大蒜素對肉雞免疫器官發(fā)育及T淋巴細(xì)胞陽性率的影響

呂全云 陳仕強(qiáng) 劉照雷 趙祥偉 李云龍 （山東省沂水縣畜牧局 276400）

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大蒜素對肉雞免疫器官發(fā)育及T淋巴細(xì)胞陽性率的影響

呂全云 陳仕強(qiáng) 劉照雷 趙祥偉 李云龍 （山東省沂水縣畜牧局 276400）

試驗共選用72只1日齡AA肉雞，隨機(jī)分成4組。I組飼喂基礎(chǔ)日糧為對照組，II、III、IV組分別在基礎(chǔ)日糧中添加12.5、37.5、62.5mg/kg的大蒜素。將肉雞飼養(yǎng)至21、28、35、42日齡進(jìn)行相應(yīng)處理，測定了21、35日齡肉雞免疫器官的相對重量及28、42日齡肉雞T淋巴細(xì)胞陽性率。測定結(jié)果表明，大蒜素處理的II、III、IV組的肉雞，35日齡法氏囊重量均比對照組顯著增加(P<0.05)，III、IV組21日齡胸腺和IV組35日齡脾臟重量均比對照組顯著增加(P<0.05)。T淋巴細(xì)胞陽性率相比，III、IV組28和42日齡T淋巴細(xì)胞陽性率明顯高于對照組(P<0.05)。所以，在日糧中添加大蒜素，可促進(jìn)21、35日齡肉雞免疫器官發(fā)育和28、42日齡肉雞血液T淋巴細(xì)胞增殖和成熟。

肉雞 大蒜素 免疫器官 T淋巴細(xì)胞陽性

大蒜為百合科二年生草本植物的鱗莖，其性溫而味辛酸，歸肺、脾、胃、大腸、肝、腎經(jīng)。具有健胃消食，殺蟲解毒、祛痰止咳，療瘡治癬等功效。大蒜素是用大蒜提取得到的大蒜油或人工合成的大蒜油為原料，將其吸附于一定的載體，制成固態(tài)的添加劑大蒜素。

大蒜素能夠刺激食欲，提高營養(yǎng)物質(zhì)的利用率，增強(qiáng)新陳代謝；可預(yù)防疾病，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能；降低食品膽固醇；不在食用畜禽產(chǎn)品中形成有害殘留，無耐藥性和公害；資源豐富，且價格便宜，使用方便，因此，大蒜素對于畜牧業(yè)生產(chǎn)有廣闊的應(yīng)用前景。

大蒜及大蒜素對心血管和免疫系統(tǒng)有有益影響[1]。大蒜素能提高體細(xì)胞的免疫功能，可能是一種較好的免疫激發(fā)性中草藥。黃霞[2]等在大蒜油對小鼠免疫功能影響的試驗中發(fā)現(xiàn)，服藥組的脾臟、胸腺的重量均有增加，提高細(xì)胞免疫、體液免疫和非特異性免疫功能。西山信好[3]等對綿羊紅細(xì)胞PFC抗體試驗表明，大蒜提取液幾乎能完全抑制胸腺摘除引起的免疫功能低下。大蒜素還能明顯提高淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率及T淋巴細(xì)胞酸性α-醋酸萘酯(ANAB)陽性率的作用，使中樞淋巴器官和外周淋巴器官增殖，增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能[4,5]。大蒜素作為一種免疫調(diào)節(jié)劑，在抗CMV感染模型中，能增強(qiáng)小鼠巨噬細(xì)胞功能，通過上調(diào)IFN-γ水平而發(fā)揮抗CMV感染效應(yīng)[6]。Ghazaanfari(2000)報道，大蒜新素可增強(qiáng)Th1細(xì)胞分化并發(fā)揮免疫效應(yīng)[7]，Lamm等(2001)報道，大蒜新素能夠刺激淋巴細(xì)胞增殖及增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬功能，刺激釋放IL-2，IFN-γ和Th1類細(xì)胞因子[8]；在人醫(yī)臨床抗腫瘤研究中，大蒜提取物能促進(jìn)IL-2和IFN-γ的分泌，增強(qiáng)NK細(xì)胞和淋巴細(xì)胞活性[9]。

本試驗在肉雞日糧中添加不同水平的大蒜素，通過生長發(fā)育期主要免疫器官重量和T淋巴細(xì)胞陽性率指標(biāo)的測定，對大蒜素影響肉雞免疫系統(tǒng)進(jìn)行了初步探討，從而為大蒜素對肉雞生產(chǎn)中的應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗動物及分組 將72只1日齡AA肉雞隨機(jī)分成4個組，每組設(shè)3個重復(fù)，每個重復(fù)6只雞。試驗期采用網(wǎng)上平養(yǎng)，免疫與飼養(yǎng)管理按肉仔雞飼養(yǎng)管理的常規(guī)程序進(jìn)行，飼養(yǎng)6周。

1.2 大蒜素 大蒜素(純品)由山東省飼料監(jiān)察所提供。

1.3 試驗日糧 按NRC(1994)肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，配制玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧，其配方組成及營養(yǎng)水平見表1。I組飼喂基礎(chǔ)日糧為對照組，II、III、IV組分別在基礎(chǔ)日糧中添加12.5mg/kg、37.5mg/kg及62.5mg/kg的大蒜素。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平 (%)

1.4 免疫程序與飼養(yǎng)管理 免疫程序：7日齡新城疫Lasota系凍干苗點眼滴鼻，12日齡法氏囊疫苗點眼滴鼻，21日齡法氏囊疫苗點眼滴鼻，28日齡新城疫Lasota系凍干苗肌肉注射。網(wǎng)上平養(yǎng)，自由采食和飲水，試驗期6周。

1.5 樣品采集與處理 于21、35日齡，每個重復(fù)隨機(jī)取2只(公母各1只)處死后剖開腹腔剝離法氏囊、脾臟和胸腺并稱重；于28、42日齡，每個重復(fù)隨機(jī)取2只(公母各1只)翅靜脈采血，將采集的血液加肝素抗凝。

1.6 測定指標(biāo)和方法 （1）測定指標(biāo)：①免疫器官相對重量＝免疫器官重(mg)/活重(100g)。②血液中T淋巴細(xì)胞陽性率的測定，將28、42日齡抗凝血1ml，當(dāng)日用酸性α-醋酸萘酯酶(ANAE)染色法[10]測定。（2）測定方法：①主要試劑：淋巴細(xì)胞分離液(由上海試劑二廠提供)。2.5%的戊二醛(固定液)，在0.01mol/L pH值7.4磷酸鹽緩沖液9ml中加入25%戊二醛1ml，混合，置4℃冰箱中保存?zhèn)溆?。副品紅液：將副品紅4g加入2 mol/L鹽酸100ml，37℃溶解過濾，4℃冰箱中保存。4%亞硝酸鈉溶液：取亞硝酸鈉400mg溶于蒸餾水10ml中，臨用前配制。六偶氮副品紅溶液：取所配制的亞硝酸鈉溶液3ml，慢慢滴入副品紅溶液3ml中，邊滴邊攪拌，此時有刺激性氣體產(chǎn)生。充分混合1min后備用。α-醋酸萘酯溶液：2g溶于丙酮100ml。1/15mol/L pH7.6磷酸鹽液(甲液：KH2PO49.08g加蒸餾水至1000ml。乙液：Na2HPO49.74g加蒸餾水至1000ml)。取甲液13ml，加入乙液87ml，即為1/15mol/LpH7.6磷酸鹽液。反應(yīng)液：1/15mol/LpH7.6磷酸鹽液89ml，緩慢加入六偶氮副品紅溶液6ml，緩慢加入α-醋酸萘酯溶液2.5ml，充分混勻，調(diào)pH5.8~6.0，臨用前配制。甲基綠染色液：甲基綠1g置37℃溶解于100ml蒸餾水中，4℃冰箱中保存?zhèn)溆?。②方法：分離淋巴細(xì)胞：取抗凝血1ml，加入1ml Hank’s 液稀釋，然后將其加到含有2ml淋巴細(xì)胞分離液的離心管中，1500rpm離心10min，將懸浮的淋巴細(xì)胞取出，用Hank’s液洗滌后，加少量Hank’s液搖勻。制片：取上述細(xì)胞懸液1滴，加到潔凈玻片上，涂片，自然干燥。固定染色：將制備的細(xì)胞涂片用2.5%戊二醛4℃固定10min，流水沖洗，待干。將玻片置于盛有反應(yīng)液的染色缸內(nèi)，37℃孵育1h，取出用水沖洗，待干。復(fù)染：用甲基綠染色液染30S，水洗，吹干。油鏡下觀察計數(shù)。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 用SPASS統(tǒng)計軟件進(jìn)行方差分析，用鄧肯氏法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 免疫器官重量 肉雞21、35日齡法氏囊、脾臟和胸腺的相對重量。測定結(jié)果見表2。

表2 肉雞21、35日齡法氏囊、脾臟和胸腺的相對重量(mg/100g)

注：同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同者表示差異顯著(P<0.05)；無肩標(biāo)者表示差異不顯著(P>0.05)。

表2中，21日齡法氏囊、脾臟的相對重量各組間相比無顯著差異(P>0.05)，但有隨大蒜素添加水平升高而增加的趨勢；胸腺相對重量III、IV組比對照組顯著增加(P<0.05)。35日齡法氏囊相對重量組間相比，II、III、IV組比對照組顯著增加(P<0.05)；脾臟相對重量，IV組顯著高于其余各組(P<0.05)；胸腺相對重量雖組間差異不顯著(P>0.05)，但隨大蒜素添加量升高有增加的趨勢。

試驗結(jié)果顯示，日糧中添加大蒜素對肉雞法氏囊、脾臟和胸腺發(fā)育有促進(jìn)作用。生長前期對胸腺發(fā)育影響最明顯，生長后期對法氏囊和脾臟的發(fā)育影響最明顯。35日齡上述免疫器官相對重量值與21日齡比較，法氏囊和脾臟明顯降低，胸腺有所提高。

2.2 T淋巴細(xì)胞陽性率 測定結(jié)果見表3。

表3 肉雞28、42日齡的T淋巴細(xì)胞陽性率 (%)

注：同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同字母表示差異顯著(P<0.05)；相同字母表示差異不顯著(P>0.05)。

由表3分析：28和42日齡，肉雞的T淋巴細(xì)胞陽性率組間相比，III、IV組比對照組顯著升高(P<0.05)。IV組T淋巴細(xì)胞陽性率最高。42日齡肉雞T淋巴細(xì)胞陽性率與28日齡相比有降低的趨勢，這與后期免疫器官相對重量降低的趨勢一致。

3 討論

3.1 大蒜素對肉雞法氏囊發(fā)育的影響 本試驗添加大蒜素對肉雞免疫器官發(fā)育的影響表明，21日齡肉雞試驗組法氏囊的相對重量比對照組高，35日齡肉雞法氏囊相對重量顯著高于對照組，由于法氏囊是禽類B淋巴細(xì)胞發(fā)育成熟的地方，大蒜素通過影響法氏囊的發(fā)育，促進(jìn)B淋巴細(xì)胞的生長，從而提高肉雞的免疫功能。肉雞生長后期法氏囊相對重量較前期降低，B淋巴細(xì)胞生長受阻，免疫機(jī)能降低。

3.2 大蒜素對肉雞脾臟發(fā)育的影響 大蒜素對脾臟發(fā)育的影響表明，在免疫后14d，大蒜素3個處理組脾臟相對重量都高于對照組，免疫后28d，大蒜素3個處理組脾臟相對重量也都高于對照組，而且IV組脾臟相對重量顯著高于對照組。說明大蒜素有延緩脾臟萎縮的作用。

3.3 大蒜素對肉雞胸腺發(fā)育的影響 大蒜素對胸腺的影響表明，在免疫后14d，大蒜素3個處理組雞的胸腺相對重量都高于對照組，而且III、IV組顯著高于對照組；免疫后28d，大蒜素3個處理組雞的胸腺相對重量也都高于對照組。由于胸腺是機(jī)體T淋巴細(xì)胞發(fā)育的地方，因此，與對照組相比，大蒜素3個水平都有不同程度的促進(jìn)胸腺發(fā)育的功能，促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖和成熟，延緩胸腺的萎縮，維持機(jī)體的正常免疫功能。

3.4 大蒜素對肉雞T淋巴細(xì)胞陽性率的影響 T淋巴細(xì)胞是細(xì)胞免疫中不斷再循環(huán)的主要成分，在衰老過程中，循環(huán)T細(xì)胞等發(fā)生質(zhì)和量的變化引起免疫潛能的降低[11]，許多資料證明T淋巴細(xì)胞功能下降是機(jī)體老化的主要免疫學(xué)變化，老年人的T淋巴細(xì)胞數(shù)量、單核細(xì)胞反應(yīng)和T淋巴細(xì)胞對最適宜的絲裂原刺激作用，均由于反應(yīng)細(xì)胞的數(shù)目下降和細(xì)胞的倍增能力下降而降低[12]。因此，T淋巴細(xì)胞的數(shù)量、質(zhì)量是否正常，關(guān)系到機(jī)體細(xì)胞的免疫功能。酸性α—醋酸萘酯酶(ANAE)是成熟T細(xì)胞含有的酶，用它識別外周血液中成熟T淋巴細(xì)胞。在一定條件下，T淋巴細(xì)胞陽性率(ANAE+%)反映T淋巴細(xì)胞數(shù)量的變化，很好反映機(jī)體細(xì)胞免疫機(jī)能的高低和評價抗病力的強(qiáng)弱。本試驗在肉雞日糧中添加12.5~62.5mg/kg的大蒜素，明顯提高了肉雞血液T淋巴細(xì)胞陽性率。Ghazaanfari(2000)報道，大蒜新素可增強(qiáng)Th1細(xì)胞分化并發(fā)揮免疫效應(yīng)[7]，Lamm等(2001)報道，大蒜新素能夠刺激淋巴細(xì)胞增殖及增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬功能，刺激釋放IL-2，IFN-γ和Th1類細(xì)胞因子[8]。IL-2，IFN-γ和Th1類細(xì)胞因子介導(dǎo)T淋巴細(xì)胞的大部分效應(yīng)發(fā)揮免疫作用?？梢?，大蒜素能夠促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖和成熟，進(jìn)一步調(diào)節(jié)和提高肉雞細(xì)胞免疫功能。

4 結(jié)論

該試驗中，12.5mg/kg的大蒜素添加量對21日齡脾臟和35日齡胸腺促進(jìn)發(fā)育作用最明顯；37.5mg/kg的大蒜素添加量對35日齡法氏囊促進(jìn)發(fā)育作用最明顯；62.5mg/kg的大蒜素添加量對21日齡法氏囊和胸腺、35日齡脾臟發(fā)育及28、42日齡T淋巴細(xì)胞增殖促進(jìn)作用最明顯，且除35日齡脾臟外，37.5mg/kg的大蒜素添加量與62.5mg/kg的大蒜素添加量對21日齡法氏囊和28、42日齡T淋巴細(xì)胞增殖差異不大。綜上，不同添加量的大蒜素可不同程度地促進(jìn)21、35日齡肉雞免疫器官發(fā)育和28、42日齡肉雞血液T淋巴細(xì)胞增殖和成熟。

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（2011–12–12）

S816.75

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1007-1733(2012)03-0007-03