• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    超高壓結合酶法消減南美白對蝦蛋白過敏原研究

    2012-10-28 01:46:20謝丹丹胡志和張博洋宿文晶
    食品科學 2012年8期
    關鍵詞:白對蝦木瓜過敏原

    謝丹丹,胡志和*,薛 璐,張博洋,宿文晶,方 緣

    (天津市食品生物技術重點實驗室,天津商業(yè)大學生物技術與食品科學學院,天津 300134)

    超高壓結合酶法消減南美白對蝦蛋白過敏原研究

    謝丹丹,胡志和*,薛 璐,張博洋,宿文晶,方 緣

    (天津市食品生物技術重點實驗室,天津商業(yè)大學生物技術與食品科學學院,天津 300134)

    以南美白對蝦為研究對象,提取水溶性蝦蛋白,采用超高壓法、超高壓處理后再用木瓜蛋白酶水解、超高壓下直接酶解等方法消減其過敏原蛋白,用間接酶聯(lián)免疫吸附法檢測過敏原消減效果,確定消減過敏原的條件。結果表明:采用超高壓法處理,其最佳條件為壓力150MPa、溫度45℃、保壓時間35min,產物抗原抗體反應的OD492nm值為0.1997;高壓結合木瓜蛋白酶水解法最佳條件為:350MPa、溫度45℃、保壓時間20min,產物抗原抗體反應的OD492nm值為0.0492;超高壓下直接用木瓜蛋白酶處理,其最佳條件為:壓力300MPa、溫度45℃、保壓時間35min,產物抗原抗體反應的OD492nm值為0.05。由此可見,高壓對過敏原蛋白有消減作用,先高壓再水解和超高壓下直接酶處理對過敏原的消減效果更好。

    南美白對蝦;高壓法結合酶法;過敏原消減;酶聯(lián)免疫

    隨著社會的進步和全球化進程的發(fā)展,食物過敏性疾病的發(fā)病率越來越高。根據統(tǒng)計,美國大約有6%的幼兒和3.7%的成年人對某些食品過敏[1-2],其中海產品就是引起過敏的食品中的一種[3-4]。有研究表明,學齡兒童中的食物過敏現(xiàn)象呈上升趨勢,相關調查報告顯示,在2007年美國大約有300萬的學齡兒童有食物過敏現(xiàn)象,相比1997年過敏人數(shù)增加了18%,另外還有很多與此相關的報道[5-6]。我國雖然在這方面還沒有進行過比較系統(tǒng)的調查,但近幾年也出現(xiàn)了很多關于食用海產品致敏的報道[7-10]。食物過敏已經嚴重的威脅到人類的健康,甚至會對人類的生命安全造成很大的傷害[11]。本研究以南美白對蝦為原料,抽提水溶性蛋白,在消除蝦肉其他成分影響的條件下,研究超高壓法、超高壓處理后再用木瓜蛋白酶水解、超高壓條件下直接用木瓜蛋白酶水解的方法處理海蝦過敏原蛋白,比較其消減效果,為生產低過敏海蝦制品提供一定參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    新鮮活的南美白對蝦 市售;海蝦過敏人血清(3名過敏者混合血清)及非過敏人血清(30名非過敏者血清的混合)天津商業(yè)大學校醫(yī)院,血清置于-25℃冰箱凍存。

    木瓜蛋白酶(papain,0.5~2U/mg)、HRP 標記的羊抗人IgE抗體A9667 美國Sigma公司;其他試劑均為分析純。

    1.2 儀器與設備

    HPP.L3型超高壓設備 天津市華泰森淼生物工程技術有限公司;UV-2100紫外分光光度計 尤尼克儀器有限公司;DK-42型電熱恒溫水浴槽 上海精宏實驗設備有限公司;PB-10 pH計 德國賽多利斯北京有限公司;3-18K型離心機 美國Sigma公司;Scientz-50N冷凍干燥機 寧波新芝生物科技股份有限公司;FA1104N 型電子天平 上海精密科技儀器有限公司;RT-6000 型酶標分析儀 深圳雷杜生命科學股份有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 木瓜蛋白酶活力測定

    在試管中各加入5mL 1%的酪蛋白溶液。測定溫度下預熱10min,加入酶液1mL,搖勻,水浴反應10min,各加入4mL 20%的三氯乙酸溶液終止反應,搖勻,水浴放置30min,然后過濾,濾液用紫外法測定。空白對照是在酪蛋白溶液中先加三氯乙酸,再加酶液,其他過程相同[12]。

    1.3.2 過敏原的提取

    將南美白對蝦去頭去尾去殼去腸線后放在勻漿機中勻漿,每克組織用1mL的生理鹽水來懸浮,懸浮液置于冰上5min后加入4倍體積冷丙酮(—20℃預冷過夜),充分混勻,放在 0℃作用 30min,期間混勻數(shù)次。4℃、10000r/min離心15min,將沉淀物移至干凈濾紙上,分散并自然風干,即為丙酮粉。丙酮粉與1mol/L KCl抽提液(含0.5mmol/L DTT)按1:10(m/V)的比例抽提過夜,4℃、10000r/min離心15min,取上清液,沉淀物與抽提液按1:10(m/V)抽提4h,離心取上清液,將兩次的上清合并后透析過夜,再冷凍干燥,置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆肹13-14]。將該蛋白與包被液(100mL含0.16g Na2CO3,0.29g NaHCO3)配成質量分數(shù)1%的溶液,即為待測物。

    1.3.3 間接酶聯(lián)免疫檢測方法

    包被抗原時每個樣品做6個平行孔,在酶標板上每孔加100μL待測物,置于4℃包被過夜。用洗液洗5次,每次3min,拍干。每孔加封閉液200μL(100mL PBST含1g BSA),37℃水浴3h,洗滌后拍干,每孔加入100μL一抗(用封閉液稀釋20倍的過敏人血清),37℃水浴2h,洗滌后拍干,加入用HRP 標記的羊抗人IgE(用封閉液稀釋200倍的二抗),37℃水浴2h。洗滌拍干,每孔加鄰苯二胺100μL,37℃顯色15min,每孔加50μL終止液(2mol/L H2SO4),最后在492nm波長下測定OD值[15]。

    1.3.4 高壓條件對木瓜蛋白酶活力的影響

    壓力對木瓜蛋白酶活性的影響:采用溫度40℃,保壓時間20min,改變壓力(0、100、200、300、500MPa);溫度對木瓜蛋白酶活性的影響:采用壓力200MPa,保壓時間20min,改變溫度(20、30、40、60℃);保壓時間對木瓜蛋白酶活性的影響:采用溫度40℃、壓力200MPa,改變保壓時間(10、20、30、50min)。

    1.3.5 高壓法對南美白對蝦過敏原蛋白消減效果的影響

    1.3.5.1 單因素試驗

    采用保壓時間20min、溫度40℃,改變壓力(100、200、300、500MPa);采用保壓時間20min、壓力200MPa,改變溫度(20、30、40、60℃);采用壓力200MPa、溫度40℃,改變保壓時間(10、20、30、50min)對過敏蛋白進行處理。將處理的產物進行冷凍干燥,再通過ELISA進行檢測。

    1.3.5.2 高壓法對南美白對蝦過敏原蛋白消減條件優(yōu)化

    根據單因素試驗結果,以壓力大小、溫度以及保壓時間為影響因素,以492nm波長處的OD值為考察目標(每組做6個平行,取均值),進行L9(33)正交試驗。因素水平見表1。

    表1 高壓法消減過敏原正交試驗因素水平表Table 1 Factors and levels of orthogonal array design for UHP treatment when used alone

    1.3.6 高壓處理后再用酶法消減蝦過敏原蛋白

    1.3.6.1 單因素試驗

    以壓力大小、溫度以及保壓時間為影響因素。分別采用保壓時間20min、溫度40℃,改變壓力(100、200、300、500MPa);保壓時間20min、壓力300MPa,改變溫度(20、30、40、60℃);壓力300MPa、溫度40℃,改變保壓時間(10、20、30、50min)對過敏蛋白進行處理。將處理完的產物進行冷凍干燥,然后對每個條件的產物按照溫度60℃、pH6.5、底物質量濃度3g/100mL、酶與底物比1:100的條件用木瓜蛋白酶水解3h,再將水解產物離心后冷凍干燥,然后用ELISA檢測。

    1.3.6.2 高壓處理后再用酶法消減蝦過敏原蛋白條件優(yōu)化

    根據單因素試驗結果,以壓力大小、溫度以及保壓時間為影響因素,以492nm波長處的OD值為考察目標(每組做6個平行,然后取均值),進行L9(33)正交試驗,因素水平見表2。

    表2 高壓條件下酶解過敏原正交試驗因素水平表Table 2 Factors and levels of orthogonal array design for UHP treatment when used before papain hydrolysis

    1.3.7 高壓條件下用木瓜蛋白酶水解消減蝦過敏原蛋白

    將酶與蝦蛋白同時進行高壓處理,在1.3.4節(jié)和1.3.6節(jié)試驗結果基礎上,以壓力大小、溫度以及保壓時間為影響因素,以492nm波長處的OD值為評價指標(每組做6個平行,然后取均值),進行L9(33)正交試驗。因素水平見表3。

    表3 高壓條件下酶解過敏原正交試驗因素水平表Table 3 Factors and levels of orthogonal array design for UHP treatment when used concurrently with papain hydrolysis

    1.3.8 數(shù)據處理

    應用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行分析,所有數(shù)據用均數(shù)±標準差表示(±s)表示,P<0.05,差異顯著;P>0.05,差異不顯著。

    2 結果與分析

    2.1 高壓條件對木瓜蛋白酶活性的影響

    2.1.1 壓力對木瓜蛋白酶活性的影響

    將木瓜蛋白酶在不同壓力下于40℃處理20min,其活性變化見圖1。

    由圖1可知,壓力對木瓜蛋白酶的活力有影響,當木瓜蛋白酶在0~500MPa、40℃下處理20min,隨著壓力的增加,木瓜蛋白酶的活性呈先上升后下降的趨勢,在200MPa的壓力作用下活性最高。

    圖1 40℃、20min條件不同壓力對木瓜蛋白酶活力影響Fig.1 Effect of different pressure levels on papain activity at 40 ℃ for 20 min

    2.1.2 溫度對木瓜蛋白酶活性的影響

    由圖2可知,當木瓜蛋白酶在20~60℃、200MPa下處理20min,隨著溫度的增加,木瓜蛋白酶的活性逐漸降低。根據方差分析,在95%的置信區(qū)間,溫度為20、30、40、60℃對木瓜蛋白酶活性的影響沒有顯著性差異。

    2.1.3 保壓時間對木瓜蛋白酶活性的影響

    圖3 200MPa、40℃條件不同保壓時間對木瓜蛋白酶活性的影響Fig.3 Effect of different pressure dwell time on papain activity under 200 MPa at 40 ℃

    由圖3可知,當木瓜蛋白酶在40℃、200MPa處理0~50min,隨著保壓時間的增加,木瓜蛋白酶的活性先增加后下降。當保壓時間為10min時,木瓜蛋白酶的活性最高。根據方差分析,在95%的置信區(qū)間,10、20min與不加壓時的酶活存在顯著性差異;20、30、50min與10min存在顯著性差異; 10、20、30min與50min均存在顯著性差異。

    2.2 高壓法對南美白對蝦過敏原蛋白消減效果的影響

    2.2.1 高壓條件單因素試驗

    在對蝦蛋白進行高壓處理時,控制壓力、溫度和保壓時間,其過敏原消減結果見圖4。

    圖4 壓力(A)、溫度(B)和保壓時間(C)對過敏原消減作用的影響Fig.4 Efects of pressure level, temperature and pressure dwell time on allergen elimination

    由圖4可知,在上述條件下,處理產物與抗體反應的OD492nm值較陽性對照的OD492nm值都有所降低。當壓力不同時,壓力200MPa時,處理產物與抗體反應的OD492nm值(0.3490)較低;當溫度不同時,溫度40℃時,處理產物與抗體反應的OD492nm值(0.3490)較低;當保壓時間不同時,時間30min時,處理產物與抗體反應的OD492nm值(0.2863)較低。

    2.2.2 高壓法消減蝦過敏原蛋白條件優(yōu)化

    由表4可知,通過高壓處理蝦蛋白所得的產物,經酶聯(lián)免疫檢測,得出3種因素對OD值的影響大小依次為A>B>C,即壓力>溫度>保壓時間,較好的試驗方案為A1B3C3,即壓力150MPa、溫度45℃、保壓時間35min,此條件下處理產物與抗體反應的OD492nm值為0.1977。該值雖不在正常人血清與抗體反應的OD492nm值范圍內,但是較陽性對照已經有很大程度的降低,說明超高壓技術對蝦蛋白中過敏原的消減起到了一定的作用。

    表4 正交試驗條件下高壓處理過敏原的消減結果(±s)Table 4 Experimental scheme and results of orthogonal array design for UHP treatment when used alone (±s)

    表4 正交試驗條件下高壓處理過敏原的消減結果(±s)Table 4 Experimental scheme and results of orthogonal array design for UHP treatment when used alone (±s)

    實驗號 A壓力/MPa B溫度/℃ C保壓時間/min 平均OD492nm 1 1(150) 1(35) 1(25) 0.2608±0.0266 2 1 2(40) 2(30) 0.2654±0.0232 3 1 3(45) 3(35) 0.1977±0.0147 4 2(200) 1 2 0.2610±0.0155 5 2 2 3 0.2568±0.0161 6 2 3 1 0.2850±0.0163 7 3(250) 1 3 0.3342±0.0189 8 3 2 1 0.3238±0.0260 9 3 3 2 0.2858±0.0221 K1 0.7239 0.8560 0.8696 K2 0.8028 0.8460 0.8122 K3 0.9438 0.7685 0.7887 k1 0.2413 0.2853 0.2899 k2 0.2676 0.2820 0.2707 k3 0.3146 0.2560 0.2629 R 0.0733 0.0293 0.0270最優(yōu)水平 A1 B3 C3

    2.3 高壓處理后再用酶法消減蝦過敏原蛋白的效果

    2.3.1 高壓處理后再用酶法消減蝦過敏原蛋白單因素試驗

    由圖5可知,用高壓處理蝦蛋白,然后對每個條件的產物按照溫度60℃、pH6.5、底物質量濃度3g/100mL、酶與底物比1:100(質量比)的條件進行水解3h,水解產物與抗體反應的OD492nm值較陽性對照的OD492nm值都有所降低。當壓力300MPa時,產物與抗體反應的OD492nm值(0.0493)較低;溫度40℃時,產物與抗體反應的OD492nm值(0.0493)較低;保壓時間20min時,產物與抗體反應的OD492nm值(0.0493)較低。

    圖5 壓力(A)、溫度(B)和保壓時間(C)對過敏原消減作用的影響Fig.5 Eliminating effects of different time on allergen under 300 MPa at 40 ℃

    2.3.2 高壓處理后采用酶法消減蝦過敏原蛋白條件優(yōu)化

    表5 高壓處理后采用酶法消減蝦過敏原蛋白正交試驗結果(±s)Table 5 Experimental scheme and results of orthogonal array design for UHP treatment when used before papain hydrolysis (±s)

    表5 高壓處理后采用酶法消減蝦過敏原蛋白正交試驗結果(±s)Table 5 Experimental scheme and results of orthogonal array design for UHP treatment when used before papain hydrolysis (±s)

    試驗號 A壓力/MPa B溫度/℃ C保壓時間/min 平均OD492nm 1 1(250) 1(35) 1(15) 0.0525±0.0041 2 1 2(40) 2(20) 0.0497±0.0055 3 1 3(45) 3(25) 0.0500±0.0043 4 2(300) 1 2 0.0495±0.0063 5 2 2 3 0.0527±0.0034 6 1 0.0507±0.0063 7 3(350) 1 3 0.0508±0.0035 8 3 2 1 0.0510±0.0028 2 3 2 0.0492±0.0097 K1 0.1522 0.1983 0.1542 K2 0.1529 0.1535 0.1484 K3 0.1510 0.1499 0.1535 k1 0.0507 0.0661 0.0514 k2 0.0510 0.0511 0.0495 k3 0.0503 0.0500 0.0512 R 0.0007 0.0161 0.0019最優(yōu)水平 A3 B3 C2 9 3 3

    由表5可知,通過高壓處理蝦蛋白所得的產物,再經過木瓜蛋白酶水解(按照溫度60℃、pH6.5、底物質量濃度3g/100mL、酶與底物比1:100的條件),其水解產物經酶聯(lián)免疫檢測,得出3種因素對OD492nm值的影響大小依次為B>C>A,即溫度>保壓時間>壓力,較好的試驗方案為A3B3C2,即壓力350MPa、溫度45℃、保壓時間20min,此條件下產物與抗體反應的OD492nm值為0.0492。該值在正常人血清與抗體反應的OD值范圍內。

    2.4 高壓條件下用木瓜蛋白酶水解消減蝦過敏原蛋白條件優(yōu)化

    表6 高壓下用木瓜蛋白酶消減蝦過敏原蛋白正交試驗結果(±s)Table 6 Experimental scheme and results of orthogonal array design for UHP treatment when used concurrently with papain hydrolysis (±s)

    表6 高壓下用木瓜蛋白酶消減蝦過敏原蛋白正交試驗結果(±s)Table 6 Experimental scheme and results of orthogonal array design for UHP treatment when used concurrently with papain hydrolysis (±s)

    試驗號 A壓力/MPa B溫度/℃ C保壓時間/min 平均OD492nm 1 1(200) 1(40) 1(20) 0.1017±0.0133 2 1 2(45) 2(35) 0.0633±0.0127 3 1 3(50) 3(50) 0.0752±0.0231 4 2(300) 1 2 0.0527±0.0083 5 2 2 3 0.0692±0.0329 6 2 3 1 0.0597±0.0163 7 3(400) 1 3 0.0553±0.0161 8 3 2 1 0.0625±0.0252 9 3 3 2 0.0687±0.0168 K1 0.2402 0.2097 0.2239 K2 0.1816 0.195 0.1847 K3 0.1865 0.2036 0.1997 k1 0.0801 0.0699 0.0746 k2 0.0605 0.065 0.0616 k3 0.0622 0.0679 0.0666 R 0.0196 0.0049 0.013最優(yōu)水平 A2 B2 C2

    由表6可知,通過高壓結合酶法處理蝦蛋白所得的產物,經酶聯(lián)免疫檢測,得出3種因素對OD492nm值的影響大小依次為A>C>B,即壓力>保壓時間>溫度,最優(yōu)試驗方案為A2B2C2,即壓力300MPa、溫度45℃、保壓時間35min,根據此條件進行驗證實驗,產物與抗體反應的OD492nm值為0.05,該值在正常人血清與抗體反應的OD值的范圍內。

    3 討 論

    我國已經有很多學者從南美白對蝦中提取海蝦的主要過敏原,王曉雯[13]、劉光明[16]等用海蝦過敏者血清及陽性血清池鑒定36ku的蛋白為蝦的主要過敏原,吳海明等[17]也對南美白對蝦的主要過敏原進行了研究,認為主要過敏原為99、33、19、14ku的蛋白。

    國內外也有很多關于消減蝦過敏原的報道。顧可飛等[18]利用輻照對蝦過敏原進行消減,發(fā)現(xiàn)蝦過敏原經輻照處理后,免疫活性有所降低。李振興[14]的研究發(fā)現(xiàn)當輻照劑量低于10kGy時,蝦抽提物和蝦肉的免疫活性有稍微增加;當輻照劑量大于10kGy時,蝦過敏原蛋白的免疫活性下降。輻照和加熱聯(lián)合作用可以顯著降低蝦過敏原蛋白的免疫活性,同時他還對超聲波消減蝦過敏原進行了研究,發(fā)現(xiàn)在50℃條件下的超聲波能夠對蝦的免疫活性產生明顯的影響。經過1.5h的處理后,其免疫活性只有未處理蝦肉的20%。李慶麗等[19]發(fā)現(xiàn)麥芽糖、葡萄糖均使蝦過敏原蛋白免疫活性有所降低,其中,麥芽糖使蝦過敏原蛋白活性下降了60%;葡萄糖可使蝦過敏原蛋白活性下降約10%。吳海明等[20]對木瓜蛋白酶水解南美白對蝦蛋白進行了研究,發(fā)現(xiàn)過敏原消減的最佳條件為酶底比1:100,底物濃度3g/100mL,pH6.5,溫度60℃,與過敏人血清反應的OD492為0.054。到目前為止,已有關于高壓法消減大米中過敏原的報道[21],但是國內外還沒有利用高壓結合酶消減蝦過敏原的的研究,本研究將南美白對蝦中水溶性蛋白,利用超高壓法、超高壓處理后再用木瓜蛋白酶水解、超高壓下直接酶解對蝦過敏原進行消減,并且處理后的蛋白沒有以往酶解所產生的苦味,為海蝦脫敏的深入研究提供了一定依據。

    4 結 論

    對提取的南美白對蝦蛋白過敏原,采用超高壓法、超高壓處理后再用木瓜蛋白酶水解、超高壓下直接酶解等方法均有消減作用。采用超高壓處理后再用木瓜蛋白酶水解,以及超高壓下直接酶解,對消減效果更好。

    [1] SAMPSON H A. Update on food allergy[J]. Allergy Clin Immunol,2004, 113(5): 805-819.

    [2] SICHERER S H, MUNOZ-FURLONG A, SAMPSON H A. Prevalence of seafood allergy in the United States determined by a random telephone survey[J]. Allergy Clin Immunol, 2004, 114(1): 159-165.

    [3] WOOD R A. The natural history of food allergy[J]. Pediatrics, 2003,111(3): 1631-1637.

    [4] DERBY C J, GOWLAND M H, HOURIHANE J O. Sesame allergy in Britain: a questionnaire survey of members of the anaphylaxis campaign[J]. Pediatr Allergy Immunol, 2005, 16(2): 171-175.

    [5] DECKER W W, CAMPBELL R L, MANIVANNAN V, et al. The etiology and incidence of anaphylaxis in rochester, minnesota: a report from the Rochester epidemiology project[J]. Allergy Clin Immunol,2008, 122(6): 1161-1165.

    [6] SIMONS F E R. Anaphylaxis epidemic: fact or fiction[J]. Allergy Clin Immunol, 2008, 122(6): 1166-1168.

    [7] LEMIERE C, DESJARDINS A, LEHRER S, et al. Occupational asthma to lobster and shrimp[J]. Allergy, 1996, 51(4): 272-273.

    [8] GOETZ D W, WHISMAN B A. Occupational asthma in a seafood restaurantworker:cross-reactivity of shrimp and scallops[J]. Ann Allergy Asthma Immunol, 2000, 85(6 Pt 1): 461-466.

    [9] 安愛芝, 孫月芹. 食坑蝦引起過敏性休克1例[J]. 醫(yī)學理論與實踐,2003, 16(8): 877.

    [10] 許巖, 許紅. 食用蝦爬子引起過敏性休克1例[J]. 沈陽醫(yī)學院學報,2000, 2(2): 108.

    [11] BOCK S A. Prospective appraisal of complaint of adverse reaction to foods in children during the first 3 years of life[J]. Pediatrics, 1987, 79(5): 683-688.

    [12] 方煥, 生吉平, 吳顯榮. 工業(yè)生產中木瓜蛋白酶的活性檢測方法比較[J]. 食品與機械, 2000(6): 27-29.

    [13] 王曉雯. 中國對蝦主要過敏原的鑒定及性質的研究[D]. 青島: 中國海洋大學, 2008.

    [14] 李振興. 蝦過敏原免疫活性的研究[D]. 青島: 中國海洋大學, 2006.

    [15] 白振宇. 牛奶中主要過敏原的消除及檢測技術的研究[D]. 天津: 天津商業(yè)大學, 2007.

    [16] 劉光明, 沈苑, 曹敏杰, 等. 蝦類過敏原的識別、純化和檢測技術研究[J]. 中國食品學報, 2008, 8(6): 142-148.

    [17] 吳海明, 胡志和, 王超. 免疫印跡法對4種海蝦主要過敏原的鑒定[J].食品科學, 2010, 31(16): 274-277.

    [18] 顧可飛, 高美須, 李春紅, 等. 蝦過敏及蝦過敏原[J]. 食品工業(yè)科技,2007, 28(4): 239-243.

    [19] 李慶麗, 李振興, 林洪, 等. 蝦過敏原活性影響的研究[J]. 食品工業(yè)科技, 2009, 30(1): 79-84.

    [20] 吳海明, 胡志和, 王麗娟. 凡納濱對蝦主要過敏原鑒定及酶法消減技術的研究[J]. 食品科學, 2010, 31(17): 272-276.

    [21] TAKEO K, EMIKO K, SUENO M, et al. Release of allergenic proteins from rice grains induced by high hydrostatic pressure[J]. Agric Food Chem, 2000, 48(8): 3124-3129.

    Elimination of Allergens from Litopenaeus vannamei by Ultra High Pressure Treatment Combined with Enzymolysis

    XIE Dan-dan,HU Zhi-he*,XUE Lu,ZHANG Bo-yang,SU Wen-jing,F(xiàn)ANG Yuan
    (Tianjin Key Laboratory of Food and Biotechnology, College of Biotechnology and Food Science,Tianjin University of Commerce, Tianjin 300134, China)

    Three methods, ultra high pressure (UHP) treatment, UHP treatment followed by papain hydrolysis and concurrent UHP treatment and papain hydrolysis, were developed for eliminating allergens in water soluble protein extracted from Litopenaeus vannamei. One-factor-at-a-time and orthogonal array design methods were used to optimize the operating conditions.The effectiveness of the methods was examined by indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The optimal UHP treatment was performed under 150 MPa and for 35 min at 45 ℃ when used alone, and the OD492 nm of antigen-antibody reaction was 0.1997. When used before papain hydrolysis, the optimal UHP treatment was performed under 350 MPa for 20 min at 45 ℃,and the OD492 nm of antigen-antibody reaction was 0.0492. When used concurrently with papain hydrolysis, the optimal UHP treatment was performed under 300 MPa for 35 min at 45 ℃, and the OD492 nm of antigen-antibody reaction was 0.05. These results demonstrate that UHP treatment followed by papain hydrolysis and their concurrent action were more effective in eliminating allergens in Litopenaeus vannamei. Therefore UHP has eliminating effect on allergens in Litopenaeus vannamei.

    Litopenaeus vannamei;UHP treatment combined with enzymolysis;allergen elimination;ELISA

    TS201.6

    A

    1002-6630(2012)08-0109-06

    2011-10-26

    謝丹丹(1986—),女,碩士研究生,研究方向為食品生物技術。E-mail:xddhjj03090512@163.com

    *通信作者:胡志和(1962—),男,教授,碩士,研究方向為專用功能食品。E-mail:hzhihe@tjcu.edu.cn

    猜你喜歡
    白對蝦木瓜過敏原
    高密度養(yǎng)殖南美白對蝦或者更容易成功
    當代水產(2022年3期)2022-04-26 14:27:38
    同叫“木瓜”,功效不同
    查出過敏原 預防過敏反應
    南美白對蝦大棚高效養(yǎng)殖技術
    當代水產(2019年8期)2019-10-12 08:58:12
    木瓜老奶奶的云
    木瓜老奶奶的云
    學生天地(2019年3期)2019-03-05 08:21:28
    植物幫之木瓜
    澳大利亞發(fā)布強制性過敏原標識問答
    食品與機械(2017年5期)2017-07-05 13:24:47
    南美白對蝦2016年春季生產形勢
    面點制品中食源性過敏原調查
    国产精品影院久久| 亚洲欧美日韩高清专用| av视频在线观看入口| 国产午夜精品久久久久久| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 国产一区二区激情短视频| 国产三级黄色录像| 我要搜黄色片| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 亚洲成人精品中文字幕电影| 国产在线观看jvid| 两个人免费观看高清视频| 老汉色∧v一级毛片| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 我的老师免费观看完整版| 欧美一区二区精品小视频在线| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 在线视频色国产色| 亚洲美女视频黄频| 美女免费视频网站| 午夜福利18| 丰满的人妻完整版| 亚洲av成人av| 国产精品九九99| 久久久久久久午夜电影| 日韩欧美免费精品| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 夜夜爽天天搞| 久久午夜亚洲精品久久| 女人被狂操c到高潮| 亚洲第一电影网av| 国产99久久九九免费精品| 9191精品国产免费久久| 无限看片的www在线观看| 小说图片视频综合网站| 久久国产精品影院| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 国产三级在线视频| www日本黄色视频网| 十八禁网站免费在线| 国产精品日韩av在线免费观看| 亚洲av熟女| 这个男人来自地球电影免费观看| 女警被强在线播放| 成年女人毛片免费观看观看9| 亚洲免费av在线视频| 美女扒开内裤让男人捅视频| 久久热在线av| 精品国内亚洲2022精品成人| 国产伦在线观看视频一区| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 欧美+亚洲+日韩+国产| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 天堂√8在线中文| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 这个男人来自地球电影免费观看| 亚洲五月婷婷丁香| 亚洲男人天堂网一区| 欧美一区二区国产精品久久精品 | 亚洲男人的天堂狠狠| 国内精品久久久久精免费| 最近最新中文字幕大全电影3| 在线看三级毛片| 国产激情久久老熟女| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲av片天天在线观看| www日本在线高清视频| 麻豆久久精品国产亚洲av| 97碰自拍视频| 搡老岳熟女国产| 1024香蕉在线观看| 久久精品综合一区二区三区| 午夜亚洲福利在线播放| 午夜精品在线福利| 桃色一区二区三区在线观看| 成人亚洲精品av一区二区| 国产成人av激情在线播放| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 亚洲熟女毛片儿| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 一a级毛片在线观看| 亚洲国产欧美人成| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 久久午夜亚洲精品久久| 欧美中文日本在线观看视频| 久久久久精品国产欧美久久久| 在线视频色国产色| 老熟妇仑乱视频hdxx| 美女午夜性视频免费| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲七黄色美女视频| 好男人在线观看高清免费视频| 国产激情久久老熟女| 国产午夜精品论理片| 全区人妻精品视频| 2021天堂中文幕一二区在线观| 在线免费观看的www视频| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 久久亚洲真实| 久久久久性生活片| 日韩欧美在线二视频| 91九色精品人成在线观看| 国产一级毛片七仙女欲春2| avwww免费| 听说在线观看完整版免费高清| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产亚洲av嫩草精品影院| 性欧美人与动物交配| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲国产高清在线一区二区三| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 久久久国产精品麻豆| 91国产中文字幕| 亚洲欧美精品综合久久99| 色综合婷婷激情| 动漫黄色视频在线观看| 美女免费视频网站| 九九热线精品视视频播放| 一本久久中文字幕| 精品久久蜜臀av无| 可以在线观看毛片的网站| 超碰成人久久| 免费看a级黄色片| 在线免费观看的www视频| 亚洲国产欧美一区二区综合| 亚洲人与动物交配视频| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 99久久综合精品五月天人人| cao死你这个sao货| 免费看日本二区| 国产亚洲精品一区二区www| 黄色成人免费大全| 亚洲精品一区av在线观看| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲精品在线观看二区| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产一级毛片七仙女欲春2| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 最近视频中文字幕2019在线8| 黄片大片在线免费观看| 中出人妻视频一区二区| 男男h啪啪无遮挡| 在线观看66精品国产| 精品人妻1区二区| 欧美黄色片欧美黄色片| 黄频高清免费视频| 精品一区二区三区四区五区乱码| 国内精品久久久久精免费| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 性色av乱码一区二区三区2| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲av成人精品一区久久| 日本成人三级电影网站| 搡老岳熟女国产| 久久中文字幕人妻熟女| 99精品久久久久人妻精品| 两个人看的免费小视频| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 国产野战对白在线观看| 色综合站精品国产| 欧美乱妇无乱码| 中文在线观看免费www的网站 | 国产主播在线观看一区二区| 我要搜黄色片| 美女 人体艺术 gogo| 色尼玛亚洲综合影院| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产成人系列免费观看| 亚洲av电影在线进入| 91国产中文字幕| 两个人看的免费小视频| 亚洲精品在线美女| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲黑人精品在线| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产精品乱码一区二三区的特点| 两个人的视频大全免费| 一区福利在线观看| 久久中文字幕一级| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| √禁漫天堂资源中文www| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 日韩成人在线观看一区二区三区| 精品国产乱码久久久久久男人| 精品一区二区三区四区五区乱码| 一级毛片精品| 999精品在线视频| 男女床上黄色一级片免费看| 最近最新免费中文字幕在线| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 真人做人爱边吃奶动态| 国产精品综合久久久久久久免费| 国产精品一及| 国产精华一区二区三区| www.熟女人妻精品国产| 日韩精品中文字幕看吧| 美女午夜性视频免费| 黄频高清免费视频| 女人被狂操c到高潮| 人人妻人人看人人澡| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲人成电影免费在线| 怎么达到女性高潮| 亚洲电影在线观看av| 欧美黑人精品巨大| 18美女黄网站色大片免费观看| 国产片内射在线| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 国产在线观看jvid| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 最新在线观看一区二区三区| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 男女午夜视频在线观看| 视频区欧美日本亚洲| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 日日爽夜夜爽网站| 午夜福利在线在线| 嫩草影院精品99| 国产69精品久久久久777片 | 久久人妻av系列| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 精品乱码久久久久久99久播| 1024手机看黄色片| 日日爽夜夜爽网站| 99国产极品粉嫩在线观看| or卡值多少钱| 狂野欧美激情性xxxx| 婷婷亚洲欧美| 午夜免费观看网址| 最近在线观看免费完整版| 久久 成人 亚洲| 无遮挡黄片免费观看| 中国美女看黄片| 精品久久久久久久久久免费视频| 亚洲 国产 在线| 黄频高清免费视频| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产精品一区二区精品视频观看| 在线观看一区二区三区| 午夜福利在线观看吧| 男女那种视频在线观看| 人妻夜夜爽99麻豆av| 日韩欧美三级三区| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产精品野战在线观看| 日韩成人在线观看一区二区三区| 日日干狠狠操夜夜爽| 日韩欧美在线二视频| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲中文av在线| xxxwww97欧美| 国产精品国产高清国产av| 1024香蕉在线观看| 国产av又大| 精品国内亚洲2022精品成人| 999久久久国产精品视频| or卡值多少钱| 久久久国产成人精品二区| 99国产精品一区二区三区| 久久亚洲精品不卡| 这个男人来自地球电影免费观看| 国产99久久九九免费精品| 亚洲 国产 在线| 国产黄色小视频在线观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 色哟哟哟哟哟哟| 听说在线观看完整版免费高清| 校园春色视频在线观看| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 深夜精品福利| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲中文日韩欧美视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲精华国产精华精| 亚洲av成人精品一区久久| 午夜影院日韩av| 一级片免费观看大全| 窝窝影院91人妻| 国产一区在线观看成人免费| 麻豆av在线久日| 窝窝影院91人妻| 色在线成人网| www.999成人在线观看| 中亚洲国语对白在线视频| 一级毛片精品| 午夜影院日韩av| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 中国美女看黄片| 亚洲精品国产一区二区精华液| 精品久久久久久久久久久久久| 午夜激情av网站| 99热只有精品国产| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 丁香欧美五月| 99riav亚洲国产免费| 国产1区2区3区精品| 一级a爱片免费观看的视频| 国产精华一区二区三区| 99国产精品99久久久久| 亚洲欧美日韩无卡精品| а√天堂www在线а√下载| 九色国产91popny在线| 免费在线观看影片大全网站| videosex国产| 久久这里只有精品19| 亚洲一区中文字幕在线| 精品乱码久久久久久99久播| 在线观看免费午夜福利视频| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲,欧美精品.| 欧美日韩福利视频一区二区| 日韩国内少妇激情av| 精品久久久久久,| 亚洲国产欧美一区二区综合| 欧美最黄视频在线播放免费| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| cao死你这个sao货| 一级毛片精品| 色在线成人网| 1024视频免费在线观看| 日韩大尺度精品在线看网址| 宅男免费午夜| 免费在线观看黄色视频的| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 1024香蕉在线观看| 老司机午夜十八禁免费视频| 岛国在线观看网站| 波多野结衣高清作品| 三级毛片av免费| 亚洲专区国产一区二区| 波多野结衣高清作品| 最新在线观看一区二区三区| 成人国产综合亚洲| 亚洲av成人av| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲专区国产一区二区| 国产一区二区激情短视频| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 成人av一区二区三区在线看| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 国产精品永久免费网站| 999精品在线视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 日韩精品中文字幕看吧| 1024香蕉在线观看| 亚洲欧美日韩高清专用| 亚洲一区二区三区不卡视频| 国产主播在线观看一区二区| av福利片在线| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 久久久久久久久久黄片| 免费在线观看黄色视频的| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 在线永久观看黄色视频| 美女 人体艺术 gogo| 激情在线观看视频在线高清| 午夜免费观看网址| 在线看三级毛片| 久久国产精品影院| 亚洲国产欧美人成| 成熟少妇高潮喷水视频| 不卡一级毛片| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 少妇粗大呻吟视频| 日本免费a在线| 欧美大码av| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 久久久久久久精品吃奶| 久久国产精品人妻蜜桃| 97碰自拍视频| 免费搜索国产男女视频| 精品国产乱子伦一区二区三区| av中文乱码字幕在线| 99久久无色码亚洲精品果冻| 日韩大尺度精品在线看网址| 色在线成人网| 成人手机av| 又黄又粗又硬又大视频| 午夜免费观看网址| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| av免费在线观看网站| 国产午夜精品久久久久久| 性欧美人与动物交配| 三级国产精品欧美在线观看 | 日韩欧美免费精品| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 亚洲一区二区三区色噜噜| 成在线人永久免费视频| www.熟女人妻精品国产| 亚洲 国产 在线| 国产成人精品无人区| 国内精品久久久久精免费| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 色综合婷婷激情| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 久久中文字幕人妻熟女| www国产在线视频色| 熟女电影av网| 黄色视频,在线免费观看| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 成熟少妇高潮喷水视频| 我的老师免费观看完整版| 亚洲黑人精品在线| 波多野结衣巨乳人妻| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 精品福利观看| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产99白浆流出| a级毛片a级免费在线| 男女那种视频在线观看| 久久久国产欧美日韩av| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产成人精品久久二区二区免费| 国内揄拍国产精品人妻在线| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 免费在线观看完整版高清| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产一级毛片七仙女欲春2| 欧美成人性av电影在线观看| 两个人看的免费小视频| 国产爱豆传媒在线观看 | 成人欧美大片| 国产精品av视频在线免费观看| 亚洲一区高清亚洲精品| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 久久中文字幕一级| 国产片内射在线| 国产亚洲精品第一综合不卡| 亚洲精品久久国产高清桃花| 午夜日韩欧美国产| 免费av毛片视频| 亚洲一区高清亚洲精品| 999精品在线视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产熟女xx| 香蕉av资源在线| 久久久国产成人精品二区| 午夜视频精品福利| 国产精品久久视频播放| 中文资源天堂在线| 88av欧美| 亚洲avbb在线观看| 久久久久久人人人人人| 久久久久久久精品吃奶| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产私拍福利视频在线观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 黄色成人免费大全| 不卡av一区二区三区| 99热只有精品国产| 麻豆成人av在线观看| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 又黄又爽又免费观看的视频| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 日本五十路高清| 91国产中文字幕| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 香蕉丝袜av| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 亚洲成人中文字幕在线播放| 免费在线观看成人毛片| 麻豆久久精品国产亚洲av| 黄频高清免费视频| 看片在线看免费视频| 91麻豆精品激情在线观看国产| 欧美3d第一页| ponron亚洲| 桃红色精品国产亚洲av| 曰老女人黄片| 精品久久久久久久毛片微露脸| 欧美一级a爱片免费观看看 | 久久久久国内视频| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 久久久水蜜桃国产精品网| 天堂影院成人在线观看| avwww免费| 首页视频小说图片口味搜索| 亚洲专区中文字幕在线| av福利片在线| 妹子高潮喷水视频| 久久久久九九精品影院| 白带黄色成豆腐渣| 精品免费久久久久久久清纯| 在线国产一区二区在线| 黄色视频不卡| 国产探花在线观看一区二区| 日韩欧美三级三区| 天堂影院成人在线观看| 色噜噜av男人的天堂激情| 欧美丝袜亚洲另类 | 啦啦啦观看免费观看视频高清| 国产91精品成人一区二区三区| 美女扒开内裤让男人捅视频| 美女免费视频网站| e午夜精品久久久久久久| 2021天堂中文幕一二区在线观| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 成人特级黄色片久久久久久久| 俺也久久电影网| 久热爱精品视频在线9| 亚洲国产精品成人综合色| 岛国在线观看网站| 听说在线观看完整版免费高清| 亚洲一区二区三区不卡视频| 国产精品爽爽va在线观看网站| 国产av麻豆久久久久久久| 哪里可以看免费的av片| 黄色a级毛片大全视频| 99精品欧美一区二区三区四区| 欧美国产日韩亚洲一区| 日韩精品免费视频一区二区三区| 亚洲一区高清亚洲精品| 午夜福利在线在线| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 亚洲人成伊人成综合网2020| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 后天国语完整版免费观看| 99久久久亚洲精品蜜臀av| av福利片在线| 久久精品人妻少妇| 免费在线观看黄色视频的| ponron亚洲| 一进一出抽搐动态| ponron亚洲| 无人区码免费观看不卡| 好男人电影高清在线观看| 成年免费大片在线观看| 在线观看www视频免费| 后天国语完整版免费观看| 不卡一级毛片| 国产熟女午夜一区二区三区| 精品国产亚洲在线| 亚洲人成电影免费在线| 身体一侧抽搐| 好男人在线观看高清免费视频| 999久久久精品免费观看国产| 黄片大片在线免费观看| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 久久午夜亚洲精品久久| 12—13女人毛片做爰片一| 精品欧美国产一区二区三| 亚洲精品在线美女| 午夜精品在线福利| 三级国产精品欧美在线观看 | 日韩欧美三级三区| 欧美另类亚洲清纯唯美| 搡老岳熟女国产| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| av片东京热男人的天堂| 日韩成人在线观看一区二区三区| 中出人妻视频一区二区| 一a级毛片在线观看| 成年免费大片在线观看| 亚洲美女黄片视频| 成年女人毛片免费观看观看9| av在线播放免费不卡| 欧美另类亚洲清纯唯美| avwww免费| 黄色丝袜av网址大全| 他把我摸到了高潮在线观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲成人国产一区在线观看| 国产久久久一区二区三区| 国产私拍福利视频在线观看| 国产99久久九九免费精品| 91成年电影在线观看| 亚洲一区二区三区不卡视频| 久久精品国产亚洲av高清一级| 婷婷精品国产亚洲av| 男插女下体视频免费在线播放| 亚洲 国产 在线| 国产区一区二久久| 99re在线观看精品视频| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 色综合亚洲欧美另类图片| 正在播放国产对白刺激| 亚洲男人天堂网一区| 国产av麻豆久久久久久久| 一个人免费在线观看的高清视频| 岛国在线观看网站| 麻豆av在线久日| 亚洲一区二区三区色噜噜| 麻豆成人午夜福利视频| 757午夜福利合集在线观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 欧美精品啪啪一区二区三区| 搡老妇女老女人老熟妇| 婷婷亚洲欧美| 男人的好看免费观看在线视频 | 国产熟女午夜一区二区三区| 久久精品人妻少妇| 老司机午夜福利在线观看视频| 日本 av在线| √禁漫天堂资源中文www| 国产黄a三级三级三级人| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 国产成人影院久久av| 午夜福利在线在线|