黑色素瘤抗原A1和A3蛋白在食管鱗癌組織中的表達及其對預后的判斷價值

梁保華 (開封市第二人民醫(yī)院心胸外科，河南 開封 475002)

食管鱗癌發(fā)生與發(fā)展是多因素綜合作用的結(jié)果。近年研究表明食管鱗癌發(fā)生時機體基因和蛋白均出現(xiàn)明顯變化，并調(diào)節(jié)腫瘤發(fā)生發(fā)展〔1〕。黑色素瘤抗原(MAGE)是腫瘤特異性抗原，其編碼的蛋白經(jīng)抗原提呈細胞加工后，可誘導機體產(chǎn)生殺傷性T淋巴細胞介導的特異性抗腫瘤免疫應答〔1〕。MAGE-A1和-A3是MAGE家庭中最有特征的代表，對多種腫瘤進展均有促進作用〔2〕。關于二者在食管鱗癌表達的關系尚未見報道。本實驗探討食管鱗癌組織MAGE-A1和-A3表達關系，關注其對判斷預后的價值。

1 材料與方法

1.1 臨床材料 我院2006年1月至2001年12月存檔的食管鱗癌標本蠟塊83例為觀察組，年齡46～80(平均56.0)歲，臨床隨訪資料完整，手術前均未有任何放、化療。同時選取同期病理證實為正常食管黏膜組織52例為對照組，年齡45～79(平均55.6)歲。二組在一般資料的比較中，無明顯差別。隨訪3～60(平均21.2)個月。

1.2 方法 MAGE-A1和-A3試劑購自武漢博士德生物技術有限公司，檢測應用免疫組織化學技術SP法，具體步驟:切片后脫蠟，水化，應用3%H2O2去離子水孵育約10 min;經(jīng)高壓修復后分別滴加MAGE-A1和-A3抗體，4℃過夜，PBS沖洗3次;加入二抗，室溫孵育20 min，PBS沖洗3次;加入辣根酶標記的鏈霉卵白素，室溫孵育20～30 min，PBS沖洗3次;DAB顯色;沖洗、復染、脫水、透明、封片〔3〕。全部過程均由同一病理科的主管技師完成，避免人為誤差，嚴格質(zhì)控。

1.3 判定標準 MAGE-A1和-A3陽性染色主要位于細胞質(zhì)，均為棕黃色細顆粒樣著色，于每張切片中均仔細選擇10個腫瘤細胞密度高的高倍鏡視野區(qū)，根據(jù)染色部位和染色細胞所占的百分比進行綜合評分。不著色0分，著色淡1分，著色深2分;著色細胞占總計數(shù)細胞百分率＜5%為0分，5% ～25%1分，26% ～50%2分，＞50%3分。以每張切片著色強度得分乘以著色細胞百分率計為最終得分。＜2分陰性(-)，≥2分陽性。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SAS6.12統(tǒng)計軟件，定性資料比較采用χ2檢驗，并進行相關分析及生存分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組MAGE-A1和-A3表達比較 觀察組與對照組MAGE-A1〔68例(81.93%)vs 13例(25.00%)〕和-A3表達陽性率〔60例(72.29%)vs 16例(30.77%)〕差別顯著(χ2=43.170 2，P＜0.000 1;χ2=22.400 8，P＜0.000 1)。

2.2 MAGE-A1和-A3在觀察組中不同臨床特征中表達比較觀察組中MAGE-A1和-A3表達與Ki67表達、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期均有密切相關。見表1。

表1 MAGE-A1和-A3在觀察組中不同臨床病理特征的表達〔n(%)〕

2.3 觀察組MAGE-A1和-A3表達關系 線性相關分析表明，觀察組MAGE-A1和-A3表達呈正相關(r=0.49，P=0.031 1)。

2.4 食管鱗癌組織中MAGE-A1和-A3與生存的關系 食管鱗癌MAGE-A1和-A3表達與預后相關(P＜0.05)，即MAGEA1和-A3高表達患者預后差。

3 討論

食管鱗癌侵襲和轉(zhuǎn)移是影響生物學行為最重要的因素〔4〕。但是其具體調(diào)節(jié)機制尚不明確。MAGE-A1和-A3是MAGE家族中最早發(fā)現(xiàn)的基因和蛋白，其編碼的蛋白產(chǎn)物在細胞質(zhì)內(nèi)被蛋白水解酶裂解，形成兩個可被遞呈系統(tǒng)識別的與主要組織相容性復合體(MHC)分子相結(jié)合的肽段〔5〕。在機體中，參與抗腫瘤免疫排斥反應的主要角色是T淋巴細胞，而T淋巴細胞活化依賴于對腫瘤特異性抗原的識別，MAGE-A3抗原在腫瘤細胞表面可和MHC類分子特異性結(jié)合成復合物，被自體抗原識別，誘發(fā)細胞增殖。但是，腫瘤細胞有異質(zhì)性，在同一腫瘤內(nèi)部，腫瘤細胞亞群不同而造成了腫瘤細胞生物學特性差異，使各亞群之間在浸潤、轉(zhuǎn)移潛能也有差異。因此，不同個體，不同腫瘤中MAGE-A1和-A3表達可能差別較大〔6〕。

本實驗結(jié)果提示腫瘤發(fā)生過程中，MAGE-A1和-A3可能起某種促進作用，可影響腫瘤增殖及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程，也可能對調(diào)節(jié)細胞黏附性的細胞外基質(zhì)的降解有一定影響，進而促進腫瘤進展〔7〕。由于Ki67表達、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期是食管鱗癌預后相關的重要臨床因素，因此兩種蛋白高表達可能提示腫瘤預后不良，生存分析結(jié)果直接證實了此結(jié)論。本實驗顯示MAGE-A1和-A3蛋白具有正相關性，提示MAGE-A1和-A3有協(xié)同正向作用，由于MAGE-A1和-A3屬于同一家族，具有共同結(jié)構(gòu)和位點，因此其對腫瘤增殖及分化調(diào)控作用可能具有相似性，其也可能參與到人們已經(jīng)尋找到的5條以MAGE/抗原基因為基礎的腫瘤免疫治療途徑中，即抗原遞呈途徑、黑色素瘤接種途徑、基因轉(zhuǎn)染途徑、樹突細胞接種途徑、MAGE抗原肽接種途徑〔8〕，這些通道 MAGE-A1和-A3共同起作用的基礎。MAGE-A1和-A3聯(lián)合檢測為食管鱗癌預后判斷提供了新的方法，且免疫組化技術成熟，應用簡單，臨床可以開展應用。

1 Metzler P，Mollaoglu N，Schwarz S，et al.MAGE-A as a novel approach in the diagnostic accuracy of oral squamous cell cancer:a case report〔J〕.Head Neck Oncol，2009;16(1):39.

2 唐 艷，夏大文，李亞榮，等.以MAGE A1-A6亞型基軛mRNA為特異標記檢測肺癌細胞〔J〕.中國老年學雜志，2008;28(21):2123-5.

3 李德艷，劉愛東，高 峰.MMP-7和E-cad在胃癌組織中表達的臨床價值〔J〕.中國老年學雜志，2011;31(2):185-6.

4 王 麗，陳奎生.MAGE-A3食管鱗癌組織中的表達及與預后的關系〔J〕.現(xiàn)代預防醫(yī)學，2009;36(8):3600-1.

5 吳 晁，陳同鈺，樊祥山，等.食管鱗癌中癌-睪丸抗原NY-ESO-1及MAGE的表達〔J〕.實用癌癥雜志，2007;22(4):341-3.

6 李 佳，潘林娜，張志燕，等.MAGE-A1在食管癌中的表達及其與腫瘤細胞增殖的關系〔J〕.世界華人消化雜志，2007;15(7):706-11.

7 劉愛東，龐久玲，劉士生.胃癌中基質(zhì)金屬蛋白酶-9和CD105表達關系的研究〔J〕.中國老年學雜志，2009;29(7):886-7.

8 裴 斐，李新明，史火喜，等.黑色素腫瘤抗原基因1、3在直腸癌肝轉(zhuǎn)移組織的表達〔J〕.咸寧學院學報(醫(yī)學版)，2010;24(2):96-8.