三七及屏邊三七花粉不同貯藏條件生活力測定

孫玉琴，黃天衛(wèi)，楊 莉，韋美麗，王朝梁，陳中堅

（1.文山學院 三七研究院，云南 文山 663000；2.文山華信三七股份有限公司，云南 文山 663000）

花粉是種子植物的雄配子體，在有性繁殖中發(fā)揮著重要作用。采集的花粉和貯存的花粉，在使用之前必須作生活力的鑒定，以估價花粉是否有授精能力。在農業(yè)和林業(yè)的常規(guī)育種工作中，為了進行人工輔助授粉和雜交授粉，通常需要早期采集和儲藏花粉，尤其是在雜交育種工作中，為解決親本花期不一致和遠距離雜交的問題，更需要保存生活的花粉［1］。

三七［Panax notoginseng（Burk.）F.H.Chen］及屏邊三七（P.stipuleanatus）屬五加科人參屬植物，三七由于長期的人工栽培，病蟲害比較嚴重［2］，屏邊三七為三七的近源野生種，具有較強的抗病性。但人工栽培三七與屏邊三七花期不遇，為探尋是否可以利用雜交育種手段選育三七抗病新品種，為三七的育種工作提供一條新途徑，筆者對不同貯藏條件下二者的花粉生活力進行測定，以便了解二者的花粉貯藏壽命。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗材料采自文山學院三七研究院硯山試驗場內種植的二年生三七，三年生三七及種質資源圃內的多年生屏邊三七的花粉，采樣后分別保存在普通冰箱的4 ℃保鮮層及-20 ℃冰凍層中。

1.2 方法

1.2.1 染色液的配制

花粉測定采用噻唑藍（MTT）染色法，稱取0.1 g MTT，溶解于10 mL配置好的5%的蔗糖溶液中，搖勻置于冰箱中避光保存。

1.2.2 染色測定操作過程

（1）取少數花粉置于載玻片上，加1～2滴MTT溶液，蓋上蓋玻片

（2）將制片在室溫下放置15 min，然后在低倍鏡下觀察。凡是染成紅色的花粉，其生活力為強，淡紅的次之，無色的為不具活力的花粉或不育花粉。

（3）觀察3個制片，每片取5個視野，統(tǒng)計100粒，然后計算花粉的活力百分率。

2 結果與分析

2.1 不同貯藏條件下三七花粉壽命比較

不同貯藏條件下二年生三七、三年生三七花粉壽命比較情況見表1。由表1可以看出，三年生三七花粉貯藏壽命長于二年生三七花粉。三七花粉在冰凍條件保存，花粉從有活力至活力完全喪失的時間約80 d，保鮮條件下，二年生三七花粉活力維持時間約45 d左右，三年生三七花粉活力維持時間約60 d左右。二年生花粉保鮮貯藏23 d，花粉活力降低了49.42%，冰凍貯藏30 d，花粉活力降低了53.85%（見圖1），而三年生三七花粉保鮮貯藏45 d，花粉活力降低了59.53%，冰凍貯藏35 d，花粉活力降低了47.03%（見圖2）。

表1 二年生、三年生三七花粉貯藏壽命表

圖1 二年生三七花粉壽命

圖2 三年生三七花粉壽命

2.2 不同貯藏條件下屏邊三七花粉壽命

不同貯藏條件下屏邊三七花粉生命情況見表2。

由表2可以看出，屏邊三七花粉在保鮮條件下貯藏的時間較冰凍條件下要長，在保鮮條件下屏邊三七花粉從有活力至活力完全喪失的時間約60 d左右，而冰凍條件下貯藏時間僅為35 d左右。屏邊三七花粉在冰凍條件下保存3 d左右時間，花粉活力開始迅速下降，保存一個星期后，花粉活力降低了59.43%（見圖3）。

表2 屏邊三七貯藏壽命表

圖3 屏邊三七花粉壽命

3 結論與討論

（1）栽培三七剛采獲后的花粉活力基數比屏邊三七花粉活力基數低，這與每個花序上的小花數目多少有關，栽培三七平均一個花序上的小花數目遠遠多于屏邊三七，其營養(yǎng)供應遠不如屏邊三七，致使小花采獲的花粉活力基數大大低于屏邊三七。

（2）栽培三七一般人工種植三年即可收獲，三七從栽種的第二年就可以開花結果，故在三七的一個生長周期內同時采收二年生三七花粉和三年生三七花粉比較它們的貯藏時間。比較結果顯示，在保鮮條件下，三年生三七花粉較二年生三七花粉耐貯藏時間稍長，在冰凍條件下，二者相差不大。

（3）屏邊三七花粉的耐貯藏性比栽培三七時間短，雖然花粉活力基數高但經過一段時間貯藏花粉活力迅速降低，可能與栽培三七經過400多年的人工馴化，對環(huán)境的適應性增強，而屏邊三七是從原始森林收集到三七研究所種質資源圃的，人工栽培時間短，對環(huán)境的適應性弱有關，但其生機理制還需進一步研究。

［1］王欽麗，盧龍斗，吳小琴，等.花粉的保存及其生活力測定［J］.植物學通報，2002（ 3）：365-373.

［2］陳昱君，王勇，馮光泉，等.三七病蟲害防治［M］.昆明：云南科技出版社，2006：1-3.