北京某地區(qū)奶牛隱性乳房炎病原菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

曹授俊 蔡澤川 （北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院 北京 房山 102442）

姜小平 （北京市房山區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心）

奶牛乳房炎是指奶牛的乳房受到了物理、化學(xué)、微生物等因素刺激所引起的一種炎癥，表現(xiàn)為乳汁發(fā)生理化性質(zhì)和細(xì)胞學(xué)性質(zhì)的變化、乳腺組織發(fā)生病理學(xué)變化等。該病是奶牛的常發(fā)病之一，可引起奶牛產(chǎn)奶量下降、奶品質(zhì)降低、奶牛過早淘汰等[1]。發(fā)病奶牛的乳汁中所含有病原微生物及其毒素和治療后的藥物殘留等，對人類健康危害極大[2]。目前已知的奶牛乳房炎的致病性微生物已超過150種，其中包括球菌、桿菌、支原體、真菌、酵母菌和病毒等[3]。大部分是由細(xì)菌感染引起的，如革蘭氏陽性的無乳鏈球菌、金黃色葡萄球菌等，規(guī)模化養(yǎng)殖場中大腸埃希氏菌等革蘭氏陰性菌的感染也很普遍[3]。本試驗(yàn)對北京市某區(qū)的7個(gè)奶牛場進(jìn)行了隱性乳房炎普查、病原細(xì)菌分離鑒定和主要病原菌的體外藥敏試驗(yàn)，對該區(qū)奶牛隱性乳房炎的防控提供了理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 BMT檢測試劑由北京市奶牛公司提供；鮮血營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、卻甫曼瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、細(xì)菌生化微量鑒定管和藥敏紙片購自北京吉普騰生物技術(shù)有限公司。

1.2 隱性乳房炎的普查 用BMT檢測試劑對北京市某區(qū)的7個(gè)奶牛場的1560頭泌乳奶牛（無臨床型乳房炎癥狀）進(jìn)行隱性乳房炎普查。收集奶樣時(shí)，先用高錳酸鉀清洗乳房，棄去頭3把奶，然后以無菌操作方法擠出約10ml奶樣于滅菌試管中。無菌取出2ml于診斷盤上，在每一個(gè)托盤中加入2mlBMT檢測試劑，搖勻，30s后觀察結(jié)果。根據(jù)反應(yīng)現(xiàn)象依照BMT判定標(biāo)準(zhǔn)（表1）進(jìn)行判斷。將陽性乳樣標(biāo)明牛號和日期后，隨即帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病原菌的分離鑒定。

表1 BMT法檢測隱性乳房炎的判斷標(biāo)準(zhǔn) （萬/ml）

1.3 病原菌的分離鑒定 將隱性乳房炎陽性乳樣搖勻后，無菌取適量的試管中部乳樣，涂布于鮮血平板瓊脂上，37℃培養(yǎng)24～48h，觀察細(xì)菌的生長情況及其菌落特征。對不同形態(tài)的菌落進(jìn)行挑菌純培養(yǎng)后，涂片染色鏡檢[4]。根據(jù)菌體形態(tài)和染色特性，初步判定細(xì)菌類屬，然后分別進(jìn)行培養(yǎng)特性和生理生化鑒定。

1.4 主要病原菌的藥敏試驗(yàn) 采用藥敏紙片擴(kuò)散法對主要病原菌進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)，即將分離鑒定到的主要病原菌分別均勻涂布于鮮血瓊脂平板上，然后均勻貼藥敏紙片于其上，置37℃恒溫箱培養(yǎng)24h，測量抑菌圈直徑，進(jìn)行抑菌效果判定。

2 結(jié)果與分析

2.1 隱性乳房炎 普查該區(qū)7個(gè)奶牛場共有奶牛存欄2830頭，其中檢測泌乳奶牛1560頭，采用BMT檢測試劑對其乳樣進(jìn)行隱性乳房炎的排查，結(jié)果顯示陽性乳樣343份（頭），陽性率為21.9%。結(jié)果見表2。2.2 隱性乳房炎的乳汁中細(xì)菌分離鑒定的結(jié)果 隨機(jī)選取隱性乳房炎陽性乳樣40份，涂布在鮮血營養(yǎng)瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)24～48h后，結(jié)果每份乳樣均有細(xì)菌菌落的存在，細(xì)菌檢出率為100%。在不同培養(yǎng)基上主要有3類不同的菌落，對這三類菌落進(jìn)行革蘭氏染色，并于不同培養(yǎng)基上進(jìn)行分離培養(yǎng)，結(jié)果見表3。

表2 奶牛隱性乳房炎感染情況 （頭、%）

對第一類細(xì)菌進(jìn)行兔血漿凝固酶試驗(yàn)、過氧化氫酶試驗(yàn)、三糖鐵試驗(yàn)、0/F試驗(yàn)等；對第二類細(xì)菌進(jìn)行CAMP試驗(yàn)、溶血試驗(yàn)、七葉苷水解試驗(yàn)、美藍(lán)牛乳試驗(yàn)、甘露醇、山梨醇、血清菊糖發(fā)酵試驗(yàn)等；對第三類細(xì)菌進(jìn)行尿素酶試驗(yàn)、糖類發(fā)酵試驗(yàn)、枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)、明膠液化試驗(yàn)等[5]。經(jīng)以上生化鑒定，結(jié)果見表4。

從表4中可看出，在40份隱性乳房炎陽性乳樣中，共分離出細(xì)菌87株，其中金黃色葡萄球菌22株（25.4%）、表皮葡萄球菌11株（12.6%）、腐生葡萄球菌12株（13.8%）、無乳鏈球菌11株（12.6%）、停乳鏈球菌6株（6.9%）、乳房鏈球菌4株（4.7%）、糞鏈球菌1株（1.1%）、大腸桿菌14株（16%）及其他菌6株（6.9%）。由此可見，引起該地區(qū)奶牛隱性乳房炎的主要致病菌為革蘭氏陽性球菌，特別是葡萄球菌屬的金黃色葡萄球菌及鏈球菌。還有相當(dāng)一部分革蘭氏陰性的大腸桿菌。

表3 三類不同菌落在培養(yǎng)基上的生長性狀

表4 隱性乳房炎病原菌的分離鑒定結(jié)果

2.3 藥敏試驗(yàn) 采用藥敏紙片瓊脂擴(kuò)散法對主要病原菌進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)，觀察7種主要病原球菌對7種不同抗生素的敏感性（測量其抑菌圈直徑），結(jié)果見表5。

表5 分離細(xì)菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果（抑菌圈直徑） （mm）

藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，對葡萄球菌屬致病菌，頭孢噻呋鈉、氟哌酸、頭孢拉定以及慶大霉素的抑菌效果較好，卡那霉素和新霉素亦有抑菌效果；對鏈球菌屬致病菌，頭孢噻呋鈉、氟哌酸、頭孢拉定、慶大霉素、卡那霉素和新霉素的抑菌效果較好，而其他抗生素的抑菌效果不理想。

3 討論

（1）本試驗(yàn)采用BMT檢測試劑對北京某區(qū)7個(gè)奶牛場的1560頭泌乳奶牛進(jìn)行隱性乳房炎調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)隱性乳房炎的發(fā)病率約為22%。經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，隱性乳房炎感染率的高低與飼養(yǎng)管理、環(huán)境衛(wèi)生條件、病原菌致病力強(qiáng)弱等因素有直接的關(guān)系。飼養(yǎng)管理較好的兩個(gè)牛場檢出隱性乳房炎陽性數(shù)和強(qiáng)陽性數(shù)均比較少，而飼養(yǎng)管理較差的牛場，不僅檢出率高，陽性數(shù)與強(qiáng)陽性數(shù)也相對較高。由此可見，加強(qiáng)奶牛飼養(yǎng)管理，保持環(huán)境衛(wèi)生清潔，消除環(huán)境因素影響，對預(yù)防和控制奶牛隱性乳房炎的發(fā)生與流行有積極的意義。（2）引起奶牛發(fā)生隱性乳房炎的病原細(xì)菌很多。本試驗(yàn)對北京某區(qū)7個(gè)奶牛場的40份隱性乳房炎乳樣進(jìn)行細(xì)菌的分離鑒定，共檢出87株，主要是革蘭氏陽性球菌，包括金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、無乳鏈球菌、停乳鏈球菌、乳房鏈球菌和大腸桿菌等，這與吳國娟等[9]報(bào)道的結(jié)果基本一致，說明北京地區(qū)奶牛隱性乳房炎致病菌中的細(xì)菌種類變化不大，個(gè)別牛場出現(xiàn)的差異，可能與該奶牛場的衛(wèi)生條件和環(huán)境因素有關(guān)。（3）控制奶牛隱性乳房炎，大多奶牛場都以應(yīng)用抗生素為主。從本次藥敏試驗(yàn)結(jié)果來看，頭孢噻呋鈉、氟哌酸、頭孢拉定、慶大霉素、卡那霉素和新霉素等藥物對隱性乳房炎的主要致病菌具有良好的抑菌效果，但在生產(chǎn)中常用的抗生素如青霉素類、鏈霉素等對該致病菌己產(chǎn)生比較強(qiáng)的耐藥性。頭孢噻呋鈉在臨床上使用治療奶牛隱性乳房炎，具有很好的抑菌效果，但價(jià)格昂貴，尤其個(gè)體養(yǎng)牛戶常負(fù)擔(dān)不起。（4）隨著抗菌藥物在大量使用，耐藥菌株也越來越多，使得藥物療效下降，同時(shí)，抗菌藥物在牛奶中大量殘留直接影響人類健康。因此，使用中藥防治[10]奶牛乳房炎，如使用公英散、炎康注射液等中藥制劑，能調(diào)節(jié)奶牛全身機(jī)能，提高機(jī)體免疫力，尤其對奶牛隱性乳房炎有明顯的治療作用。