不同水平母源硒對黎城大青羊后代公羔睪丸組織抗氧化能力的影響

石 磊任有蛇 張春香朱曉敏施力光岳文斌 雷福林

(1.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，山西太谷 030801；2.山西省黎城種羊場，山西黎城 047600)

母畜的妊娠期和哺乳期對后代的發(fā)育至關(guān)重要，在母畜的妊娠期，母體中的營養(yǎng)物質(zhì)主要通過胎盤轉(zhuǎn)移給后代，而到了哺乳期，乳汁又成為轉(zhuǎn)移營養(yǎng)物質(zhì)的主要載體。動物生殖器官的原始胚基在胚胎的發(fā)育早期就已經(jīng)具備，隨著胚胎的發(fā)育性腺逐漸完成分化。就雄性動物而言，生殖機能的發(fā)育主要經(jīng)歷出生前、出生后的發(fā)育，初情期和性成熟等幾個階段，雄性動物生殖器官在性成熟時基本發(fā)育完全。

硒元素是生物機體必需的微量元素之一，硒在生物體內(nèi)最主要的功能就是其抗氧化作用。硒的攝入量不足時，導(dǎo)致抗氧化能力降低，活性自由基過度產(chǎn)生，細胞中過氧化產(chǎn)物堆積，可導(dǎo)致細胞功能下降。硒營養(yǎng)充分時可以增強機體抗氧化能力，從而抑制過氧化產(chǎn)物和自由基對細胞成分的氧化作用，保持細胞的完整性和正常功能[1-2]。在動物機體中，自由基的過度產(chǎn)生主要通過抗氧化和自由基防御系統(tǒng)來清除，酶組成的系統(tǒng)就是其主要的防御體系之一，其中包括GSHPx、SOD、CAT等。目前，研究者大多通過日糧中直接添加硒元素研究不同硒源對動物機體抗氧化能力的影響[3-5]，然而在妊娠期和哺乳期母畜日糧中添加硒元素，來研究母源硒對后代公羔睪丸組織抗氧化酶活性影響報道卻很少。

本試驗以黎城大青羊妊娠母羊為研究對象，通過在妊娠母羊日糧中添加不同水平的酵母硒，來研究日糧中的酵母硒對妊娠期母羊外周血液中的主要抗氧化酶活性的影響，以探討妊娠母羊血液中抗氧化酶活性和硒含量的變化規(guī)律，為從母源硒角度進一步提高后代羔羊的繁殖性能提供試驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗基礎(chǔ)日糧

由于母羊在整個妊娠期的不同時間段所需的能量水平不同，故基礎(chǔ)妊娠日糧分為妊娠早期與妊娠后期日糧。試驗?zāi)秆驈拈_始妊娠到妊娠期的第60 d飼喂妊娠早期日糧，從妊娠期的第60 d開始至產(chǎn)羔飼喂妊娠后期日糧，從羔羊出生到四月齡飼喂哺乳期日糧。日糧是以粉碎的玉米秸稈和苜蓿干草為主的粗飼料，玉米和豆餅等為主的精料，參照美國NRC（2007）妊娠期肉用山羊的飼養(yǎng)標準配合而成(見表1)。

表1 母羊日糧組成及營養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.2 試驗動物

本試驗在山西省黎城種羊場進行。先預(yù)選體重相近，體況良好和胎次相近的黎城大青羊經(jīng)產(chǎn)母羊160只，采用人工授精的方式進行配種，選擇不再表現(xiàn)發(fā)情征兆的母羊作為正式試驗羊只，按照平均體重相近的原則隨機分為4組。本試驗的研究對象為試驗?zāi)秆蛩a(chǎn)的單胎公羔，羔羊的分組以試驗?zāi)秆虻姆纸M為依據(jù)，分別為對照組 (n=13)、0.5 mg/kg(n=11)、2.0 mg/kg(n=17)和 4.0 mg/kg 組 (n=10)。

1.3 飼養(yǎng)管理

本試驗的試驗期共290 d，所有試驗羊只在試驗前進行驅(qū)蟲，圈舍進行消毒。在預(yù)飼20 d后進入正式試驗期，正式試驗為期270 d，包括妊娠期和哺乳期兩個階段，從母羊產(chǎn)羔后開始飼喂哺乳期日糧，直到羔羊斷奶。試驗羊每日每只定量供給試驗日糧，分別在早06:00和晚18:00分兩次進行等量飼喂，先喂粗飼料，再喂精料，自由飲水。母羊產(chǎn)羔前對圈舍進行消毒，保持通風，并注意產(chǎn)圈的防寒保暖。母羊產(chǎn)羔后立即給羔羊逐只打耳號、標記和分組，并保證每只羔羊及時吃到初乳，羔羊在兩周后訓(xùn)練采食。

1.4 樣品采集與測定

羔羊初生后12 h內(nèi)采集初乳，分別在羔羊1月齡以前，每隔10 d分別采集母羊的乳汁和血液，睪丸樣品在同一天進行采集，采樣時，首先用剪刀剪去陰囊皮膚上的羊毛，碘酒消毒后用手術(shù)刀割開陰囊皮膚，迅速摘取兩側(cè)睪丸，然后進行睪丸樣品的采集。采集的樣品均放置于冰箱中冷凍保存。

硒含量的測定采用簡化的酸消化法進行處理，用移液管準確移取1 ml抗凝血于三角瓶中，加入5 ml濃硝酸，蓋小漏斗冷消化過夜，次日加入1 ml雙氧水，置于電熱板上90℃加熱1 h，再調(diào)至130℃加熱至溶液變?yōu)榍辶翢o色，冷卻后移至50 ml容量瓶中，定容至刻度后用原子熒光光度計（AFS-230E）進行檢測。

1.5 統(tǒng)計分析

用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件對所測定的數(shù)據(jù)進行方差分析，然后通過Duncan's法進行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 硒元素從母體到后代的轉(zhuǎn)移(見表2)

由表2可知，母羊初乳和常乳及血液的硒含量隨著母羊日糧硒含量的增加而逐漸增加，且各組之間差異極顯著（P＜0.01）。在各處理組中，母羊血液中的硒含量極顯著高于其常乳中的硒含量（P＜0.01）；在對照組中，母羊血液中的硒含量顯著高于羔羊血液的硒含量（P＜0.05），但與初乳中的硒含量差異不顯著（P＞0.05），在各硒處理組中，母羊血液的硒含量顯著高于其初乳中的硒含量（P＜0.05），極顯著高于羔羊血液中的硒含量（P＜0.01）。

表2 初乳、常乳和血液中的硒含量

2.2 不同母源硒水平對后代睪丸抗氧化能力和硒含量的影響(見表3)

表3 各處理組羔羊睪丸的抗氧化酶活性及硒含量

表3可見，對照組羔羊睪丸組織中的GSH-Px活性均極顯著低于各硒處理組(P＜0.01)，0.5 mg/kg、2 mg/kg和4 mg/kg組睪丸組織中的GSH-Px活性分別是對照組的1.57、2.06和2.09倍；在硒各處理組中，隨著母羊日糧中硒含量的增加，羔羊睪丸組織中的GSH-Px活性也在逐漸升高；0.5 mg/kg組的GSH-Px活性極顯著低于2 mg/kg和4 mg/kg組（P＜0.01），分別是0.5 mg/kg組的1.31和1.34倍，而這兩組之間差異不顯著（P＞0.05）。對照組睪丸組織的SOD活性均極顯著低于各硒處理組(P＜0.01)，0.5 mg/kg組顯著高于2 mg/kg和 4 mg/kg組（P＜0.05），而這兩個組之間差異不顯著（P＞0.05）。

對照組羔羊睪丸組織中的MDA含量最高，極顯著高于0.5 mg/kg和2 mg/kg組(P＜0.01)，顯著高于4 mg/kg組(P＜0.05)；三個硒處理組中，隨著母羊日糧中硒含量的增加，羔羊睪丸中的MDA含量也在逐漸增加，4 mg/kg組睪丸組織中的MDA含量極顯著高于0.5 mg/kg 組(P＜0.01)，顯著高于 2 mg/kg 組(P＜0.05)。各處理組羔羊中的硒含量隨著母羊日糧硒含量的增加而逐漸升高，且各處理組之間差異顯著(P＜0.05)。

3 討論

3.1 關(guān)于母體與胚胎之間硒的轉(zhuǎn)移

母體中的營養(yǎng)物質(zhì)包括微量元素主要通過胎盤和母乳傳遞給后代，動物血液、組織和乳汁中的硒含量會受到日糧中硒含量的影響，研究發(fā)現(xiàn)妊娠母牛血液中的硒含量與其所產(chǎn)小牛的硒含量存在正相關(guān)[6-8]；妊娠母羊日糧中添加硒，能提高其初乳中的硒含量，在添加后一月，其乳汁中的硒含量也比較高[9]。本試驗也得到類似的結(jié)果，隨著母羊日糧硒含量的增加，其初乳與乳汁中的硒含量也顯著升高，哺乳期母羊血液中的硒含量也呈現(xiàn)出逐漸增加的變化規(guī)律，所生羔羊血液中的硒含量與母羊血液中的硒含量變化規(guī)律相同?？梢钥隙ㄐ律蟠鷻C體中的硒元素與母體的硒狀況有著十分密切的關(guān)系，母體的硒元素也可以通過乳汁的傳遞影響到后代機體組織的硒含量。

3.2 硒與睪丸抗氧化能力

機體組織中抗氧化酶的作用主要是清除體內(nèi)的活性氧自由基，也就是說，正常情況下，自由基為抗氧化系統(tǒng)所中和，一旦自由基的生成超過抗氧化系統(tǒng)的中和能力，脂質(zhì)過氧化反應(yīng)就會傷害到細胞膜的不飽和脂肪酸、蛋白質(zhì)的氨基酸和脫氧核糖核酸中的核苷酸，造成細胞完整性被破壞，MDA就是機體發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物之一，因此對抗氧化酶水平的檢測在于衡量機體清除氧自由基的能力，對MDA含量的檢測在于衡量機體受到自由基攻擊時受損傷的嚴重程度。

從試驗結(jié)果來看，隨著硒含量的增加，睪丸組織的GSH-Px和SOD的活性在逐漸升高，說明睪丸組織的抗氧化能力也在逐漸提高。此外，睪丸組織中MDA的含量也在逐漸升高，說明在硒含量較高的組織中，脂質(zhì)過氧化反應(yīng)也比較劇烈，從而造成了MDA的產(chǎn)生也比較多。分析其原因，可能是由于過量的硒導(dǎo)致自由基的產(chǎn)生，引起了脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，從而使機體的抗氧化系統(tǒng)激活，產(chǎn)生抗氧化酶來抑制脂質(zhì)過氧化。這種機制可能是機體對外界刺激的一種適應(yīng)性調(diào)節(jié)。值得指出的是，對照組的MDA含量顯著高于4 mg/kg組，這說明硒缺乏更容易導(dǎo)致活性氧(ROS)的產(chǎn)生，使組織發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。許多研究也得到了與本試驗類似的結(jié)論[10-12]。因此，母體中的硒元素可以通過胎盤與乳汁轉(zhuǎn)移給后代，適量的硒元素可以提高組織的抗氧化能力，過量的硒元素又會增加脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，造成MDA含量升高，從而對組織細胞造成不良影響。新生羔羊的消化和排泄功能還不太健全，對高硒的耐受力較差，如果直接補硒缺乏相應(yīng)的標準且劑量不易控制，對于羔羊的補硒可以從母體來考慮，但應(yīng)該特別注意母羊日糧中的添加量。

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