不同產(chǎn)地西紅柿中總黃酮的提取條件研究及含量測量

劉 峰，崔紹華，付國妮

（1.東華工程科技股份有限公司，安徽 合肥 230024；2.安徽農(nóng)業(yè)大學 理學院，安徽 合肥 230036）

不同產(chǎn)地西紅柿中總黃酮的提取條件研究及含量測量

劉 峰1，崔紹華2，付國妮2

（1.東華工程科技股份有限公司，安徽 合肥 230024；2.安徽農(nóng)業(yè)大學 理學院，安徽 合肥 230036）

本文以西紅柿作為研究對象，以蘆丁作為標準品，研究了提取劑乙醇濃度、提取時間、提取溫度等因素對西紅柿中總黃酮提取量的影響.在最佳條件下，采用分光光度法對兩種不同產(chǎn)地西紅柿中的總黃酮含量進行了測定，該法設備簡單、操作方便、準確性高.

西紅柿；總黃酮；提取條件

黃酮類化合物是存在于許多綠色植物中的一類重要的天然有機化合物，廣泛應用于食品添加劑、抗氧化劑、天然色素等，作為新藥開發(fā)的資源也特別值得重視.西紅柿中含有大量的黃酮類化合物[1].因此，西紅柿中黃酮類化合物的提取及含量測定具有一定的現(xiàn)實意義.

目前，國內(nèi)外應用最廣泛的黃酮類化合物的提取方法為溶劑提取法.在測定植物中總黃酮的眾多方法中，可見分光光度法具有簡便、快速、準確的特點，已普遍應用于植物中總黃酮含量的測定[2,3].測定植物中總黃酮的可見分光光度法中常采用硝酸鋁-亞硝酸鈉顯色法，該法價廉、操作簡單、快速準確，可用于總黃酮的定性及定量分析[4,5].因此，本實驗以溶劑提取法提取黃酮類化合物，采用硝酸鋁-亞硝酸鈉體系顯色，對西紅柿中總黃酮的提取條件進行研究，以可見分光光度法測定不同產(chǎn)地西紅柿中的總黃酮含量.

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

西紅柿，購于家樂福超市.

蘆丁、氫氧化鈉、硝酸鋁、亞硝酸鈉、無水乙醇、石油醚均為分析純.

1.2 分析方法

1.2.1 硝酸鋁-亞硝酸鈉顯色法

準確移取一定體積的蘆丁標準溶液或待測液至10mL容量瓶中，加入0.3mL5%的NaNO2，靜置五分鐘后加入0.3mL10%的Al(NO3)3，再靜置五分鐘加入3mL5%的NaOH，定容，搖勻.

1.2.2 最大吸收波長的選擇

圖1 標準曲線

0.06000mg·mL-1的蘆丁標準溶液以硝酸鋁-亞硝酸鈉體系顯色，在440~560nm波長范圍內(nèi)每隔10nm測定其吸光度值，作光吸收曲線.

1.2.3 標準曲線的繪制

選取六種濃度分別為 0.0000、0.01200、0.02400、0.03600、0.04800、0.06000mg·mL-1的蘆丁標準溶液，以硝酸鋁-亞硝酸鈉體系顯色，在最大吸收波長處測其吸光度值，作標準曲線.

1.3 樣品處理

將新鮮的西紅柿洗凈、擦干、切碎，于70℃進行充分干燥，干燥后取出粉碎，過60目篩，將樣品放入250mL的帶塞錐形瓶中備用.用索氏提取法進行脫脂，然后通過回流提取總黃酮.

2 結果與分析

2.1 最大吸收波長的選擇

以0.00mL蘆丁標準溶液為空白對照，按照1.2.2方法進行分析，實驗發(fā)現(xiàn)，最大吸收波長為510nm.

2.2 標準曲線的繪制

在510nm波長處，按照1.2.3方法進行分析，標準曲線如圖1所示.線性回歸方程為y=12.419x+0.0087（y為吸光度、x表示蘆丁的濃度（mg·mL-1），相關系數(shù)r2=0.9994，說明在0.0000-0.06000mg·mL-1濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關系.

2.3 西紅柿中總黃酮的提取條件研究

采用單變量法研究了提取劑乙醇濃度、提取時間和提取溫度對西紅柿中總黃酮提取量的影響.

2.3.1 提取劑乙醇濃度的選擇

分別選用30%、50%、60%、70%、80%的乙醇溶液為提取劑，精確稱取西紅柿粉末1.0000g，按1：30的料液比，在70℃條件下加熱回流1h提取黃酮類化合物，冷卻后過濾，將濾液定容于100mL容量瓶中，然后吸取2.00mL待測液于10mL的容量瓶中，加入1mL無水乙醇，然后以硝酸鋁-亞硝酸鈉體系顯色，在510nm波長處測其吸光度值，結果如圖2所示.

圖2 提取劑乙醇濃度的影響

由圖2可以看到，當乙醇濃度在30%時其吸光度值較小，說明此時提取并不完全，隨著乙醇濃度的增大，吸光度值隨之增大，當乙醇濃度為70%，吸光度值最大.當乙醇濃度繼續(xù)增大時，吸光度值減小，可能是由于乙醇濃度過高時，脂溶性物質(zhì)的溶出量增加，從而導致黃酮類化合物浸出率下降.因此，選擇70%乙醇為最佳提取劑.

2.3.2 提取時間的選擇

固定70%乙醇為提取劑、70℃為提取溫度，分別選取 40、60、80、100、120min 五個提取時間，按照2.3.1中方法進行分析

結果見圖3.

圖3 提取時間的影響

由圖3可以看到，當提取時間為40min時其吸光度值較小，說明此時提取并不完全，隨著提取時間的加長，吸光度值隨著增大，當提取時間增大到60min時，吸光度值最大.當提取時間繼續(xù)增加時，吸光度值基本趨于穩(wěn)定.因此，選擇60min為最佳提取時間.

2.3.3 提取溫度的選擇

固定70%乙醇為提取劑、60min為提取時間，分別選取 30、50、60、70、80℃五個提取溫度，按照2.3.1中方法進行分析

結果見圖4.

圖4 提取溫度的影響

由圖4可以看出，當提取溫度在30℃時其吸光度值較小，說明此時提取并不完全，隨著溫度的升高，吸光度值隨之增大.當提取溫度增大到70℃，吸光度值最大.因此，選擇70℃為最佳提取溫度.

綜上所述，最佳提取條件為：提取劑為70%乙醇、提取時間為60min、提取溫度為70℃.

2.4 不同產(chǎn)地西紅柿中總黃酮含量的測定

在最佳實驗條件下對家樂福超市購買的兩種不同產(chǎn)地西紅柿中的總黃酮類化合物進行定量分析，本地西紅柿中總黃酮含量為3.95mg·g-1，而ST西紅柿則為3.75mg·g-1.

3 結論

本文以單變量法對西紅柿中總黃酮的提取條件-提取劑乙醇濃度、提取時間、提取溫度等影響因素進行了研究.實驗發(fā)現(xiàn)，最佳提取條件為：提取劑乙醇濃度為70%、提取時間為60min、提取溫度為70℃.在最佳條件下對兩種不同產(chǎn)地西紅柿中的總黃酮含量進行了測定，該法快速、簡便、準確.

〔1〕高金燕,宋永剛,毛江華.果蔬中黃酮類物質(zhì)的測定.中國食品添加劑,2007(2):211-213.

〔2〕何書美,劉敬蘭.茶葉中總黃酮含量測定方法的研究[J].分析化學,2007,35(9)：1365-1368.

〔3〕Liu J C,Zhou R Q.Improved meansuration for general flavone of bamboo leaves extract[J].Food Sci.Tech.,2005,7:76-79.

〔4〕Lee K G,Shibamoto T,Takeoka,et a1.Inhibitory efects of plant-derived flavonoids and phenolic acids on malonaldehyde formationfrom efiyl arachidonate [J].J Agric.Food Chem.,2003,51(24):7203-7207.

〔5〕侯麗麗,張守勤,梁清.槐花黃酮提取方法的比較[J].安徽農(nóng)業(yè)科學,2011,39(7):3971-3972.

O652.7

A

1673-260X（2012）07-0001-02

2012年安徽省高等學校省級優(yōu)秀青年人才基金項目（2012SQRL066）；2011年安徽農(nóng)業(yè)大學校青年基金重點項目；安徽農(nóng)業(yè)大學穩(wěn)定和引進人才科研資助項目