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    膚瘍寧的處方工藝研究及其對小鼠皮膚燙傷的影響

    2012-09-20 02:29:26董淑弘吳勇杰李文廣高明堂
    衛(wèi)生職業(yè)教育 2012年24期
    關(guān)鍵詞:巴豆蜂蠟麻油

    韓 偉 ,董淑弘 ,吳勇杰 ,李文廣 ,高明堂 ,覃 紅

    (1.定西市衛(wèi)生學校,甘肅 定西743000;2.蘭州大學基礎(chǔ)醫(yī)學院,甘肅 蘭州 730000;3.甘肅省新藥臨床前研究重點實驗室,甘肅 蘭州 730000)

    膚瘍寧軟膏為一臨床驗方,臨床用于治療皮膚燒傷療效顯著。該方是由油煎白芷、伏龍肝、冰片、白礬等組成、用麻油和蜂蠟制成的軟膏劑。白芷具有解熱、鎮(zhèn)痛與抗炎作用[1],由天津第一中心醫(yī)院配制的白芷糊軟膏(白芷、紫草、冰片等)用于燒燙傷有較好的效果[2]。冰片作為一個辛開之品,具有辛散透表之功,能引藥由肌表直達腠理,提示冰片本身可以作為促滲劑應用于經(jīng)皮給藥制劑[3~4]。白礬可清熱毒、燥濕等,具有抗菌消炎、收斂的作用[5]。膚瘍寧軟膏作為驗方,其組方及工藝是否合理,尚待證實。從對祖國醫(yī)學傳統(tǒng)經(jīng)驗方挖掘、提高的思路出發(fā),本實驗研究了膚瘍寧的處方工藝及其對小鼠皮膚燙傷的影響。

    1 材料和方法

    1.1 動物

    昆明種小鼠,由甘肅省醫(yī)學科學研究院實驗動物中心提供。合格證號:醫(yī)動字第14-009。雌雄分籠飼養(yǎng)。

    1.2 藥品和試劑

    所用麻油、麻油加蜂蠟及膚瘍寧各組方由蘭州漢方醫(yī)藥科技有限責任公司提供,批號000704。膚瘍寧分低、中、高3個濃度組,中濃度為擬用于臨床的濃度(見表1)。脫毛劑配制方法:取硫化鈉3份,加適量水攪拌使完全溶解,加1份肥皂粉、7份淀粉,加水至糊狀。微加熱使成半透明狀半流體,冷至室溫備用。濕潤燒傷膏為汕頭經(jīng)濟特區(qū)美寶制藥廠產(chǎn)品,國藥準字Z20000004,批號000403。醋酸氫化可的松軟膏(下稱氫化可的松軟膏)為上海第九制藥廠產(chǎn)品,批號980704。巴豆油致炎合劑由巴豆油2.0%、無水乙醇20.0%、蒸餾水5.0%和乙醚73.0%混合而成[6~7]。丙酮—硫酸鈉溶液配制方法:取無水硫酸鈉1.5 g,溶于蒸餾水150 ml 中,再緩緩向硫酸鈉溶液中加入丙酮350 ml 即成。伊文思藍用生理鹽水配成0.5%濃度備用。

    表1 膚瘍寧各處方中藥物組成及比例

    1.3 儀器

    721 型分光光度計為上海第三分析儀器廠產(chǎn)品,YC-2A 型程控刺激器為四川成都儀器廠產(chǎn)品,F(xiàn)uke DT8900 型數(shù)字式萬用表為深圳市福克儀器有限公司,精度1μ A。

    1.4 造模方法

    1.4.1 巴豆油誘發(fā)的小鼠耳腫模型的制備 小鼠,雌雄各半,體重27~30 g。均先在右側(cè)耳殼正、反兩面均勻涂以0.1 ml 巴豆油致炎合劑誘發(fā)小鼠耳腫[7~8]。

    1.4.2 燙傷致小鼠耳腫模型的制備 小鼠,雌雄各半,體重23~26 g。乙醚麻醉小鼠,將小鼠左耳置70℃水浴中浸兩秒。

    1.5 分組及給藥

    1.5.1 巴豆油誘發(fā)的小鼠耳腫模型組 昆明種小鼠80 只,隨機分為8 組(見表2),涂巴豆油致炎合劑30 min 后在同側(cè)耳殼正、反兩面涂藥。

    表2 巴豆油誘發(fā)的小鼠耳腫模型組實驗動物分組及給藥

    1.5.2 燙傷致小鼠耳腫模型組 昆明種小鼠90 只,隨機分為9 組(見表3)。將小鼠左耳置70℃水浴中浸兩秒,取出后立即在左耳殼正、反兩面涂以藥物。

    表3 燙傷致小鼠耳腫模型組實驗動物分組及給藥

    1.5.3 鎮(zhèn)痛實驗 昆明種小鼠140 只,雄性,體重18~22 g,隨機分為7 組(見表4)。藥物均勻涂于右耳殼內(nèi)、外兩面,于涂藥后30 min、60 min、120 min分別測定右耳殼痛閾值。

    表4 膚瘍寧鎮(zhèn)痛實驗動物分組及給藥

    1.6 指標測定

    1.6.1 小鼠耳腫脹抑制率測定 涂巴豆油致炎合劑致炎4 h 后脫頸椎處死動物,沿耳廓基線剪下雙耳。在兩耳對稱部位用打孔器(內(nèi)徑6.5 mm)打下耳片,以兩耳片重量之差為腫脹度,求出腫脹抑制率[7]。燙傷組小鼠燙傷后90 min 時,靜脈注射0.5%伊文思藍—生理鹽水0.1 ml/10 g,注射染料后20 min 時脫頸椎處死小鼠,同上法求出腫脹抑制率。

    1.6.2 小鼠耳毛細血管通透性測定 取上述耳燙傷各組小鼠左耳片剪碎,浸入4 ml 丙酮—硫酸鈉提取液中,浸泡72小時,3000 rpm 離心10 min,取上清液于595 nm 波長處測光密度(OD595)[9~10]。按伊文思藍標準曲線求出每ml 提取液中的伊文思藍濃度,乘以提取液總體積4 ml 即為每只小鼠耳皮膚伊文思藍的滲出量。用燙傷后伊文思藍的滲出量來反映毛細血管通透性的變化。同時檢測正常對照組小鼠耳片毛細血管漏出的染料量,作為測定正常皮膚毛細血管通透性之參比樣品。

    1.6.3 痛閾測定 用電刺激法。選18~22 g 雄性小鼠,固定者以戴橡膠絕緣手套的手固定小鼠,暴露小鼠右耳。在右耳殼內(nèi)面耳根至耳尖之正中連線左右兩側(cè)皮下各刺入一枚4#針頭,分別為正、負極,兩電極間距為3 mm。兩刺激電極連接到Y(jié)C-2A 型程控刺激器上(四川成都儀器廠),刺激直流脈沖波寬1 ms,頻率50 Hz,串長500 ms。刺激電流從0 開始逐漸增大,直至出現(xiàn)嘶叫。用Fuke DT8900 型數(shù)字式萬用表(深圳市??藘x器有限公司,精度1μA)測程控刺激器輸出端的電流強度,此時的電流強度即為嘶叫閾,以嘶叫閾作為痛閾。

    1.7 統(tǒng)計學方法

    2 結(jié)果

    2.1 對巴豆油誘發(fā)的小鼠耳腫的影響

    2.1.1 膚瘍寧方中固體藥物比例與抗炎強度的關(guān)系(見表5)

    表5 膚瘍寧對巴豆油誘發(fā)的小鼠耳腫的影響

    用藥各組均使巴豆油誘發(fā)的小鼠耳腫明顯減輕。和模型對照組比較,除膚瘍寧高濃度組外,差別均有顯著性。除氫化可的松軟膏組外,以麻油的抗炎作用最強。作用強度由強到弱依次為麻油組>膚瘍寧低濃度組>蜂蠟+麻油組≈膚瘍寧中濃度組>膚瘍寧高濃度組。其中麻油+蜂蠟組與膚瘍寧中濃度組強度接近。膚瘍寧方中隨著固體成分的增加,全方對巴豆油誘發(fā)的小鼠耳腫的抑制率下降,劑量-效應關(guān)系反置。

    2.1.2 處方中麻油比例與處方抗炎強度的關(guān)系 隨著處方中麻油比例增加,對巴豆油誘發(fā)的小鼠耳腫的抑制率增加,兩者呈線性相關(guān)(R2>0.9),且兩者變化高度平行(見圖1)。證明該方中抗炎活性組分為賦形劑麻油,固體各組分對巴豆油誘發(fā)的化學性炎癥無抗炎作用。

    圖1 膚瘍寧方中麻油比例與其對小鼠耳腫抑制率的關(guān)系

    2.2 膚瘍寧對燙傷致小鼠耳腫的影響

    2.2.1 對燙傷誘發(fā)的小鼠耳腫脹的影響(見表6)氫化可的松軟膏組、濕潤燒傷膏組、膚瘍寧中、高濃度組均使燙傷誘發(fā)的小鼠耳腫減輕,但膚瘍寧高濃度組抗炎作用弱于該方中濃度組。各用藥組比較,以膚瘍寧中濃度組減輕燙傷性小鼠耳腫的作用最強。麻油組、麻油+蜂蠟組對燙傷性小鼠耳腫無明顯影響。

    表6 膚瘍寧對燙傷誘發(fā)的小鼠耳腫的影響

    2.2.2 膚瘍寧對燙傷誘發(fā)的小鼠耳皮膚毛細血管通透性增加的影響(見表7) 氫化可的松軟膏組、濕潤燒傷膏、膚瘍寧中、高濃度組均使燙傷誘發(fā)小鼠耳皮膚炎癥組織內(nèi)染料滲出減少。各用藥組比較,以膚瘍寧中濃度組降低燙傷性小鼠耳皮膚毛細血管通透性增加的作用最強。麻油組、麻油+蜂蠟組對燙傷性小鼠耳皮膚毛細血管通透性增加無明顯影響。

    2.3 膚瘍寧對小鼠耳殼皮膚痛閾的影響(見表8)

    和模型對照組比較,麻油組、麻油+蜂蠟組對小鼠耳殼皮膚痛閾均無明顯影響。膚瘍寧軟膏低、中、高濃度組明顯升高小鼠耳殼皮膚痛閾,且有時間相關(guān)性,表明膚瘍寧軟膏有一定的鎮(zhèn)痛作用。

    表7 膚瘍寧對燙傷誘發(fā)的小鼠耳皮膚毛細血管通透性增加的影響

    表8 膚瘍寧對小鼠皮膚痛閾的影響

    3 討論

    本實驗觀察到,用藥各組均使巴豆油誘發(fā)的小鼠耳腫明顯減輕,以麻油組作用最強。作用強度由強到弱依次為麻油組>膚瘍寧低濃度組>麻油+蜂蠟組≈膚瘍寧中濃度組>膚瘍寧高濃度組。其中麻油+蜂蠟組與膚瘍寧中濃度組強度接近。膚瘍寧方中隨著固體藥物的增加,全方對巴豆油誘發(fā)的小鼠耳腫的抑制率下降,劑量—效應關(guān)系反置。分析處方中麻油比例與處方抗炎強度的關(guān)系表明,隨著處方中麻油比例增加,對巴豆油誘發(fā)的小鼠耳腫的抑制率增加,兩者呈線性相關(guān)(R2>0.9),且兩者變化高度平行。提示該方中抗化學性炎癥的活性組分為賦形劑麻油,固體各組分對巴豆油誘發(fā)的化學性炎癥無抗炎作用。對燙傷誘發(fā)的小鼠耳腫,膚瘍寧中、高濃度組均可使其減輕,但膚瘍寧高濃度組抗炎作用弱于該方中濃度組;而麻油組、麻油+蜂蠟組對燙傷性小鼠耳腫無明顯影響。以燙傷小鼠耳皮膚組織內(nèi)伊文思藍滲出量反映皮膚毛細血管通透性的變化,與對照組比較,膚瘍寧中、高濃度組均使燙傷誘發(fā)的小鼠耳皮膚組織內(nèi)染料滲出減少。以膚瘍寧中濃度組減少燙傷性小鼠耳皮膚毛細血管通透性增加的作用最強;麻油組、麻油+蜂蠟組對燙傷性小鼠耳皮膚毛細血管通透性增加無明顯影響。表明膚瘍寧具有抑制燙傷小鼠耳皮膚毛細血管通透性增加的作用。和模型對照組比較,麻油組、麻油+蜂蠟組對小鼠耳殼皮膚痛閾無明顯影響。膚瘍寧低、中、高濃度組明顯升高小鼠耳殼皮膚痛閾,且有時間相關(guān)性,表明膚瘍寧有一定的鎮(zhèn)痛作用。綜上所述,膚瘍寧軟膏中固體組分有鎮(zhèn)痛作用,并對小鼠燙傷性炎癥具有抗炎作用,而對巴豆油誘發(fā)的化學性炎癥無抗炎作用;該方中對巴豆油性化學性炎抗炎的活性組分則為賦形劑麻油。

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