藥品制劑中維生素A含量的測定

隋燕麗 周君君 劉 嶺 張 寧

（山東達(dá)因海洋生物制藥股份有限公司，山東 榮成 264300）

維生素A是人體維持正常的生理功能必需的微量元素之一[1]。維生素A在機(jī)體內(nèi)的生理作用包括[2]：參與生長發(fā)育、提高免疫力、保持神經(jīng)細(xì)胞正常功能、預(yù)防癌癥、保護(hù)視力、保護(hù)上皮組織等。因此，維生素A缺乏可能導(dǎo)致疾病，視力下降，抗感染能力降低，呼吸道感染、消化道感染發(fā)病率升高。檢測血清中維生素A的含量對于疾病的診斷和治療很關(guān)鍵。選擇有效的方法十分重要，高效液相色譜（HPLC）法是目前測定維生素常用方法之一[3]。本研究應(yīng)用高效液相色譜（HPLC）法的建立一種快速提取和測定維生素AD滴劑中維生素A含量的方法具有重要意義。本研究應(yīng)用高效液相色譜（HPLC）法測定維生素AD滴劑中維生素A含量，取得快速、簡便的測定效果，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 方法

1.1.1 儀器、藥品及試劑

高效液相色譜儀、紫外檢測器（美國Waters公司）；離心機(jī)（美國惠普公司）；旋渦器（南京儀器廠）；維生素A標(biāo)準(zhǔn)品（美國Sigma公司）；乙醇（分析純）；甲醇（色譜純）；正己烷（分析純）；高純氮?dú)狻?shí)驗(yàn)用水為雙蒸水。

1.1.2 預(yù)處理

SPE柱用500μL甲醇和500μL蒸餾水濾過，加入樣品，用3mL蒸餾水和3mL甲醇-水（6∶4）洗柱子，用甲醇和氯仿收集洗脫的維生素A。

1.2.3 色譜條件

分析柱:Kromasil 100-5C18（150mm×43mm，5μm）色譜柱；柱溫：30℃。檢測波長270nm；流動相：甲醇∶酒精（80∶20）；流速0.5mL/min；進(jìn)樣量20μL。

1.2.4 校準(zhǔn)曲線制備

用乙醇稀釋維生素A的貯備液，溶液0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mL，置于10mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。加入剛配置的溶液10μL，均勻混合3min，用高效液相色譜儀測定。得到回歸方程：A=776.02C+13.25（r=0.9996）。線性范圍為1.20～2.83mg/mL。

表1 分析維生素A回收率

2 結(jié) 果

2.1 回收率測定

按照處方工藝，加入處方量維生素A、D，配制維生素AD滴劑，記錄色譜，計(jì)算回收率，見表1。

2.2 精密度和穩(wěn)定性試驗(yàn)

選取維生素A樣品行精密度試驗(yàn)，經(jīng)校準(zhǔn)曲線算實(shí)際濃度，維生素A 0.1835%。取同一樣品，于最初、2h、4h、6h進(jìn)樣測定。維生素A 0.0768%，樣品在6h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3 維生素AD滴劑中維生素A含量測定

取樣品10μL，注入液相色譜分析儀，計(jì)算含量維生素A含量為（0.3974±0.04）mg/mL。

3 討 論

維生素A是人體正常生命活動不可缺少的微量元素。它在體內(nèi)的作用靶點(diǎn)十分廣泛，對于神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等均發(fā)揮效應(yīng)[4]。維生素A又名視黃醇，是維持正常視力，防止夜盲癥不可缺少的，還可以保證骨骼的生長發(fā)育、維持上皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、改善糖蛋白合成、促進(jìn)鐵吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)、提高免疫力、防治癌癥等[5]。臨床維生素A缺乏會導(dǎo)致一系列疾病[6]，延緩傷口愈合、導(dǎo)致色素沉著、瘢痕形成，易患呼吸道感染、中耳炎、腹瀉等。有研究表明[7]，維生素A還可以降低膽固醇，預(yù)防動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展。測定維生素A含量對于臨床輔助診斷、鑒別診斷和治療的意義重大。本研究高效液相色譜法測定維生素A的含量。高效液相色譜的是用微量加樣器將提純過的樣品注入加樣系統(tǒng)，啟動高壓泵，將流動相帶入色譜柱，樣品在色譜柱的流動相與固定相之間通過數(shù)次的交換，并按物質(zhì)所帶的電荷數(shù)目、分子極性的大小以及在固定相和流動相的分配系數(shù)等進(jìn)行分離，檢測后，根椐峰面積計(jì)算含量。該方法測試過程簡單，且有靈敏度高，分析速度快，重復(fù)性和穩(wěn)定性良好，精確度高等優(yōu)點(diǎn)。結(jié)合本研究結(jié)果也顯示，采用高效液相色譜法可去除輔料的干擾，更加有效的測定維生素AD滴劑中維生素A的含量。操作整個過程應(yīng)該嚴(yán)格避光，由于維生素A的見光分解易、被氧化特性，在提取、處理樣品和測定過程都要注意避光[8]。本研究流動相選用甲醇，維生素AD滴劑中維生素都能達(dá)到短時間基線分離。柱溫對分離效果有比較小的影響，柱溫的增加，縮短保留時間，改善峰的擴(kuò)散。處理后，樣本穩(wěn)定，結(jié)果的重現(xiàn)性滿意。有研究測定維生素A，采用正己烷提取蒸干法處理樣本，但該方法操作繁瑣。本研究縮短了分析時間，方法省時、省力，簡便易操作。并且蒸發(fā)、溶解等步驟可導(dǎo)致維生素A損失，本研究方法所的結(jié)果更準(zhǔn)確，能反映維生素A的真實(shí)含量。綜上所述，高效液相色譜法測定維生素A的方法操作快速、簡便、準(zhǔn)確，且成本低，適宜常規(guī)開展，值得推廣應(yīng)用。

[1]孫明,鹿塵,張正堯.高效液相色譜法測定血清中維生素A的含量[J].河南預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2010,2(5):328-329.

[2]張銀花,馮新昌.景泰縣婦女血清維生素A、E含量測定[J].甘肅科技,2011,6(17):182-183.

[3]陽利龍,銀雪花,祝文兵,等.HPLC測定血清中25-羥基維生素D_3和維生素A及應(yīng)用[J].兒科藥學(xué)雜志,2010,5(3):41-43.

[4]鄭鳳家,別明江,孫成均.DLPME-HPLC同時測定微量人血清中的維生素A和E[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2011,4(8):1522-1524.

[5]刁娟娟,田蘭,孫煒,等.高效液相色譜法測定人血清中維生素A、E、C的含量[J].化學(xué)通報,2010,11(9):826-831.

[6]刁娟娟,田蘭,孟磊,等.高效液相色譜法測定人血清中維生素A、E、C的含量[A].全國生物醫(yī)藥色譜學(xué)術(shù)交流會(2010景德鎮(zhèn))論文集[C].景德鎮(zhèn),2010:161.

[7]蘇佳妍,岳青陽,于大海,等.維生素A含量測定方法的研究[J].山西醫(yī)藥雜志,2010,9(6):557-558.

[8]顏景超,任國譜,安靜,等.高效液相色譜法測定乳制品中維生素A的研究進(jìn)展[J].中國乳品工業(yè),2011,3(9):43-46.