• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    大豆糖蜜中高產(chǎn)乙醇菌株的篩選及其生長(zhǎng)特性研究

    2012-10-16 03:45:12李青川高玉榮
    關(guān)鍵詞:糖蜜酵母菌生物量

    李青川,高玉榮

    (黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)食品學(xué)院,大慶163319)

    在當(dāng)今的經(jīng)濟(jì)發(fā)展中,乙醇廣泛應(yīng)用于化學(xué)工業(yè)、食品、醫(yī)藥及軍事等領(lǐng)域[1]。目前,世界各國日益重視能源問題,燃料乙醇由于其可再生性,被認(rèn)為是最有可能代替石油的液體燃料[2]。因此燃料乙醇的需求量迅速增加,市場(chǎng)潛力十分巨大。

    大豆糖蜜是大豆?jié)饪s蛋白生產(chǎn)過程的副產(chǎn)物,其含糖量可達(dá)40%以上[3],目前,大豆糖蜜主要作為飼料添加劑添加于飼料中,未能進(jìn)行大規(guī)模的深加工利用。目前,在我國酒精的產(chǎn)量中,主要以玉米、谷物、薯類、糧食與經(jīng)濟(jì)作物發(fā)酵[4]。利用大豆糖蜜發(fā)酵生產(chǎn)乙醇,不僅有利于緩解我國糧食緊張的壓力,降低生產(chǎn)成本,而且能促進(jìn)大豆?jié)饪s蛋白生產(chǎn)企業(yè)副產(chǎn)品的有效利用。

    優(yōu)良的酵母菌株是決定乙醇產(chǎn)量的重要因素。為了獲得適合利用大豆糖蜜進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)乙醇的菌株,擬從大豆糖蜜中,篩選發(fā)酵性能優(yōu)良的乙醇生產(chǎn)菌株,并進(jìn)行生長(zhǎng)特性的研究,以期為以大豆糖蜜為原料發(fā)酵生產(chǎn)乙醇提供高產(chǎn)菌株。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 樣品來源

    大豆糖蜜:黑龍江雙河松嫩生物科技有限公司提供。

    1.1.2 培養(yǎng)基

    1.1.2.1 增殖培養(yǎng)基:自制麥芽汁液體培養(yǎng)基,12 °Brx,自然 pH。

    1.1.2.2 分離培養(yǎng)基(YPD培養(yǎng)基):葡萄糖2%,蛋白胨2%,酵母提取物1%,瓊脂2%,自然pH值,121℃滅菌20 min。

    1.1.2.3 活化培養(yǎng)基:葡萄糖2%,蛋白胨2%,酵母提取物1%,自然pH值,121℃滅菌20 min。

    1.1.2.4 TTC下層培養(yǎng)基:20%糖蜜,瓊脂2%,121℃滅菌20 min。

    1.1.2.5 TTC上層培養(yǎng)基:葡萄糖0.5%,瓊脂1.5%,加水加熱溶解,吸取9.5 mL加入到試管中121℃滅菌20 min,加入5%TTC濃溶液使其濃度為0.5%,混勻。

    1.1.2.6 生長(zhǎng)培養(yǎng)基:經(jīng)3 000 r·min-1離心處理10 min處理后的大豆糖蜜,121℃滅菌20 min。

    1.1.3 主要儀器和設(shè)備

    SYQ·DMSX-280手提式壓力蒸汽消毒器;LRH-150 S恒溫恒濕培養(yǎng)箱;ZQ-X100振蕩培養(yǎng)箱;752紫外可見分光光度計(jì);分析天平(感量0.000 1 g);全玻璃蒸餾器;水浴鍋。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 酵母菌的富集及分離

    吸取1 mL大豆糖蜜液放于加有玻璃珠的20 mL增殖培養(yǎng)基的100 mL三角瓶中,于28℃、100 r·min-1培養(yǎng)24 h。吸取1 mL含菌增殖培養(yǎng)基進(jìn)行十倍梯度稀釋至1×10-6;分別吸取0.1 mL稀釋液涂布于TTC下層培養(yǎng)基上,28±1℃倒置培養(yǎng)3~5 d。

    1.2.2 酵母菌的篩選

    1.2.2.1 TTC平板法初篩

    將融化并冷卻到45~50℃的TTC上層培養(yǎng)基,倒入菌落數(shù)量在100個(gè)左右的TTC平板上,28±1℃培養(yǎng)箱中避光保溫3 h,取顯色效果好的菌株接于YPD固體斜面培養(yǎng)基上[5]。

    1.2.2.2 耐乙醇酵母菌的篩選

    將顯色效果好的菌株斜面2環(huán),接入裝有加有玻璃珠的20 mL增殖培養(yǎng)基中,28℃、100 r·min-1培養(yǎng)24 h。吸取9.5 mL增殖培養(yǎng)基放于試管中,放入杜氏小管并排出氣體。在無菌操作條件下加無水乙醇,使乙醇濃度(v/v)分別為 12%、14%、16%、18%和20%,接種0.5 mL菌液接種于各試管中,28℃培養(yǎng)72 h,每天時(shí)觀察產(chǎn)氣情況,選擇產(chǎn)氣快且量大的菌株作為后續(xù)試驗(yàn),并傳接于分離培養(yǎng)基中[6]。

    1.2.2.3 高產(chǎn)乙醇酵母菌的篩選

    取耐乙醇能力強(qiáng)的菌株的斜面菌種,挑取2環(huán)接入加有玻璃珠的20 mL增殖培養(yǎng)基中,28℃、100 r·min-1培養(yǎng)18 h。錐形瓶中分別裝入45 mL糖濃度為30%的生長(zhǎng)培養(yǎng)基,接種菌懸液5 mL,在28 ℃、100 r·min-1發(fā)酵 24 h 后,靜置發(fā)酵至 72 h,測(cè)定發(fā)酵液中的乙醇含量。

    1.2.3 篩選菌株生長(zhǎng)條件研究

    1.2.3.1 最適生長(zhǎng)糖濃度的測(cè)定

    取篩選出來的高產(chǎn)乙醇的菌株,在增殖培養(yǎng)基經(jīng)28 ℃、100 r·min-1活化培養(yǎng) 18 h后,將 5%(v/v)種子液分別接入糖濃度為2%、4%、6%、8%、10%的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中,裝液量為 40 mL/250 mL,28 ℃、100 r·min-1振蕩培養(yǎng)18 h后,測(cè)定其生物量。

    1.2.3.2 最佳接種量的測(cè)定

    取篩選出來的高產(chǎn)乙醇的菌株,在增殖培養(yǎng)基經(jīng) 28℃、100 r·min-1活化培養(yǎng) 18 h后,分別將1%、2%、3%、4%、5%(v/v)的種子液接入到 1.2.3.1中所確定的最佳糖濃度的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中,裝液量為40 mL/250 mL,28 ℃,100 r·min-1振蕩培養(yǎng)18 h后,測(cè)定其生物量。

    1.2.3.3 最適生長(zhǎng)溫度的測(cè)定

    取篩選出來的高產(chǎn)乙醇的菌株,在增殖培養(yǎng)基經(jīng)28 ℃、100 r·min-1活化培養(yǎng) 18 h后,將 5%(v/v)種子液接入1.2.3.1中所確定的最佳糖濃度的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中,裝液量為 40 mL/250 mL,分別在 24、26、28、30、32℃,100 r·min-1振蕩培養(yǎng)18 h后,測(cè)定其生物量。

    1.2.3.4 最適生長(zhǎng)pH值的測(cè)定

    取篩選出來的高產(chǎn)乙醇的菌株,在增殖培養(yǎng)基經(jīng)28 ℃、100 r·min-1活化培養(yǎng) 18 h 后,將 5%(v/v)種子液接入1.2.3.1中所確定的最佳糖濃度的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中,裝液量為40 mL/250 mL,生長(zhǎng)培養(yǎng)基的初始pH分別調(diào)為 4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0,28 ℃、100 r·min-1振蕩培養(yǎng)18 h后,測(cè)定其生物量。

    1.2.3.5 轉(zhuǎn)速對(duì)酵母菌生長(zhǎng)的影響

    在增殖培養(yǎng)基經(jīng)28℃、100 r·min-1活化培養(yǎng)18 h后,將5%(v/v)種子液接入1.2.3.1中所確定的最佳糖濃度的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中,裝液量為40 mL/250 mL,28 ℃下,分別在 80、100、120、140、160 r·min-1的轉(zhuǎn)速條件振蕩培養(yǎng)18 h后,測(cè)定其生物量。

    1.2.3.6 生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

    將最適接種量的種子增殖培養(yǎng)基培養(yǎng)液接入到最適種子生長(zhǎng)培養(yǎng)基中,最適培養(yǎng)條件下培養(yǎng),每隔2 h測(cè)定其生物量[7]。

    1.3 檢測(cè)方法

    乙醇含量的測(cè)定方法:蒸餾法[8]。

    糖含量的測(cè)定方法:用手持式糖度計(jì)測(cè)定。

    生物量的測(cè)定方法:采用比濁法,將發(fā)酵液混勻后稀釋一定倍數(shù),測(cè)定其在600 nm 的吸光度(OD600)[9]。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 酵母菌的分離篩選

    從大豆糖蜜中共分離得到12 個(gè)平板1 380 株菌供一級(jí)篩選。

    2.1.1 TTC 平板法初篩

    經(jīng)避光保溫培養(yǎng)后,觀察比較TTC 平板中各菌株的顏色深淺,顏色比較深的菌株說明其呼吸酶活力強(qiáng),產(chǎn)酒精能力較強(qiáng),共挑出具有典型酵母菌菌落特征顯色較深的的菌株156 株,進(jìn)行耐乙醇能力的測(cè)定。

    2.1.2 耐乙醇酵母菌的篩選

    從TTC 平板法初篩得到的菌株中篩選耐乙醇能力強(qiáng)的菌株。通過觀察菌株在含不同濃度乙醇的培養(yǎng)基中發(fā)酵程度的強(qiáng)弱,即在杜氏小管中氣泡產(chǎn)生的快慢與多少,可知其對(duì)乙醇耐受能力。到72 h 時(shí)觀察到,各菌株的在20%的乙醇濃度的發(fā)酵管里菌株B1、B2、B3、B5、B6、T1、T2、T4、T5、T6、P11、P14 仍 有著不同的產(chǎn)氣情況,說明這些菌株比其它菌株具有更強(qiáng)的乙醇耐受能力,其產(chǎn)生乙醇的能力也可能會(huì)更大。

    2.1.3 高產(chǎn)乙醇酵母菌的篩選

    對(duì)耐乙醇能力強(qiáng)的菌進(jìn)行產(chǎn)乙醇能力的測(cè)定。由表1 可看出,P14 的乙醇濃度最高,達(dá)到9.07%(v/v)。

    表1 乙醇含量測(cè)定結(jié)果Table 1 The results of the ethanol content determination

    2.2 P14 生長(zhǎng)條件研究

    2.2.1 最適生長(zhǎng)糖濃度的測(cè)定

    酵母菌利用大豆糖蜜中的糖作為生長(zhǎng)所需的養(yǎng)分,糖濃度過低會(huì)導(dǎo)致酵母菌因養(yǎng)分不充足而生長(zhǎng)緩慢,糖濃度過高又會(huì)使培養(yǎng)基的滲透壓增大,從而抑制酵母菌的增殖。由圖1 可看出,大豆糖蜜的糖濃度對(duì)P14 的生長(zhǎng)影響顯著,當(dāng)糖濃度達(dá)到12%時(shí)P14 生長(zhǎng)最旺盛,生物量最大。因此,確定大豆糖蜜糖濃度為12%作為P14 的最適生長(zhǎng)糖濃度。

    2.2.2 最佳接種量的測(cè)定

    種子接種量的大小對(duì)酵母菌的生長(zhǎng)影響顯著。由圖2 可看出,接入不同量的種子液后,經(jīng)過18 h 的培養(yǎng),不同接種量的培養(yǎng)液呈現(xiàn)了不同的OD600 值,接種量為1%~4%時(shí),OD600 值隨接種量的增加而增加,當(dāng)接種量達(dá)到5%時(shí),OD600 值則出現(xiàn)了下降的趨勢(shì)。因此,P14 的最適接種量為4%。

    2.2.3 最適生長(zhǎng)溫度的測(cè)定

    溫度對(duì)菌種生長(zhǎng)影響顯著,低溫生長(zhǎng)速度慢,高溫菌種容易衰老死亡。由圖3 可看出,在不同溫度的條件下經(jīng)過 18 h、100 r ·min-1 的培養(yǎng),26 ℃時(shí)培養(yǎng)液的OD600 值出現(xiàn)了最高值。因此,選26℃作為P14的最佳生長(zhǎng)溫度。

    2.2.4 最適生長(zhǎng)pH 值的測(cè)定

    酵母菌在其生長(zhǎng)過程中,生長(zhǎng)環(huán)境的pH 值過高或過低都會(huì)影響酵母菌細(xì)胞膜表面基團(tuán)的解離,從而進(jìn)一步影響到對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和自身代謝物的分泌。由圖4 可看出,在不同pH 值的培養(yǎng)基中培養(yǎng),隨著pH 值從4.5 增加到7.0 時(shí),在6.0 處出現(xiàn)了最高值,但OD600 值的趨勢(shì)線比較平緩,pH 值對(duì)其影響不顯著。因此,選取6.0 作為P14 的最適生長(zhǎng)pH。這與培養(yǎng)基的自然pH 值接近。

    2.2.5 最佳生長(zhǎng)轉(zhuǎn)速的測(cè)定

    轉(zhuǎn)速是影響到培養(yǎng)基中的可溶性氧含量的另一個(gè)因素,因此培養(yǎng)過程中合適的轉(zhuǎn)速可為酵母菌的快速生長(zhǎng)補(bǔ)充充足的氧分。由圖5 可見,140 r ·min-1時(shí)OD600 值最大,因此選取140 r ·min-1 作為P14 的搖瓶轉(zhuǎn)速。

    2.2.6 生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

    在進(jìn)行發(fā)酵試驗(yàn)時(shí),應(yīng)選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌體,在此階段細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛,代謝活性強(qiáng),繁殖快,個(gè)體形態(tài)、化學(xué)組成、生理特性等均較為穩(wěn)定、一致。由圖6 可看出,菌株P(guān)14 沒有生長(zhǎng)的延滯期,從培養(yǎng)的一開始便進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,當(dāng)培養(yǎng)到16 h 后,OD600 值基本趨于穩(wěn)定;當(dāng)培養(yǎng)到24 h 時(shí),其生物量開始減少,說明從22 h 開始進(jìn)入了衰亡期。由P14 的生長(zhǎng)特性可知,在糖濃度12%的大豆糖蜜培養(yǎng)基中,控制pH 值6.0,發(fā)酵溫度26℃,轉(zhuǎn)速140 r ·min-1,培養(yǎng)16 h 可獲得最佳的種子。

    3 結(jié)論

    3.1 采用TTC 平板法、乙醇耐性測(cè)定以及產(chǎn)乙醇性能三級(jí)篩選,從大豆糖蜜中分離的1 380 株野生菌中,篩選到1 株可耐受20%(v/v)乙醇、初始發(fā)酵的乙醇濃度達(dá)9.07%的菌株P(guān)14。可為大豆糖蜜的發(fā)酵生產(chǎn)乙醇提供優(yōu)良的菌種。

    3.2 研究確定了該菌的最佳生長(zhǎng)條件為糖濃度12%,接種量4%,生長(zhǎng)溫度26℃,pH 6.0,轉(zhuǎn)速140 r ·min-1。在此條件下,培養(yǎng)16 h 后獲得最佳的種子培養(yǎng)液。

    [1] 姚汝華,趙繼倫.酒精發(fā)酵工藝學(xué)[M].廣州:華南理工大學(xué)出版社,1999.

    [2] 易弋,黎婭,容元平,等.耐高溫酒精酵母的篩選[J].廣西工學(xué)院學(xué)報(bào),2009,20(3):26-29.

    [3] 崔元峰,田娟娟,白志明.大豆糖蜜制備酒精工藝的研究[J].中國油脂,2008,33(12):61-63.

    [4] 傅其軍.國內(nèi)外酒精行業(yè)發(fā)展近況[J].廣西輕工業(yè),2005,87(3):12-13.

    [5] 王梅,張彭湃,帥桂蘭,等.TTC 在黃酒酵母選育中的應(yīng)用[J].釀酒,2001,28(5):62.

    [6] 張懷東,劉作易,周禮紅,等.高耐性高產(chǎn)酒精酵母的分離和篩選[J].釀酒科技,2009,31(3):40-42.

    [7] 熊海燕,李瑩.不同果汁發(fā)酵液中酵母菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定及 pH 值的變化[J].農(nóng)產(chǎn)品加工學(xué)刊,2009,10(4):26-27.

    [8] GB/T 15038-2006,葡萄酒、果酒通用分析方法[S].

    [9] 徐大鵬,李云杰,張栩,等.耐高溫酵母菌的篩選及特性[J].生物加工過程,2011,9(3):18-21.

    猜你喜歡
    糖蜜酵母菌生物量
    日糧中添加不同水平的糖蜜對(duì)犢牛生長(zhǎng)性能及增重成本的影響
    中國奶牛(2022年6期)2022-07-01 09:25:18
    甜菜和甘蔗糖蜜的理化特征及其在生豬養(yǎng)殖中的應(yīng)用
    為什么酵母菌既能做面包也能釀酒?
    輪牧能有效促進(jìn)高寒草地生物量和穩(wěn)定性
    糖蜜的飼用價(jià)值及應(yīng)用研究
    兩級(jí)UASB處理糖蜜酒精廢水的效果研究
    生物量高的富鋅酵母的開發(fā)應(yīng)用
    讓面包變“胖”的酵母菌
    基于SPOT-5遙感影像估算玉米成熟期地上生物量及其碳氮累積量
    蜂蜜中耐高滲透壓酵母菌的分離與鑒定
    九色成人免费人妻av| 国产精品伦人一区二区| 一级毛片aaaaaa免费看小| 亚洲av二区三区四区| 国产真实伦视频高清在线观看| 777米奇影视久久| 日韩av在线大香蕉| 极品教师在线视频| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 美女大奶头视频| 国产精品精品国产色婷婷| 精品欧美国产一区二区三| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产男女超爽视频在线观看| 色吧在线观看| 精品欧美国产一区二区三| 国产大屁股一区二区在线视频| 欧美不卡视频在线免费观看| 精品国产三级普通话版| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 美女高潮的动态| 免费看不卡的av| 国产永久视频网站| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产单亲对白刺激| 亚洲欧美日韩东京热| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| a级毛片免费高清观看在线播放| 国产精品嫩草影院av在线观看| 日韩欧美国产在线观看| 全区人妻精品视频| 高清av免费在线| 亚洲最大成人手机在线| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲欧美精品自产自拍| 国产黄a三级三级三级人| 在线 av 中文字幕| 看黄色毛片网站| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 日韩精品青青久久久久久| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产成人精品一,二区| 精品酒店卫生间| 欧美日韩精品成人综合77777| 久久99热这里只频精品6学生| 久久99热6这里只有精品| 欧美高清成人免费视频www| 中文字幕av成人在线电影| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | 1000部很黄的大片| 男女国产视频网站| 麻豆乱淫一区二区| 少妇熟女aⅴ在线视频| 日本与韩国留学比较| 激情 狠狠 欧美| 高清欧美精品videossex| 乱码一卡2卡4卡精品| 久久久久久久久久久免费av| 国产不卡一卡二| a级毛片免费高清观看在线播放| 97精品久久久久久久久久精品| 啦啦啦韩国在线观看视频| 亚洲av日韩在线播放| 亚洲av免费在线观看| 亚洲综合精品二区| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 日韩一区二区视频免费看| 成人毛片60女人毛片免费| 亚州av有码| 性色avwww在线观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 欧美区成人在线视频| 亚洲综合色惰| 久久久久精品性色| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲精品aⅴ在线观看| 亚州av有码| 在线 av 中文字幕| 国产伦一二天堂av在线观看| 少妇丰满av| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产91av在线免费观看| 日本免费在线观看一区| 一级毛片电影观看| 国产精品久久久久久久久免| 精品不卡国产一区二区三区| 高清av免费在线| 国产一级毛片在线| 一个人看的www免费观看视频| 久久这里只有精品中国| 亚洲四区av| 国产成人a区在线观看| 成人毛片60女人毛片免费| 麻豆国产97在线/欧美| 欧美zozozo另类| 99久久人妻综合| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 丰满人妻一区二区三区视频av| 99久久精品国产国产毛片| 国产免费又黄又爽又色| 国产精品福利在线免费观看| 一区二区三区免费毛片| 久久久a久久爽久久v久久| 国产一级毛片七仙女欲春2| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 能在线免费观看的黄片| 伦精品一区二区三区| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产亚洲精品久久久com| 欧美97在线视频| 永久免费av网站大全| 久久久久久久午夜电影| 男人狂女人下面高潮的视频| 国产老妇女一区| 黑人高潮一二区| 日韩亚洲欧美综合| 人人妻人人看人人澡| 欧美日韩在线观看h| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲国产精品成人久久小说| 嘟嘟电影网在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 国产69精品久久久久777片| 三级毛片av免费| 国产成人a区在线观看| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 日韩国内少妇激情av| 熟女电影av网| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 亚洲欧洲日产国产| 午夜福利视频精品| 精品一区二区三区视频在线| 国产精品蜜桃在线观看| 可以在线观看毛片的网站| 国产av码专区亚洲av| 国产黄频视频在线观看| 我的女老师完整版在线观看| 99九九线精品视频在线观看视频| 亚洲四区av| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 久久久久免费精品人妻一区二区| 国产高潮美女av| 天堂√8在线中文| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲成人中文字幕在线播放| 欧美性感艳星| 国产成人a∨麻豆精品| 日本色播在线视频| 成人国产麻豆网| 国产精品三级大全| 欧美成人一区二区免费高清观看| 能在线免费观看的黄片| 一级爰片在线观看| 成人亚洲欧美一区二区av| 精品一区二区三区人妻视频| 99久国产av精品国产电影| 欧美成人一区二区免费高清观看| 欧美成人精品欧美一级黄| 亚洲,欧美,日韩| 免费高清在线观看视频在线观看| 丰满乱子伦码专区| 精品人妻熟女av久视频| 成人美女网站在线观看视频| 精品国产露脸久久av麻豆 | 国产精品女同一区二区软件| 久久国内精品自在自线图片| 最近最新中文字幕大全电影3| av.在线天堂| 亚洲国产欧美在线一区| 日本欧美国产在线视频| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 网址你懂的国产日韩在线| 亚洲熟女精品中文字幕| 成人漫画全彩无遮挡| 精品人妻熟女av久视频| 夜夜爽夜夜爽视频| 精品不卡国产一区二区三区| 哪个播放器可以免费观看大片| 中国国产av一级| 简卡轻食公司| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 亚洲精品色激情综合| 一区二区三区四区激情视频| 国产视频内射| 日韩在线高清观看一区二区三区| 亚洲av日韩在线播放| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 白带黄色成豆腐渣| 午夜福利高清视频| 国产精品三级大全| 午夜爱爱视频在线播放| 国产在线男女| 一区二区三区高清视频在线| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 岛国毛片在线播放| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 99热6这里只有精品| 亚洲色图av天堂| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 中文字幕亚洲精品专区| 男的添女的下面高潮视频| 欧美zozozo另类| 成人特级av手机在线观看| 99热全是精品| 麻豆成人av视频| 国产黄色免费在线视频| 国产成人福利小说| 在线观看av片永久免费下载| 午夜福利高清视频| 美女黄网站色视频| 国产精品久久久久久av不卡| 成人av在线播放网站| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 18+在线观看网站| 中文字幕av成人在线电影| 一级a做视频免费观看| 午夜爱爱视频在线播放| 精品国内亚洲2022精品成人| 91久久精品电影网| 亚洲内射少妇av| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产精品不卡视频一区二区| 中文字幕av成人在线电影| 久久久精品94久久精品| 乱系列少妇在线播放| 亚洲丝袜综合中文字幕| 男女啪啪激烈高潮av片| 91久久精品国产一区二区三区| 亚洲人与动物交配视频| 少妇熟女aⅴ在线视频| 高清av免费在线| 中文字幕免费在线视频6| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 日韩av在线大香蕉| a级一级毛片免费在线观看| 久久这里只有精品中国| 51国产日韩欧美| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 久久99精品国语久久久| 国产在视频线精品| 亚洲无线观看免费| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 一级毛片久久久久久久久女| 欧美潮喷喷水| 精品国产三级普通话版| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 久久久欧美国产精品| 色吧在线观看| 亚洲人成网站在线播| 午夜日本视频在线| 色播亚洲综合网| av专区在线播放| 一级毛片 在线播放| 成人二区视频| 免费高清在线观看视频在线观看| 在线免费十八禁| 搞女人的毛片| 久久久久久久午夜电影| 国产高清三级在线| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 成人鲁丝片一二三区免费| 成年女人看的毛片在线观看| videossex国产| 亚洲在久久综合| 成人特级av手机在线观看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲乱码一区二区免费版| 2021少妇久久久久久久久久久| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| av线在线观看网站| 国产精品无大码| 国产人妻一区二区三区在| 亚洲成人av在线免费| 观看美女的网站| 秋霞伦理黄片| 亚洲精品色激情综合| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 国产黄频视频在线观看| 99热这里只有是精品在线观看| 边亲边吃奶的免费视频| 2021少妇久久久久久久久久久| 久久久久久久久久久免费av| 丝袜美腿在线中文| 欧美高清成人免费视频www| 五月玫瑰六月丁香| av线在线观看网站| 日韩精品有码人妻一区| 久久99热6这里只有精品| 人妻夜夜爽99麻豆av| 一本久久精品| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 嫩草影院入口| 赤兔流量卡办理| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 精品人妻熟女av久视频| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲av男天堂| 国产在线一区二区三区精| 3wmmmm亚洲av在线观看| 欧美3d第一页| av播播在线观看一区| 午夜激情福利司机影院| 大话2 男鬼变身卡| 日韩亚洲欧美综合| 国产精品久久久久久久电影| 国模一区二区三区四区视频| 最近中文字幕2019免费版| 亚洲精品久久午夜乱码| 欧美激情国产日韩精品一区| 一级毛片久久久久久久久女| 特级一级黄色大片| 综合色丁香网| 亚洲欧美日韩东京热| 超碰av人人做人人爽久久| 久久久欧美国产精品| 亚洲欧洲日产国产| 精品一区二区三卡| 国产精品人妻久久久影院| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 亚洲国产色片| 波野结衣二区三区在线| 成人无遮挡网站| 少妇高潮的动态图| 亚洲国产精品成人综合色| 国产午夜精品论理片| 国产高清国产精品国产三级 | 麻豆精品久久久久久蜜桃| 午夜福利高清视频| 免费黄色在线免费观看| 久久热精品热| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产精品综合久久久久久久免费| 麻豆成人午夜福利视频| 精品人妻偷拍中文字幕| 人妻少妇偷人精品九色| 国产午夜福利久久久久久| 丰满少妇做爰视频| 九九在线视频观看精品| 国模一区二区三区四区视频| av天堂中文字幕网| 在线观看免费高清a一片| 国产探花极品一区二区| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 91精品一卡2卡3卡4卡| 有码 亚洲区| 精品久久久噜噜| 丰满人妻一区二区三区视频av| 午夜久久久久精精品| 国产精品久久久久久精品电影| 亚洲av在线观看美女高潮| 亚洲美女视频黄频| 99热这里只有精品一区| 成人国产麻豆网| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 又大又黄又爽视频免费| 久久久久久久大尺度免费视频| 亚洲成人精品中文字幕电影| 国产美女午夜福利| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 久久久色成人| 欧美精品一区二区大全| 亚洲国产色片| freevideosex欧美| 成年免费大片在线观看| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 麻豆av噜噜一区二区三区| 蜜臀久久99精品久久宅男| 免费黄色在线免费观看| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲成人久久爱视频| 中文天堂在线官网| 午夜激情欧美在线| 人人妻人人澡欧美一区二区| 一级av片app| 精品久久久久久久久亚洲| 91精品国产九色| 少妇被粗大猛烈的视频| 高清在线视频一区二区三区| 亚洲18禁久久av| 真实男女啪啪啪动态图| 亚洲av免费在线观看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 色5月婷婷丁香| 18禁在线播放成人免费| 亚洲性久久影院| 日本爱情动作片www.在线观看| 日韩国内少妇激情av| 免费观看无遮挡的男女| 国产男女超爽视频在线观看| 午夜精品在线福利| 久久热精品热| 亚洲一区高清亚洲精品| av播播在线观看一区| 欧美 日韩 精品 国产| 在线观看一区二区三区| 老女人水多毛片| 免费av毛片视频| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 免费看不卡的av| 一级毛片久久久久久久久女| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 97热精品久久久久久| 最近中文字幕2019免费版| 2021少妇久久久久久久久久久| 永久免费av网站大全| 三级毛片av免费| 日本与韩国留学比较| 国产精品蜜桃在线观看| 亚洲怡红院男人天堂| 真实男女啪啪啪动态图| 2018国产大陆天天弄谢| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 男插女下体视频免费在线播放| 黄色日韩在线| 91精品伊人久久大香线蕉| 人体艺术视频欧美日本| 美女cb高潮喷水在线观看| 寂寞人妻少妇视频99o| 亚洲四区av| 久久久亚洲精品成人影院| 麻豆精品久久久久久蜜桃| av国产免费在线观看| av线在线观看网站| 日韩三级伦理在线观看| 成人综合一区亚洲| 国产亚洲最大av| 欧美日本视频| 听说在线观看完整版免费高清| 欧美+日韩+精品| 免费观看无遮挡的男女| 国产在线一区二区三区精| 国产精品av视频在线免费观看| 国产在视频线在精品| 亚洲18禁久久av| 亚洲人成网站在线观看播放| 免费观看性生交大片5| 国产成人精品福利久久| 大香蕉97超碰在线| 国产精品国产三级专区第一集| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 亚洲av.av天堂| 成人一区二区视频在线观看| 听说在线观看完整版免费高清| 黄色一级大片看看| 春色校园在线视频观看| 婷婷色麻豆天堂久久| 18禁动态无遮挡网站| 国产精品一及| 国产午夜精品一二区理论片| 最近中文字幕高清免费大全6| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 老司机影院成人| 神马国产精品三级电影在线观看| 欧美成人精品欧美一级黄| 最新中文字幕久久久久| 夜夜爽夜夜爽视频| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产精品1区2区在线观看.| 国产亚洲精品久久久com| 日韩精品青青久久久久久| 如何舔出高潮| 国产精品人妻久久久影院| 欧美高清成人免费视频www| 成人午夜高清在线视频| 大话2 男鬼变身卡| 成人鲁丝片一二三区免费| 精品国产三级普通话版| 成人一区二区视频在线观看| 免费观看性生交大片5| 高清午夜精品一区二区三区| 久久人人爽人人片av| 久久久久精品久久久久真实原创| videos熟女内射| 久久久精品94久久精品| 国内精品一区二区在线观看| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 91久久精品国产一区二区成人| 日本熟妇午夜| 色综合站精品国产| 中文字幕免费在线视频6| 亚洲欧美日韩无卡精品| 午夜激情欧美在线| 国产永久视频网站| 成年人午夜在线观看视频 | 高清日韩中文字幕在线| av黄色大香蕉| 草草在线视频免费看| 国产91av在线免费观看| av免费观看日本| 国产精品伦人一区二区| av免费观看日本| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 成人国产麻豆网| 日本三级黄在线观看| 99久久精品热视频| 精品久久久久久久久久久久久| 国产精品av视频在线免费观看| 欧美潮喷喷水| 69av精品久久久久久| 精品国产露脸久久av麻豆 | 边亲边吃奶的免费视频| 特大巨黑吊av在线直播| 五月玫瑰六月丁香| 国产成人freesex在线| 亚洲综合精品二区| av播播在线观看一区| 在线观看人妻少妇| 最近视频中文字幕2019在线8| 成人亚洲欧美一区二区av| 在线免费观看不下载黄p国产| 搡女人真爽免费视频火全软件| av专区在线播放| 欧美zozozo另类| 91久久精品电影网| 亚洲久久久久久中文字幕| 九色成人免费人妻av| 黄色一级大片看看| 水蜜桃什么品种好| 久久这里只有精品中国| 国产又色又爽无遮挡免| 午夜福利在线观看吧| freevideosex欧美| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 舔av片在线| 亚洲成人av在线免费| 人妻系列 视频| 99久久中文字幕三级久久日本| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 一级毛片我不卡| 只有这里有精品99| 男女那种视频在线观看| 在线观看美女被高潮喷水网站| 天堂中文最新版在线下载 | 国产日韩欧美在线精品| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 永久免费av网站大全| 亚洲人成网站在线播| 久久精品综合一区二区三区| 老司机影院毛片| a级毛色黄片| 日韩三级伦理在线观看| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产精品熟女久久久久浪| 国产一区二区三区av在线| 亚洲在线观看片| 欧美激情在线99| 日韩一本色道免费dvd| 亚洲久久久久久中文字幕| 综合色av麻豆| 大陆偷拍与自拍| 国产视频内射| 777米奇影视久久| 色综合色国产| 午夜激情福利司机影院| 美女黄网站色视频| 少妇熟女aⅴ在线视频| 精品人妻熟女av久视频| 久久久成人免费电影| 国产又色又爽无遮挡免| 春色校园在线视频观看| eeuss影院久久| 看黄色毛片网站| 婷婷色综合www| 亚洲成人精品中文字幕电影| 免费少妇av软件| 日本免费a在线| 成人毛片a级毛片在线播放| 99久久人妻综合| 国产精品女同一区二区软件| 1000部很黄的大片| 直男gayav资源| 超碰av人人做人人爽久久| 1000部很黄的大片| 久久久久久久久久久丰满| 中国国产av一级| 亚洲av日韩在线播放| 欧美高清性xxxxhd video| 最近视频中文字幕2019在线8| 永久网站在线| 国产久久久一区二区三区| 淫秽高清视频在线观看| 日本-黄色视频高清免费观看| 91精品国产九色| 成人特级av手机在线观看| av.在线天堂| 亚洲人成网站在线播| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 亚洲在久久综合| 国产亚洲av嫩草精品影院| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 三级国产精品片| 亚洲18禁久久av| 亚洲成色77777| 亚洲成人一二三区av| 九色成人免费人妻av| 精品国产露脸久久av麻豆 | 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 精品国内亚洲2022精品成人|