反相高效液相色譜法測(cè)定長(zhǎng)春西汀注射液的含量

吳朝暉 ，李 根 ，周 靜

(1.福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，福建 福州 350004;2.四川省成都市婦幼保健院，四川 成都 610041;3.四川大學(xué)華西藥學(xué)院，四川 成都 610041)

長(zhǎng)春西汀屬吲哚類(lèi)生物堿，為腦血管擴(kuò)張藥，能抑制磷酸二酯酶活性，增加血管平滑肌松弛信使CGMP的作用而選擇性地增加腦血流量，還能抑制血小板凝集，降低人體血液黏度，增加紅細(xì)胞變形力，改善血液流動(dòng)性和微循環(huán)，促進(jìn)腦組織攝取葡萄糖，增加腦耗氧量，改善腦代謝等[1]。其注射液為單方制劑(2 mL∶10 mg)，高效液相色譜含量測(cè)定方法一般以甲醇-碳酸銨-乙醚體系為流動(dòng)相，分離效果不十分理想[2]。本研究中，筆者建立以甲醇-碳酸銨-四氫呋喃體系為流動(dòng)相的反相高效液相色譜(RP-HPLC)法，測(cè)定長(zhǎng)春西汀注射液中長(zhǎng)春西汀的含量，分離效果更佳，重現(xiàn)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1260型高效液相色譜儀，包括四元梯度泵、紫外檢測(cè)器(美國(guó)安捷倫公司);電子天平(瑞士Mettler Toledo公司)。長(zhǎng)春西汀注射液(市售品，批號(hào)110301，110302，110303);長(zhǎng)春西汀對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為RS31/031，純度為99.7%);黃體酮(內(nèi)標(biāo)，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為200307);甲醇、四氫呋喃為色譜純(Merck)，水為Milli-Q去離子水;碳酸銨(天津博迪化工，分析純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Agilent C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm);柱溫:25℃;流動(dòng)相:甲醇-13 mmol/L碳酸銨水溶液-四氫呋喃(100∶16∶5);流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):274 nm;進(jìn)樣量:20μL。按上述色譜條件試驗(yàn)，色譜圖見(jiàn)圖1。長(zhǎng)春西汀保留時(shí)間7.23 min，內(nèi)標(biāo)保留時(shí)間11.31 min;長(zhǎng)春西汀與內(nèi)標(biāo)分離度大于1.5，分離效果良好，理論板數(shù)按長(zhǎng)春西汀計(jì)算為6 580。

2.2 溶液制備

圖1 高效液相色譜圖

精密量取本品2 mL，置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，用流動(dòng)相稀釋制成每1 mL含0.2 mg的溶液，即得供試品溶液。稱(chēng)取40℃真空干燥至恒重的長(zhǎng)春西汀對(duì)照品約20 mg，精密稱(chēng)定，置100 mL量瓶中，加甲醇使溶解并用流動(dòng)相稀釋至刻度，作為對(duì)照品溶液。取黃體酮約80 mg，精密稱(chēng)定，置50 mL量瓶中，用甲醇溶解并用流動(dòng)相稀釋至刻度，作為內(nèi)標(biāo)溶液。稱(chēng)取處方中不含長(zhǎng)春西汀的輔料粉末，按對(duì)照品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:分別取對(duì)照品溶液 1.0，1.5，2.5，3.5，5.0 mL，置50 mL容量瓶中，各精密加入內(nèi)標(biāo)液2 mL，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。取上述溶液20μL，按上述條件進(jìn)樣。以進(jìn)樣量 Y(μg)為橫坐標(biāo)、峰面積 X為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=2.045 1X+3.720 6，r=0.999 1(n=5)。結(jié)果表明，長(zhǎng)春西汀質(zhì)量濃度在0.2～1.0 g/L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):取對(duì)照品溶液20μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積。結(jié)果的 RSD=0.6%(n=5)，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取樣品(批號(hào)為110302)6份，按含量測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定。以百分含量計(jì)算，長(zhǎng)春西汀的 RSD為0.9%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取重復(fù)性試驗(yàn)項(xiàng)下的其中一份供試品溶液，放置 0，1，2，3，4，5，8 h，分別按擬訂定的色譜條件測(cè)定。結(jié)果峰面積基本不變，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn):精密稱(chēng)取長(zhǎng)春西汀對(duì)照品適量，按高、中、低3種質(zhì)量濃度分別制成回收樣品9份，按擬訂的色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 長(zhǎng)春西汀加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.4 樣品含量測(cè)定

取3批長(zhǎng)春西汀注射液，分別精密量取2 mL，置25 mL量瓶中，各精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2 mL，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣20μL，每樣進(jìn)樣3次，測(cè)定峰面積，按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)分為110301，110302，110303的樣品中長(zhǎng)春西汀含量分別為99.67%，100.27%，99.81%。

3 討論

文獻(xiàn)報(bào)道的長(zhǎng)春西汀含量測(cè)定方法有高氯酸滴定法和高效液相色譜法[3-4]。高氯酸滴定法較為煩瑣，準(zhǔn)確度較差。而之前報(bào)道的高效液相色譜法一般選用甲醇-碳酸銨-乙醚體系為流動(dòng)相，分離效果不是十分理想，主峰保留時(shí)間較長(zhǎng)，而且與部分雜質(zhì)無(wú)法實(shí)現(xiàn)基線分離。本試驗(yàn)在總結(jié)文獻(xiàn)報(bào)道方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行優(yōu)化和創(chuàng)新，采用甲醇-碳酸銨-四氫呋喃流動(dòng)相體系測(cè)定長(zhǎng)春西汀注射液中長(zhǎng)春西汀的含量，通過(guò)調(diào)整四氫呋喃比例將主峰保留時(shí)間控制在合適的位置，而且實(shí)現(xiàn)了主峰與雜質(zhì)的完全分離。

對(duì)長(zhǎng)春西汀對(duì)照品溶液在200～300 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外光譜掃描。結(jié)果表明，長(zhǎng)春西汀在274 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故選擇274 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、快速、專(zhuān)屬性強(qiáng)、是長(zhǎng)春西汀注射液含量測(cè)定的較好方法。

[1]盛華明，向左娟，葉君婷，等.新型胺烷基酯類(lèi)取代的順式反式長(zhǎng)春西汀衍生物的合成[J].中國(guó)天然藥物，2011，9(1):51-57.

[2]戚 穎.HPLC法測(cè)定長(zhǎng)春西汀注射液的含量[J].適宜診療技術(shù)，2002，20(6):2-3.

[3]于曼娜.HPLC法測(cè)定注射用長(zhǎng)春西汀苯甲醇的含量[J].海峽藥學(xué)，2008，20(7):74.

[4]王 祥.高效液相色譜法測(cè)定長(zhǎng)春西汀(片)的含量及其有關(guān)物質(zhì)的研究[J].藥物分析雜志，1995，15(4):23-25.