高效液相色譜法測(cè)定保健食品中洛伐它汀的含量

黑龍江 王守萃

洛伐它汀是八十年代上市的新型調(diào)整血脂藥，由于其獨(dú)特的療效，被譽(yù)為治療心血管系統(tǒng)疾病的里程碑，深受廣大患者的歡迎。洛伐他汀最適于治療高膽固醇血癥，尤其伴有LDL增高患者（型)，是首選的調(diào)脂藥?；旌闲透咧Y也可用，也可用于腎病或糖尿病伴有高膽固醇血癥患者。對(duì)顯著增高的高甘油三酯血癥和乳糜微粒血癥效果較差。與膽汁酸螯合劑合用，可增強(qiáng)降膽固醇效應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法來(lái)測(cè)定保健食品中洛伐它汀的含量。

一、實(shí)驗(yàn)部分

（一）儀器、試劑及色譜條件

1.高效液相色譜，帶可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器；

色譜柱：C18柱，4.6mm×250mm，5μm，柱溫：30℃。

檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)238nm。

流動(dòng)相：甲醇（色譜純）:水=80:20。

流速：1.0mL/min。

靈敏度：0.002 AUFS。

進(jìn)樣量：10μL。

2.電子天平（0.0001g）；

3.超聲振蕩器；

4.洛伐它汀標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：精密稱(chēng)取0.0100 g洛伐它汀標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用甲醇溶解定容至10mL，此溶液每毫升含洛伐它汀1.0mg，該溶液在（0℃～4℃）條件下保存期為兩個(gè)月。

洛伐它汀標(biāo)準(zhǔn)使用液：吸取洛伐它汀標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液5mL于50mL容量瓶，加甲醇至刻度，然后分別吸取此液0.00mL、0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL于10mL容量瓶中，各加甲醇至刻度，即得洛伐它汀0.00μg/mL、5.00μg/mL、10.00μg/mL、25.00μg/mL、50.00μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液系列。

（二）測(cè)定方法

1.標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法

（1）標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制

分別進(jìn)樣含洛伐它汀 0μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、25μg/mL、50μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液各10μL，進(jìn)行HPLC分析，然后以峰面積為縱坐標(biāo)，以洛伐它汀的含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。（圖1）。

圖1 洛伐它汀標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

（2）樣品測(cè)定方法

取樣品10 g，研磨，混勻，備用。

取上述樣品1.000 g放入10mL的具塞比色管中，加入甲醇至10mL刻度線(xiàn)，超聲提取5min，靜置10min，過(guò)濾膜，待測(cè)。

吸取處理后的試樣溶液10μL進(jìn)行HPLC分析，測(cè)定其峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查得測(cè)定液中洛伐它汀的含量。

（3）結(jié)果計(jì)算

樣品中洛伐它汀含量（mg/kg）按式（1）計(jì)算：

式中：

X—樣品中洛伐它汀的殘留量，單位為毫克每千克（mg/kg）；

C—從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查得測(cè)定液中洛伐它汀的含量，單位為毫克每升（mg/L）；

V—樣品定容體積，單位為毫升（mL）；

m—試樣質(zhì)量，單位為克（g）。

二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論

（一）方法線(xiàn)性考察

將標(biāo)準(zhǔn)系列進(jìn)樣，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算其相關(guān)系數(shù)r=0.9999。說(shuō)明本方法具有良好的線(xiàn)性相關(guān)性。數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。

表1 標(biāo)準(zhǔn)系列數(shù)據(jù)一覽表

（二）方法精密度測(cè)量

濃度為11.6mg/l的洛伐它汀溶液平行測(cè)定6次，求出其標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表2，其標(biāo)準(zhǔn)偏差為6324.27，變異系數(shù)為2.22%。說(shuō)明本方法有較好的測(cè)量精度。

表2 平行測(cè)定結(jié)果一覽表

（三）方法回收率

從實(shí)驗(yàn)可知選用空白樣品進(jìn)行添加洛伐它汀回收率試驗(yàn)。不同添加水平回收率分別為86.34%-93.59%，表中回收率數(shù)值為三次平行測(cè)定結(jié)果的平均值，洛伐它汀在空白試樣中的回收率如下表3。

其中回收率計(jì)算公式：

式中：B———方法回收率(%)；

C實(shí)測(cè)———通過(guò)實(shí)驗(yàn)測(cè)得的濃度；

C添加———添加的洛伐它汀的濃度。

表3 洛伐它汀在保健品中的回收率

三、結(jié)論

（一）以高效液相色譜法測(cè)定保健食品中洛伐它汀含量，準(zhǔn)確度較高。

（二）本方法線(xiàn)性相關(guān)性r=0.9999，變異系數(shù)為2.22%，回收率達(dá)86%以上。