

    范博強,侯國強,潘 璇,李東風(fēng)*

    (華南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,廣東廣州 510631)

    利用離體腦片膜片鉗技術(shù)檢測RA投射神經(jīng)元電生理活動的主動和被動特性,對其性別差異進行探討,發(fā)現(xiàn)鳴禽RA投射神經(jīng)元電生理特性在發(fā)放頻率和誘發(fā)動作電位幅值方面存在明顯的性別差異.

    成年斑胸草雀; 弓狀皮質(zhì)櫟核投射神經(jīng)元; 電生理特性; 性別差異

    鳴禽是研究學(xué)習(xí)記憶神經(jīng)機制的理想動物模型.鳴禽的鳴唱學(xué)習(xí)依賴于腦內(nèi)的一組離散的核團以及它們之間的連接通路,其被稱之為鳴唱控制系統(tǒng)[1].鳴唱控制系統(tǒng)由發(fā)聲運動通路和前端腦學(xué)習(xí)通路組成.其中發(fā)聲運動通路由高級發(fā)聲中樞(high vocal centre, HVC)直接發(fā)出投射神經(jīng)元與前運動核團弓狀皮質(zhì)櫟核(robust nucleus of the arcopallium, RA)形成突觸連接.發(fā)聲運動通路的主要功能在于控制鳴曲的發(fā)出,直接參與鳴禽的發(fā)聲運動行為.而前端腦通路也是由HVC發(fā)出,最后通過新紋狀體前部巨細胞核外側(cè)部(lateral magnocellular nucleus of the anterior neostriatum, LMAN)將前端腦通路中的信息傳遞給RA.其主要功能是鳴曲的習(xí)得及對鳴唱可塑性的調(diào)節(jié)[2].RA作為運動指令信息輸出核團,其核團內(nèi)的生理活動變化成為2條通路影響鳴唱的最直接作用靶點.因此,RA核團在鳴唱系統(tǒng)中占有重要的地位.RA核團主要由2類神經(jīng)元組成:投射神經(jīng)元和中間神經(jīng)元,其電生理特性具有明顯的差異[3].

    鳴禽的鳴唱有著明顯的性別差異.對鳴禽性別差異的研究多是從激素水平對鳴禽相關(guān)鳴唱核團進行研究,很少有從單個神經(jīng)元水平比較鳴禽性別差異的報道[4-5].鳴禽鳴唱系統(tǒng)在單個神經(jīng)元水平上是否存在與核團水平類似的性別差異?單個神經(jīng)元的電生理特性是否存在性別差異?這些需要進一步深入研究.本研究利用離體腦片膜片鉗技術(shù),對不同性別的斑胸草雀中RA核團投射神經(jīng)元電生理特性進行比較,觀察其在電生理特性方面的差異.

    1 材料與方法

    1.1實驗動物

    健康的成年雌性和雄性斑胸草雀(Taeniopygiaguttata)各10只,體質(zhì)量10~15 g,由華南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院動物房提供.

    1.2試劑

    切片液(mmol/L)為:Sucrose 248,KCl 5,NaHCO328,Glucose 10,MgSO4·7H2O 1.3,NaH2PO4·H2O 1.26;人工腦脊液(mmol/L)為:NaCl 125,NaHCO325,NaH2PO4·H2O 1.27,KCl 2.5,MgSO4·7H2O 1.2,CaCl22.0,Glucose 25;用蔗糖調(diào)節(jié)滲透壓至350 mOsm.電極內(nèi)液(mmol/L)為:KMeSO4120,NaCl 5,HEPES 10,EGTA 2,Mg-ATP 2,Na-GTP 0.3,pH 7.2,滲透壓330 mOsm.

    1.3主要儀器

    微電極拉制器(P-97, Sutter Instrument, USA)、振動切片機(NVSIM1, WPI, USA)、正置顯微鏡(OLYMPUS, DP30BW, JAPAN)、微操縱器(MP-285, Sutter Instrument)、膜片鉗放大器(MultiClamp 700B, Axon Instrument)、數(shù)/模轉(zhuǎn)換器(DIGIDATA 1322A, Axon Instrument)、pClamp9.2軟件(Axon Instruments)等.

    1.4腦片的制備

    麻醉后快速斷頭,迅速取腦置于已預(yù)通15 min 95%O2+5%CO2混合氣(體積分數(shù),下同)的冰水混合的切片液中冷卻30 s~1 min,然后用振動切片機切取含有RA核團的腦片,約250~300 μm,轉(zhuǎn)移到37 ℃的孵育槽,通以95%O2+5%CO2混合氣,孵育30 min,然后在35 ℃人工腦脊液中孵育1 h,之后保持室溫孵育.在此條件下腦片可存活8~10 h,通氣時注意防止腦片隨氣泡翻動.

    1.5膜片鉗全細胞式記錄

    1.5.1 微電極的制備 硬質(zhì)玻璃毛坯管(Sutter Instrument)拉制微電極.在全細胞記錄中應(yīng)用的記錄電極尖端的阻抗一般為3~5 MΩ.

    1.5.2 膜片鉗記錄 取孵育好的腦片放到記錄槽內(nèi)并將腦片輕輕壓住,在顯微鏡下尋找合適的RA投射神經(jīng)元[6].先封接形成細胞吸附式,然后在電壓鉗模式下破膜為全細胞式.分別在2種模式下記錄RA投射神經(jīng)元的自發(fā)與誘發(fā)電位.每個細胞記錄時間大約為15~20 min.

    1.6統(tǒng)計學(xué)分析

    實驗記錄到的信號輸入膜片鉗放大器,并由數(shù)模轉(zhuǎn)換器最終轉(zhuǎn)入相連的計算機,記錄信號的監(jiān)測、存儲及分析處理以及通過記錄電極給予細胞的指令電壓均由pClamp 9.2軟件完成.所得實驗數(shù)據(jù)采用t檢驗由Origin 8.0進行統(tǒng)計分析并作圖.數(shù)據(jù)用平均值±標準差(Mean±SD)表示.

    2 結(jié)果與分析

    2.1RA核團及其神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)觀察

    在低倍顯微鏡下(5×),雄鳥RA核團呈卵圓形,輪廓清晰,與周圍組織界限明顯.雌鳥RA核團外形與雄鳥類似,輪廓界限較雄鳥略模糊.在高倍鏡下(40×),可明顯觀察到密集交錯的神經(jīng)纖維和微細血管.

    2.2吸附式記錄模式下RA核團單個投射神經(jīng)元自發(fā)放頻率

    在吸附式膜片鉗記錄模式下比較了RA核團投

    射神經(jīng)元自發(fā)放頻率的性別差異(圖1).雌鳥RA投射神經(jīng)元的平均發(fā)放頻率為(6.53±1.53)Hz(n=20),雄鳥RA投射神經(jīng)元的平均發(fā)放頻率為(11.63±0.32)Hz(n=27),雄鳥RA投射神經(jīng)元自發(fā)放頻率明顯大于雌鳥(P<0.01).

    圖1 成年雌雄斑胸草雀RA投射神經(jīng)元自發(fā)放頻率

    Figure 1 The spontaneous firing rates of RA projection neurons in female and male zebra finches

    2.3向RA投射神經(jīng)元注入去極化電流引起動作電位發(fā)放頻率的變化

    在全細胞電流鉗模式下,以神經(jīng)元的靜息電位為基礎(chǔ)給予去極化階躍電流刺激,根據(jù)去極化電流誘導(dǎo)的穩(wěn)定反應(yīng),繪制隨注入電流增加而誘發(fā)動作電位頻率增加的F-I曲線圖.比較雌鳥和雄鳥F-I曲線斜率,可以看出給予不同的去極化電流刺激,隨著注入電流的增加,雄鳥RA投射神經(jīng)元所誘發(fā)出動作電位的頻率均明顯高于雌鳥(圖2).圖2A和2C中雌鳥F-I曲線的斜率為(63.26±3.41)Hz/nA,雄鳥F-I曲線的斜率為(117.1± 1.04)Hz/nA.雄鳥F-I曲線的斜率顯著大于雌鳥(P<0.05).圖2B和2D中雌鳥F-I曲線的斜率為(75.95±7.16)Hz/nA,雄鳥F-I曲線的斜率為(122.52±5.91)Hz/nA.雄鳥F-I曲線的斜率顯著大于雌鳥(P<0.05).

    2.4向RA投射神經(jīng)元注入去極化電流激發(fā)動作電位幅值的變化

    對RA投射神經(jīng)元分別注入不同強度的去極化電流,比較隨去極化電流注入誘發(fā)RA投射神經(jīng)元動作電位幅值的變化.對于不同強度的去極化電流,雄鳥RA神經(jīng)元動作電位的幅值保持相對恒定,而雌鳥RA神經(jīng)元對于強度過大的電流其動作電位的幅值會明顯降低.而在不同強度去極化電流注入的情況下,雌鳥RA神經(jīng)元所誘發(fā)動作電位的幅值均要顯著大于雄鳥(圖3).

    注:(A),(C):給予RA神經(jīng)元去極化電流刺激,起始強度0 pA,脈沖時間1 600 ms,躍階為200 pA,,連續(xù)4個刺激;(B),(D):給予RA神經(jīng)元去極化電流刺激,起始強度0 pA,脈沖時間1 000 ms,躍階為100 pA,連續(xù)9個刺激

    圖2 注入電流時成年雌雄斑胸草雀RA投射神經(jīng)元發(fā)放頻率

    Figure 2 The firing frequency-injected current relationship of RA projection neurons between female and male zebra finches

    注:(A),(C):給予RA神經(jīng)元去極化電流刺激,起始強度0 pA,脈沖時間1 600 ms,躍階為200 pA,連續(xù)4個刺激;(B),(D):給予RA神經(jīng)元去極化電流刺激,起始強度0 pA,脈沖時間1 000 ms,躍階為100 pA,連續(xù)9個刺激.

    圖3 注入電流時雌雄成年斑胸草雀RA投射神經(jīng)元動作電位幅值

    Figure 3 The peak amplitude -injected current relationship of RA projection neurons between female and male zebra finches

    3 討論

    3.1RA核團形態(tài)學(xué)的性別差異

    鳴禽的鳴唱控制核團具有明顯的性二態(tài)性,雄鳥的HVC,RA核團體積要明顯大于雌鳥[5].雄鳥RA核團內(nèi)神經(jīng)元分布更稀疏,每一個神經(jīng)元占據(jù)相對更大的位置,擁有著更多的突觸連接,表明雄鳥RA神經(jīng)元執(zhí)行著更復(fù)雜的功能.這些結(jié)果提示,鳴禽鳴唱系統(tǒng)結(jié)構(gòu)的性二態(tài)性與鳴禽鳴唱能力的性別差異具有很大關(guān)聯(lián).

    3.2RA投射神經(jīng)元自發(fā)放頻率的性別差異

    MEITZEN等[7]發(fā)現(xiàn)改變成年白冠雀光周期和體內(nèi)睪酮的水平,RA投射神經(jīng)元的電生理特性會發(fā)生改變.長日照會提高雄鳥體內(nèi)睪酮水平,其RA投射神經(jīng)元的胞體會增大,自發(fā)放頻率,膜時間常數(shù)和膜電容都會上升.性激素影響神經(jīng)元興奮性在其他動物也有發(fā)現(xiàn),雄珍蟾魚的發(fā)聲要遠多于雌魚,其運動神經(jīng)元的發(fā)放頻率也要高于雌魚[8].LIU等[6]應(yīng)用吸附式膜片鉗技術(shù)證明成年斑胸草雀RA神經(jīng)元自發(fā)放頻率也具有明顯的性別二態(tài)性,雄鳥RA神經(jīng)元自發(fā)放頻率明顯高于雌鳥.雄鳥的鳴唱能力顯著高于雌鳥,提示自發(fā)放頻率的增加導(dǎo)致產(chǎn)生更多的動作電位,使神經(jīng)元更好地響應(yīng)突觸輸入.造成雌雄RA單個神經(jīng)元自發(fā)放活動差異的原因可能與雌雄鳴禽體內(nèi)及相關(guān)腦區(qū)內(nèi)激素水平有關(guān).

    3.3注入電流引起RA投射神經(jīng)元動作電位發(fā)放頻率的性別差異

    在細胞吸附式記錄的基礎(chǔ)上進一步破膜形成全細胞記錄.全細胞記錄可以獲得整個細胞的功能變化信息.本實驗中雄鳥RA投射神經(jīng)元在吸附式電壓鉗和全細胞式電流鉗下,均表現(xiàn)出穩(wěn)定的自發(fā)放.而雌鳥只在吸附式電壓鉗下表現(xiàn)出較穩(wěn)定的自發(fā)放,當形成全細胞式之后在電流鉗下幾乎記錄不到自發(fā)放,表明雄鳥RA投射神經(jīng)元的自發(fā)放比雌鳥更穩(wěn)定和持久.

    對RA投射神經(jīng)元分別注入不同強度的去極化電流,均可以誘導(dǎo)出穩(wěn)定的動作電位.將注入去極化電流期間動作電位發(fā)放的平均頻率與注入電流強度作圖,得到F-I曲線,該曲線反應(yīng)了神經(jīng)元對輸入信號的反應(yīng).結(jié)果表明,無論注入強度較大或較小的去極化電流,雄鳥F-I曲線斜率都明顯大于雌鳥,同時注入同樣電流所誘發(fā)的動作電位頻率,雄鳥也是顯著高于雌鳥,說明雄鳥RA投射神經(jīng)元對于電流刺激能引起更高頻率的動作電位發(fā)放.

    綜上所述,無論是自發(fā)放還是注入去極化電流誘發(fā)動作電位,雄鳥RA投射神經(jīng)元的發(fā)放頻率均顯著高于雌鳥,這一結(jié)果與雄鳥更善于鳴唱的行為相對應(yīng).造成這一現(xiàn)象的原因可能和鳴禽體內(nèi)激素水平有關(guān).

    3.4注入電流引起RA投射神經(jīng)元動作電位幅值的性別差異

    對RA投射神經(jīng)元分別注入去極化電流,均誘導(dǎo)出穩(wěn)定的動作電位.對于不同強度的去極化電流,雄鳥動作電位的幅值保持相對恒定,而雌鳥對于強度過大的電流,其動作電位的幅值會明顯降低.表明雄鳥RA投射神經(jīng)元可以承受更大強度的電流刺激,這與雄鳥更擅長鳴唱的行為對應(yīng),提示雄鳥RA投射神經(jīng)元可以接受更強的突觸輸入[6].比較注入電流誘發(fā)動作電位幅值可以發(fā)現(xiàn)存在明顯的性別差異,雌鳥RA投射神經(jīng)元誘發(fā)出動作電位的幅值明顯高于雄鳥,即使在受到強度過大電流刺激而導(dǎo)致動作電位幅值下降時也要高于雄鳥,提示成年斑胸草雀RA投射神經(jīng)元電生理特性在多個指標存在性別差異.

    本實驗結(jié)果,證明了成年斑胸草雀RA不僅在核團形態(tài)上存在明顯的性別差異,在單個神經(jīng)元水平自發(fā)放和誘發(fā)放頻率,動作電位幅值等指標上也存在明顯的性別差異.造成這些差異的原因可能和鳴禽體內(nèi)激素水平有關(guān),其具體機制尚有待進一步研究.

    [1] MOONEY R. Neural mechanisms for learned birdsong [J]. Learn Mem, 2009, 16: 655-669.

    [2] ANDALMAN A S, FEE M S. A basal ganglia-forebrain circuit in the songbird biases motor output to avoid vocal errors [J]. PNAS, 2009, 106(30): 12518-12523.

    [3] SPIRO J E, DALVA M B, MOONEY R. Long-range inhibition within the zebra finch song nucleus RA can coordinate the firing of multiple projection neurons[J]. J Neurophysiol, 1999, 81: 3007-3020.

    [4] MEITZEN J, PERKEL D J, BRENOWITZ E A. Seasonal changes in intrinsic electrophysiological activity of song control neurons in wild song sparrows [J]. J Comp Physiol A Neuroethol Sens Neural Behav Physiol, 2007, 193: 677- 683.

    [5] KONISHI M, AKUTAGAWA E. Neuronal growth atrophy and death in a sexually dimorphic song nucleus in the zebra finch brain [J]. Nature, 1985, 315: 145-147.

    [6] LIU X L, HOU G Q, LIAO S Q, et al. Sexual dimorphism of the electrophophysiological properties of the projection neurons in the robust nucleus of the arcopallium in adult zebra finches[J]. Neurosci Bull, 2010, 26(2):147-152.

    [7] MEITZEN J, WEAVER A L, BRENOWITZ E A, et al. Plastic and stable electrophysiological properties of adult avian forebrain song-control neurons across changing breeding conditions [J]. J Neurosci, 2009, 29(20): 6558-6567.

    [8] BASS A H, BAKER R. Sexual dimorphisms in the vocal control system of a teleost fish: Morphologyofphy siologically identified neurons [J]. J Neurobiol, 1990, 21: 1155- 1168.

    Keywords: adult zebra finch; projection neuron of robust nucleus of the arcopallium (RA); electrophysiological properties; sexual dimorphism

    SexualDimorphismoftheElectrophysiologicalPropertiesofProjectionNeuronsintheRobustNucleusoftheArcopalliuminAdultZebraFinches(Taeniopygiaguttata)

    FAN Boqiang, HOU Guoqiang, PAN Xuan, LI Dongfeng*

    (School of Life Science, South China Normal University, Guangzhou 510631, China)

    Songbird is an ideal animal model for studying the mechanism of learning and memory of languages. The song system of zebra finches is highly sexually different. Uncover the mechanism underlying sexual-difference is important for the neural basis of birdsong. The role of single neuron on sexual-difference is rarely reported. Our current studies focus on RA single projection neurons. The active and passive electrophysiological properties were examined by cell attached patch or whole-cell patch recordings. We report here that the firing rate and peak amplitude of action potential in RA projection neurons in adult zebra finches are sexual dimorphism.

    2011-06-24

    國家自然科學(xué)基金項目(30970363;31172092)

    *通訊作者, dfliswx@126.com

    1000-5463(2012)01-0109-04

    Q424

    A

    【責(zé)任編輯 成 文】

    猜你喜歡
    鳴禽去極化核團
    鳥鳴:多彩的旋律
    鳴禽家族
    基于ROI的體積測量和基于頂點的形態(tài)學(xué)分析對2型糖尿病患者皮層下灰質(zhì)核團形態(tài)改變及其與認知障礙的相關(guān)性研究
    發(fā)電機定子繞組極化去極化測試系統(tǒng)設(shè)計
    霜降
    牡丹(2021年11期)2021-07-20 06:31:16
    電纜等溫松弛電流的時間特性與溫度特性研究
    絕緣材料(2020年9期)2020-09-28 06:46:40
    聽覺剝奪對成年雄性斑胸草雀鳴唱行為和LMAN核團的影響
    去極化氧化還原電位與游泳池水衛(wèi)生指標關(guān)系研究
    種菜
    神經(jīng)肽Y的促攝食作用及其調(diào)控機制
    国产 一区 欧美 日韩| avwww免费| 长腿黑丝高跟| www.www免费av| aaaaa片日本免费| 午夜激情福利司机影院| 99久国产av精品| 首页视频小说图片口味搜索| 成人鲁丝片一二三区免费| 日本三级黄在线观看| 国产亚洲精品av在线| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产91精品成人一区二区三区| 欧美激情在线99| xxxwww97欧美| 亚洲一区二区三区不卡视频| 日韩欧美国产一区二区入口| 国产精品女同一区二区软件 | 欧美国产日韩亚洲一区| 欧美最新免费一区二区三区 | 免费在线观看成人毛片| 成人一区二区视频在线观看| 国产精品久久久久久久电影| 88av欧美| 久99久视频精品免费| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 亚洲经典国产精华液单 | 老女人水多毛片| 亚洲色图av天堂| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 亚洲最大成人av| 精品人妻熟女av久视频| 可以在线观看毛片的网站| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 舔av片在线| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 赤兔流量卡办理| 成人av一区二区三区在线看| 丰满乱子伦码专区| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲国产精品合色在线| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 国产精品,欧美在线| av欧美777| av在线天堂中文字幕| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产免费一级a男人的天堂| 亚洲av免费在线观看| 久久久久九九精品影院| 欧美一级a爱片免费观看看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 免费av毛片视频| 亚洲五月天丁香| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 99国产精品一区二区三区| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产v大片淫在线免费观看| 日韩国内少妇激情av| 亚洲成人精品中文字幕电影| 69av精品久久久久久| 如何舔出高潮| av福利片在线观看| 精品一区二区免费观看| 俺也久久电影网| av在线老鸭窝| 日本免费一区二区三区高清不卡| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 久99久视频精品免费| 波多野结衣巨乳人妻| 欧美又色又爽又黄视频| 国产精品精品国产色婷婷| aaaaa片日本免费| 欧美日韩国产亚洲二区| 亚洲片人在线观看| 中亚洲国语对白在线视频| 一级作爱视频免费观看| 亚洲国产色片| x7x7x7水蜜桃| 欧美乱妇无乱码| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产中年淑女户外野战色| 国产精品野战在线观看| 美女大奶头视频| 国产高清有码在线观看视频| 国产在视频线在精品| 在线天堂最新版资源| www.色视频.com| 日韩高清综合在线| 美女被艹到高潮喷水动态| 久久久久亚洲av毛片大全| 舔av片在线| 又爽又黄无遮挡网站| 内射极品少妇av片p| 美女大奶头视频| 一个人观看的视频www高清免费观看| 亚洲美女搞黄在线观看 | 亚洲无线观看免费| avwww免费| 中国美女看黄片| 国产精品永久免费网站| 91久久精品电影网| 性色av乱码一区二区三区2| 欧美成人免费av一区二区三区| 黄色一级大片看看| 深夜精品福利| 在线看三级毛片| 国产熟女xx| 亚洲国产精品sss在线观看| 日日干狠狠操夜夜爽| 欧美国产日韩亚洲一区| 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 色5月婷婷丁香| 91av网一区二区| 免费人成视频x8x8入口观看| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 成人毛片a级毛片在线播放| 色综合站精品国产| 女人被狂操c到高潮| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 深夜精品福利| 成年女人毛片免费观看观看9| 亚洲色图av天堂| 丰满人妻一区二区三区视频av| 在现免费观看毛片| 国产激情偷乱视频一区二区| 午夜a级毛片| 97热精品久久久久久| 亚洲在线观看片| 国产免费一级a男人的天堂| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产av一区在线观看免费| 欧美一区二区亚洲| av黄色大香蕉| av在线蜜桃| 嫩草影院精品99| 国产精品伦人一区二区| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 国产精品av视频在线免费观看| 给我免费播放毛片高清在线观看| 可以在线观看毛片的网站| 精品久久久久久,| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产在视频线在精品| 成人毛片a级毛片在线播放| 免费看美女性在线毛片视频| 成人鲁丝片一二三区免费| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 97超视频在线观看视频| 免费看日本二区| av天堂中文字幕网| 九色成人免费人妻av| 麻豆av噜噜一区二区三区| 99久久九九国产精品国产免费| 在线免费观看的www视频| 日韩有码中文字幕| 国产乱人伦免费视频| 欧美精品国产亚洲| 91麻豆av在线| 国产高潮美女av| 欧美一区二区亚洲| 99久久成人亚洲精品观看| 91久久精品电影网| 午夜福利在线观看吧| av专区在线播放| 一级a爱片免费观看的视频| 啪啪无遮挡十八禁网站| 亚洲在线观看片| 欧美日本亚洲视频在线播放| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 国产精品98久久久久久宅男小说| www.999成人在线观看| 国产中年淑女户外野战色| 白带黄色成豆腐渣| 午夜福利免费观看在线| 精品久久久久久成人av| 日本成人三级电影网站| 老熟妇仑乱视频hdxx| 精品一区二区三区av网在线观看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 精品不卡国产一区二区三区| 久久国产乱子伦精品免费另类| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 制服丝袜大香蕉在线| 国内精品久久久久久久电影| 国产亚洲精品av在线| av天堂在线播放| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 毛片一级片免费看久久久久 | 精品一区二区三区人妻视频| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 国产精品电影一区二区三区| 亚洲中文字幕日韩| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 欧美激情国产日韩精品一区| av在线观看视频网站免费| 有码 亚洲区| 男人和女人高潮做爰伦理| 欧美国产日韩亚洲一区| 国产一级毛片七仙女欲春2| 一个人免费在线观看的高清视频| 中文字幕免费在线视频6| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 久久久久久大精品| 国产综合懂色| 村上凉子中文字幕在线| 日本一二三区视频观看| 伊人久久精品亚洲午夜| 亚洲av成人av| 欧美国产日韩亚洲一区| 亚洲国产精品999在线| 欧美乱妇无乱码| 老司机深夜福利视频在线观看| 日韩欧美三级三区| 桃色一区二区三区在线观看| 精品人妻偷拍中文字幕| 十八禁人妻一区二区| netflix在线观看网站| 久久久成人免费电影| 免费在线观看亚洲国产| 亚洲一区二区三区色噜噜| 天美传媒精品一区二区| 99久久精品一区二区三区| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 少妇人妻精品综合一区二区 | 久久6这里有精品| 窝窝影院91人妻| 草草在线视频免费看| 欧美xxxx性猛交bbbb| av福利片在线观看| 两个人视频免费观看高清| 国产av麻豆久久久久久久| 日本 av在线| 一级黄片播放器| 日本成人三级电影网站| 亚洲黑人精品在线| 一本综合久久免费| 亚洲内射少妇av| 国产久久久一区二区三区| 亚洲 国产 在线| 亚洲精品久久国产高清桃花| 欧美精品啪啪一区二区三区| 18禁在线播放成人免费| 中文字幕高清在线视频| 天堂动漫精品| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 日韩欧美精品v在线| 久久午夜亚洲精品久久| 午夜两性在线视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产伦精品一区二区三区视频9| 午夜激情福利司机影院| 国产爱豆传媒在线观看| 青草久久国产| 一级黄色大片毛片| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 人人妻人人看人人澡| 国产私拍福利视频在线观看| 亚洲久久久久久中文字幕| 神马国产精品三级电影在线观看| 好男人在线观看高清免费视频| 91在线观看av| 久久国产乱子伦精品免费另类| 国产成人福利小说| 中国美女看黄片| 在线播放国产精品三级| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 国产美女午夜福利| 999久久久精品免费观看国产| 69人妻影院| 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲熟妇熟女久久| 国产在线精品亚洲第一网站| 亚洲成av人片免费观看| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 午夜福利免费观看在线| a级一级毛片免费在线观看| 免费av毛片视频| 99久国产av精品| 欧美又色又爽又黄视频| 午夜激情福利司机影院| 国产一区二区三区视频了| 欧美在线一区亚洲| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 成年女人永久免费观看视频| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲美女视频黄频| 欧美高清性xxxxhd video| 久久国产乱子伦精品免费另类| 精品人妻熟女av久视频| ponron亚洲| 日韩高清综合在线| 欧美区成人在线视频| 精品免费久久久久久久清纯| 特级一级黄色大片| 制服丝袜大香蕉在线| 免费观看精品视频网站| 国产私拍福利视频在线观看| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 少妇被粗大猛烈的视频| 婷婷丁香在线五月| 3wmmmm亚洲av在线观看| 女人被狂操c到高潮| 此物有八面人人有两片| 99热6这里只有精品| 一进一出抽搐gif免费好疼| 亚洲欧美清纯卡通| 国产精品久久久久久久电影| 精品久久久久久久末码| 精品福利观看| 亚洲黑人精品在线| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 精品免费久久久久久久清纯| 日本熟妇午夜| 免费看美女性在线毛片视频| 亚洲一区二区三区不卡视频| 欧美日韩乱码在线| 国产精品亚洲美女久久久| 露出奶头的视频| 亚洲三级黄色毛片| 麻豆国产97在线/欧美| 九色国产91popny在线| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 如何舔出高潮| 91av网一区二区| 麻豆av噜噜一区二区三区| 男人舔奶头视频| 国产美女午夜福利| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 日韩欧美 国产精品| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 精品久久久久久久末码| 国产精品亚洲一级av第二区| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 黄色一级大片看看| 欧美激情在线99| 国产精品乱码一区二三区的特点| 深爱激情五月婷婷| 国产伦一二天堂av在线观看| 我要看日韩黄色一级片| 久久久久久久久久成人| 俄罗斯特黄特色一大片| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 亚洲av二区三区四区| 听说在线观看完整版免费高清| 久久久久久久久中文| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 精品久久久久久久久久免费视频| 波多野结衣高清作品| 99热这里只有是精品50| АⅤ资源中文在线天堂| 怎么达到女性高潮| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 怎么达到女性高潮| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 欧美最黄视频在线播放免费| www.999成人在线观看| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 91九色精品人成在线观看| 成人特级av手机在线观看| 国产精品电影一区二区三区| 淫秽高清视频在线观看| 色5月婷婷丁香| 一级毛片久久久久久久久女| 757午夜福利合集在线观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 日韩精品中文字幕看吧| 久久亚洲真实| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产亚洲精品久久久com| 国产午夜福利久久久久久| 嫁个100分男人电影在线观看| 欧美日韩综合久久久久久 | 免费在线观看亚洲国产| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲avbb在线观看| 久久久成人免费电影| 国产在视频线在精品| 丰满人妻一区二区三区视频av| 日本一本二区三区精品| 国产精品三级大全| 在线播放无遮挡| 免费大片18禁| 亚洲av五月六月丁香网| 国产成人影院久久av| 一区二区三区激情视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 两个人的视频大全免费| 少妇人妻精品综合一区二区 | 可以在线观看的亚洲视频| 欧美一区二区精品小视频在线| 麻豆成人午夜福利视频| 99国产极品粉嫩在线观看| 很黄的视频免费| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产亚洲欧美98| 久久人人精品亚洲av| 老司机午夜福利在线观看视频| 欧美在线黄色| 色尼玛亚洲综合影院| 丰满的人妻完整版| 怎么达到女性高潮| 乱人视频在线观看| 日本熟妇午夜| 亚洲精品久久国产高清桃花| 两个人的视频大全免费| 99久久精品国产亚洲精品| 国产真实伦视频高清在线观看 | 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 亚洲av熟女| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 在线观看一区二区三区| 在线播放国产精品三级| 长腿黑丝高跟| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 如何舔出高潮| 丰满的人妻完整版| 日日夜夜操网爽| 久久久精品欧美日韩精品| 亚洲,欧美,日韩| 欧美在线一区亚洲| 亚洲第一区二区三区不卡| 久99久视频精品免费| 人人妻人人澡欧美一区二区| 特大巨黑吊av在线直播| 久久中文看片网| 久久久精品大字幕| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 99国产精品一区二区三区| 欧美黑人巨大hd| 久久精品91蜜桃| av女优亚洲男人天堂| 亚洲 国产 在线| 国产成人欧美在线观看| 草草在线视频免费看| 亚洲在线自拍视频| a级毛片免费高清观看在线播放| 色综合婷婷激情| 69人妻影院| 欧美日韩综合久久久久久 | 亚洲欧美精品综合久久99| 国产真实伦视频高清在线观看 | 精品午夜福利视频在线观看一区| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 高清毛片免费观看视频网站| 少妇高潮的动态图| 偷拍熟女少妇极品色| a级一级毛片免费在线观看| 亚洲av成人av| 国产在视频线在精品| 国内揄拍国产精品人妻在线| 99久久成人亚洲精品观看| 国产精品一区二区三区四区久久| 韩国av一区二区三区四区| 91在线精品国自产拍蜜月| 黄色日韩在线| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲欧美精品综合久久99| 91麻豆精品激情在线观看国产| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产黄色小视频在线观看| 国产老妇女一区| 久99久视频精品免费| 精品人妻视频免费看| 亚洲不卡免费看| 亚洲av美国av| 午夜免费男女啪啪视频观看 | a级毛片a级免费在线| 757午夜福利合集在线观看| 俺也久久电影网| 此物有八面人人有两片| 日韩欧美在线二视频| 天堂√8在线中文| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 精品久久久久久久末码| 中文字幕av成人在线电影| 如何舔出高潮| 国产精品一区二区三区四区久久| 国产午夜精品论理片| 久久午夜福利片| 不卡一级毛片| 久久久国产成人精品二区| 99久久精品热视频| 成人精品一区二区免费| 夜夜爽天天搞| 在线观看av片永久免费下载| 校园春色视频在线观看| 亚洲熟妇熟女久久| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产精华一区二区三区| 人人妻人人澡欧美一区二区| 天堂影院成人在线观看| 中文字幕熟女人妻在线| 一级黄色大片毛片| 在线免费观看不下载黄p国产 | 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 日韩免费av在线播放| 亚洲av不卡在线观看| www.999成人在线观看| 欧美乱色亚洲激情| 十八禁人妻一区二区| 午夜福利在线在线| 级片在线观看| 国产精品精品国产色婷婷| 在线观看66精品国产| 午夜激情欧美在线| www.色视频.com| 看黄色毛片网站| 久久亚洲真实| 亚洲精品亚洲一区二区| 亚洲第一电影网av| 国产三级黄色录像| 国语自产精品视频在线第100页| 欧美日韩福利视频一区二区| 一区福利在线观看| 成人精品一区二区免费| 色精品久久人妻99蜜桃| 午夜福利在线在线| 国产大屁股一区二区在线视频| 亚洲无线在线观看| 日本成人三级电影网站| 国产视频内射| 亚洲av美国av| 日韩国内少妇激情av| 久久午夜亚洲精品久久| 美女免费视频网站| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产黄色小视频在线观看| 不卡一级毛片| 成年免费大片在线观看| 免费av毛片视频| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 男人的好看免费观看在线视频| 2021天堂中文幕一二区在线观| 乱码一卡2卡4卡精品| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 国产极品精品免费视频能看的| 久久久久性生活片| 在线免费观看的www视频| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产精品久久视频播放| av中文乱码字幕在线| 色尼玛亚洲综合影院| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 久久香蕉精品热| 国产精品亚洲av一区麻豆| 天堂动漫精品| 欧美不卡视频在线免费观看| 无人区码免费观看不卡| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 日韩欧美在线乱码| 久久午夜福利片| 国产三级在线视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲av第一区精品v没综合| 一区二区三区高清视频在线| 中文字幕免费在线视频6| 欧美性猛交黑人性爽| 亚洲专区国产一区二区| 色视频www国产| 精品午夜福利在线看| 黄色一级大片看看| 美女 人体艺术 gogo| 丰满的人妻完整版| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产欧美日韩一区二区精品| 热99在线观看视频| 搡老熟女国产l中国老女人| 一本一本综合久久| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 亚洲中文日韩欧美视频| 男人的好看免费观看在线视频| 一级a爱片免费观看的视频| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 一边摸一边抽搐一进一小说| 精品人妻视频免费看| 国产av麻豆久久久久久久| 97热精品久久久久久| 日韩成人在线观看一区二区三区| 脱女人内裤的视频| 国产精品久久视频播放| 精品久久久久久,| av专区在线播放| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 久久国产乱子免费精品| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 色精品久久人妻99蜜桃| 色在线成人网| 丁香六月欧美| 桃红色精品国产亚洲av| 欧美bdsm另类| 国产精品不卡视频一区二区 | 日本与韩国留学比较| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 欧美黑人巨大hd| 久久国产乱子伦精品免费另类| 国产av麻豆久久久久久久| www.www免费av| 欧美在线黄色| 91在线观看av| 国产淫片久久久久久久久 | 亚洲欧美精品综合久久99| 综合色av麻豆|