胃癌組織中Ets－1和E－cad的表達水平及生物學意義

劉慶濱 陳艷昕 黃江梅 張 輝 (秦皇島市第一醫(yī)院普外二科，河北 秦皇島 066000)

Ets基因家族是細胞內最大的信號依賴轉錄調控因子家族之一，Ets-1作為Ets基因家族的重要成員，與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展、浸潤轉移密切相關〔1，2〕。上皮型黏附素(E-cadherin，E-cad)介導細胞黏附，在維持組織器官正常形態(tài)結構方面起重要作用〔3〕。本研究應用免疫組織化學方法，檢測Ets-1與E-cad在胃癌中的表達水平，旨在探討二者在胃癌中表達的相關性。

1 材料與方法

1.1 材料 標本取自秦皇島市第一醫(yī)院病理科，選擇2009年1月至2010年12月手術切除并經病理證實、資料完整的胃腺癌患者蠟塊120例，所有病人術前未經放療和化療，均行區(qū)域淋巴結清掃?；颊吣挲g39～82〔平均(63.5±20.4)〕歲;≥60歲者65例，＜60歲55例;男87例，女33例。按臨床病理特征分組:①分化程度:高、中分化71例，低、未分化49例。②浸潤深度:未侵及漿膜者42例，浸潤至漿膜或侵出漿膜者78例。③淋巴結轉移:無區(qū)域淋巴結轉移31例，有區(qū)域淋巴結轉移89例。④TNM分期:I～Ⅱ期47例，Ⅲ～Ⅳ期73例。另取30例正常胃黏膜組織作對照。

1.2 方法 試劑均購自福州邁新生物技術開發(fā)公司，所有標本均采用免疫組織化學通用型二步法。主要步驟:(1)石蠟切片，常規(guī)脫蠟至水;(2)預染Ets-1的切片置于乙二胺四乙酸(EDTA)緩沖液中修復，預染E-cad的切片置于檸檬酸緩沖液中修復，中低溫微波修復20 min，自然冷卻;(3)3%H2O2室溫孵育10 min，消除內源性過氧化物酶;(4)Ets-1濃度1∶5，E-cad為工作液，4℃冰箱過夜;(5)通用型IgG抗體(Fab段)-辣根過氧化物酶(HRP)多聚體，37℃溫箱孵育0.5 h;(6)二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，顯微鏡下控制反應時間，5～20 min;(7)蘇木精復染，二甲苯透明，封片。用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗做空白對照。

1.3 結果判定 盲法判定結果，每張切片分別由兩位高年資病理醫(yī)師獨立閱片，一致肯定為陽性者方被視為陽性。Ets-1免疫組化結果以細胞質內出現(xiàn)棕黃色顆粒者為陽性細胞，E-cad免疫組化結果以細胞膜上出現(xiàn)棕黃色顆粒者為陽性細胞，每張切片隨機選取10個高倍視野，計數(shù)陽性細胞數(shù)占腫瘤細胞總數(shù)的百分比，以＜10%為陰性表達，≥10%為陽性表達。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行分析，組間比較采用χ2檢驗，相關分析采用Pearson相關分析。

2 結果

2.1 Ets-1的免疫組化染色結果 正常胃黏膜組織中未見陽性表達(0%)，胃癌組織中83例陽性表達(69.2%)，表達于腫瘤細胞質。Ets-1陽性表達與患者性別、年齡無關，而與胃癌的分化程度、浸潤深度和TNM分期呈明顯正相關。見表1。

2.2 E-cad的免疫組化染色結果 E-cad在所有正常胃黏膜上皮組織中均見表達(100%)，主要表達于細胞膜上，部分細胞質中也有一定程度的表達。胃癌組織中47例陽性表達(39.2%)。E-cad陽性表達與患者性別、年齡無關，而與胃癌的分化程度、浸潤深度和TNM分期呈明顯負相關。見表1。

表1 Ets-1和E-cad與胃癌臨床病理特征之間的關系

2.3 Ets-1與E-cad的相關性分析 Ets-1與E-cad在胃癌組織中的表達呈負相關(r=－0.425，P=0.000)。

3 討論

Ets-1是從鳥類白血病病毒E26分離出來的V-ets同源的原癌基因c-Ets-1的表達產物，是Ets家族中具有代表性的轉錄因子。Ets-1基因位于染色體11q23，編碼分子量為54 kD的Ets-1蛋白，已被證實為促癌基因和腫瘤血管生成的轉錄因子〔4〕，與多種腫瘤的侵襲、復發(fā)和轉移密切相關，參與細胞增殖、血管生成等病理生理過程及能量代謝〔5〕。Ets-1通過與細胞外基質重建有關的物質，如尿激酶型纖維蛋白溶酶原活化物、基質金屬蛋白酶等的啟動子或增強子區(qū)域特定的DNA序列結合，調節(jié)其轉錄與表達，降解細胞外基質，使腫瘤細胞黏附性降低并易于游走，有利于腫瘤的浸潤生長和轉移〔6〕。本研究結果顯示，Ets-1在正常胃黏膜組織中未見陽性表達，在胃癌中過表達，并與胃癌的分化程度、浸潤深度和TNM分期呈明顯正相關。提示Ets-1表達增加可能通過影響胃癌細胞尿激酶型纖維蛋白溶酶原活化物、基質金屬蛋白酶等基因的表達，間接或直接提高腫瘤細胞的侵襲和轉移能力，Ets-1可作為腫瘤多途徑治療的新靶點。

E-cad在胚胎的發(fā)生、發(fā)育和維持組織器官正常形態(tài)結構方面發(fā)揮重要作用，其作用失調可導致細胞之間及細胞與基質之間失去穩(wěn)定的聯(lián)系，組織細胞結構改變、功能障礙。腫瘤時，E-cad受β-轉化生長因子等誘導表達降低〔7〕。本研究顯示E-cad在正常胃黏膜上皮組織中均見表達，胃癌時表達缺失，且與胃癌的分化程度、浸潤深度和TNM分期呈明顯負相關，提示胃癌中E-cad陽性表達的患者預后較好，陰性表達時腫瘤細胞黏附性降低，可促進腫瘤的浸潤，E-cad的表達水平對判斷胃癌的預后具有臨床價值〔8，9〕。

Ets-1位于機體多種信號傳導途徑的交叉點，表達增多引起腫瘤細胞凋亡受阻，從而促進腫瘤發(fā)生發(fā)展，同時誘導腫瘤血管發(fā)生和促進腫瘤侵襲能力等。E-cad的啟動子中含有Ets-1反應元件，Ets-1和缺氧誘導因子可以協(xié)同引起E-cad表達失調。本研究顯示Ets-1和E-cad在胃癌中的表達呈負相關，提示二者的負向協(xié)同表達在胃癌的發(fā)生、發(fā)展、分化、浸潤、轉移過程中起重要作用，可通過降低Ets-1的表達和增強E-cad的表達來調控腫瘤的發(fā)生和演進，為胃癌的治療提供新的思路。

1 崔秀娟，胡碧丹，劉善青，等.轉錄調節(jié)因子Ets-1在肺腺癌的表達及其意義〔J〕.臨床肺科雜志，2010;15(6):832-3.

2 王永霞，王金祥，張哲瑩，等.Ets-1在不同食管病變組織中的表達及意義〔J〕.重慶醫(yī)學，2010;39(20):2777-9.

3 Wendt MK，Taylor MA，Schiemann BJ，et al.Down-regulation of epithelial cadherin is required to initiate metastatic outgrowth of breast cancer〔J〕.Mol Biol Cell，2011;22(14):2423-35.

4 劉春麗，張圣林，石新華，等.Ets-1和Hif-1α在喉癌組織中的表達及其意義〔J〕.廣東醫(yī)學，2012;33(4):513-6.

5 劉春麗，張圣林，馬桂琴，等.MMP-1和Ets-1在喉癌組織中的表達及其臨床意義〔J〕.臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2011;25(24):1111-4.

6 李德艷，劉愛東，高 峰.MMP-7和E-cad在胃癌組織中表達的臨床價值〔J〕.中國老年學雜志，2011;31(2):185-6.

7 李德艷，劉愛東，高 峰.COX-2和E-cad在胃癌的表達及意義〔J〕.中國誤診學雜志，2010;10(13):3063-4.

8 王海琴，佘曉玲，霍繼榮，等.Claudin-1和上皮型黏附素在胃癌中的表達〔J〕.中國老年學雜志，2011;31(23):4566-7.

9 王釔力，施華球，劉范君.胃癌患者胃癌組織中基質金屬蛋白酶-11和上皮黏附素的表達及其意義〔J〕.中國老年學雜志，2011;31(8):1326-7.