蛋白芯片法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌IgG抗體的診斷價(jià)值

李 影 張東浩

（吉林省結(jié)核病醫(yī)院檢驗(yàn)科，吉林 九臺(tái) 130500）

我國(guó)是全球22個(gè)結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家之一，結(jié)核病的患患者數(shù)在世界居第2位?，F(xiàn)有肺結(jié)核患者約451萬(wàn)，其中痰涂片陽(yáng)性肺結(jié)核約150萬(wàn)人（結(jié)核病傳染源），全國(guó)每年新發(fā)肺結(jié)核患者約145萬(wàn)人，全年死于結(jié)核病者達(dá)12萬(wàn)余人，相當(dāng)于各種其他傳染病死亡人數(shù)總和的2倍[1,2]。因此，結(jié)核病的快速診斷依然是亟待解決的問(wèn)題。目前，結(jié)核病診斷的實(shí)驗(yàn)室輔助檢查方法很多，現(xiàn)就南京大澳生物技術(shù)公司所采用的蛋白芯片法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌抗體3項(xiàng)的技術(shù)進(jìn)行分析，評(píng)價(jià)其臨床診斷價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

2011年5月8日至2011年11月5日，本院住院的結(jié)核病（包括肺結(jié)核、結(jié)核性胸膜炎和肺外結(jié)核）確診患者，共計(jì)531例，男性279例，女性252例，年齡在12～86歲。其中，肺結(jié)核（包括痰菌涂片陽(yáng)性和痰菌涂片陰性）患者血清259例，結(jié)核性胸膜炎患者血清158例，肺外結(jié)核（包括骨結(jié)核、腎結(jié)核、結(jié)核性腦膜炎、淋巴結(jié)結(jié)核等）患者血清114例。

1.2 儀器及試劑

南京大澳生物技術(shù)公司的配套儀器及相應(yīng)試劑盒。

1.3 檢測(cè)方法

嚴(yán)格依照配套說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，結(jié)果由儀器自動(dòng)判讀。

2 結(jié) 果

2.1 3種抗原的抗體聯(lián)合測(cè)定，任何一種陽(yáng)性即為結(jié)核抗體陽(yáng)性。531例結(jié)核患者血清標(biāo)本蛋白芯片檢測(cè)共261例陽(yáng)性，靈敏度為49.15%。

不同類(lèi)型的結(jié)核病抗體陽(yáng)性率不同，痰菌涂片陽(yáng)性的肺結(jié)核患者122例，其中陽(yáng)性95例。痰菌涂片陰性的肺結(jié)核患者137例，其中陽(yáng)性74例。見(jiàn)表1。

表1 不同類(lèi)型結(jié)核患者結(jié)核抗體蛋白芯片陽(yáng)性檢測(cè)率 例（%）

2.2 結(jié)核患者的3種抗體陽(yáng)性率以抗LAM的陽(yáng)性率最高，占42.75%（227/531）；其次是抗38KDa抗體，占34.84%（185/531）；最低的為抗16KDa抗體，占21.81%（68/531）。實(shí)驗(yàn)表明，結(jié)核桿菌蛋白3種抗體均為陽(yáng)性為6.59（35/531）%，所有陽(yáng)性結(jié)果，以LAM和38KDa同時(shí)出現(xiàn)的檢出率為最高，占26.55（141/531）。詳見(jiàn)表2。

表2 結(jié)核桿菌蛋白LAM、16KDa和38KDa抗體的陽(yáng)性檢出率 例(%)

3 討 論

脂阿拉伯甘露聚糖（LAM） 脂阿拉伯甘露聚糖是一種非蛋白結(jié)核分枝桿菌抗原，屬特異性抗原，主要存在于結(jié)核菌表面，具有較強(qiáng)的免疫原性和抗原性，能夠刺激結(jié)核菌感染者產(chǎn)生抗體。而其它分枝桿菌由于表面LAM含量低，不能刺激機(jī)體產(chǎn)生高水平的抗體量，故抗-LAM的特異性和敏感性都較高，對(duì)活動(dòng)性肺結(jié)核，尤其對(duì)痰菌涂片陰性肺結(jié)核的診斷有較好的價(jià)值。

38KDa和16KDa蛋白質(zhì)抗原 38KDa抗原具有強(qiáng)免疫性。這種抗原在區(qū)分結(jié)核分枝桿菌感染還是非結(jié)核分枝桿菌感染方面具有重要的實(shí)際價(jià)值，重組38KDa抗原與結(jié)核分枝桿菌本身合成的38KDa抗原無(wú)免疫性差異，其特異性100%，與正常健康人、非結(jié)核分枝桿菌感染和麻風(fēng)無(wú)交叉。38KDa與16KDa聯(lián)合檢測(cè)可提高敏感性。結(jié)核分枝桿菌抗原多而復(fù)雜，在宿主體內(nèi)表達(dá)的數(shù)量、種類(lèi)或時(shí)機(jī)可能隨患者的個(gè)體免疫背景和病程而異，表現(xiàn)出不同的抗原抗體譜。檢測(cè)時(shí)有的抗原不表達(dá)，未檢測(cè)出相應(yīng)的抗體；有的抗體含量高，有的則低。因此，多種抗原聯(lián)合檢測(cè)，在保證特異性的基礎(chǔ)上有助于提高靈敏度，并可用于結(jié)核分枝桿菌的自然感染或卡介苗接種后陽(yáng)轉(zhuǎn)者的區(qū)別。

結(jié)核分枝桿菌3種抗原IgG抗體蛋白芯片的檢測(cè)意義：當(dāng)LAM、38 KDa任意一指標(biāo)為陽(yáng)性結(jié)果或單一指標(biāo)呈陽(yáng)性時(shí)，表示患者體內(nèi)有活動(dòng)性結(jié)核分枝桿菌抗體存在，結(jié)合臨床癥狀后需要進(jìn)行抗癆治療。此兩項(xiàng)指標(biāo)可排除卡介苗接種的影響；僅當(dāng)16KDa為陽(yáng)性時(shí)，表示患者體內(nèi)有結(jié)核分枝桿菌抗體，但不能完全排除卡介苗接種的影響，需要結(jié)合其他信息進(jìn)一步確認(rèn)；當(dāng)3項(xiàng)指標(biāo)均為陽(yáng)性時(shí)，表示患者體內(nèi)有活動(dòng)性結(jié)核分枝桿菌存在，需要及時(shí)的給予抗癆治療；當(dāng)3項(xiàng)指標(biāo)均為陰性時(shí)，表示患者未被活動(dòng)性結(jié)核分枝桿菌感染；當(dāng)患者第1次檢查時(shí)，某項(xiàng)指標(biāo)為陽(yáng)性時(shí)，但沒(méi)有任何臨床癥狀時(shí)，需要在一個(gè)半月至2個(gè)月后復(fù)檢，如果為陰性，不需要對(duì)其治療，如果仍為陽(yáng)性，需要進(jìn)一步查找原因，并給予患者適當(dāng)?shù)闹委?；?dāng)患者經(jīng)過(guò)1個(gè)療程治療2個(gè)月后復(fù)檢時(shí)LAM或38KDa仍呈陽(yáng)性反應(yīng)，表示治療效果不佳，需要調(diào)整治療方案并持續(xù)治療。如果呈陰性反應(yīng)，表示治療達(dá)到效果。特異結(jié)核菌抗原LAM、16KDa、38KDa，這些抗原是其他分枝桿菌所不具有的或者含量非常低的，人感染結(jié)核菌后會(huì)產(chǎn)生針對(duì)此3種抗原的特異性抗體。應(yīng)用蛋白芯片技術(shù)可從患者血清中檢測(cè)到這些特異性抗體，而對(duì)患者做出早期診斷。已證實(shí)接種卡介苗后，人體基本不會(huì)出現(xiàn)針對(duì)3種抗原的抗體，因此，即使已經(jīng)預(yù)防接種，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的干擾也極其微小[3]。

用生物蛋白芯片技術(shù)測(cè)定患者體液中結(jié)核分枝桿菌IgG抗體，敏感性高，特異性好，操作簡(jiǎn)單、靈活，是一種較理想的結(jié)核病的輔助診斷方法。生物蛋白芯片技術(shù)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌IgG抗體在臨床上主要用于[4]：①用于活動(dòng)性結(jié)核菌感染引起的疾病特異性抗體檢測(cè)；②非活動(dòng)性感染及接受過(guò)卡介苗接種者；③涂片、培養(yǎng)檢測(cè)為陰性的人群檢測(cè)；④肺部其他疾病的鑒別診斷和結(jié)核病化療后的動(dòng)態(tài)觀察。

部分病例出現(xiàn)痰菌涂片陽(yáng)性而蛋白芯片檢測(cè)陰性，原因如下[5]：首先是早期的患者體內(nèi)抗體水平較低，還沒(méi)有達(dá)到檢測(cè)的最低量；其次是有些較重的患者，免疫功能相對(duì)較弱，或者用藥后抑制了免疫功能，造成了患者體內(nèi)的抗體水平低下；其他還有方法本身還不夠完善、患者有抗原抗體之間的差異等因素所造成。

[1]梅建.結(jié)核病流行現(xiàn)狀與控制策略[J].上海預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2003,15(3)：103-104.

[2]樊學(xué)軍,孫敏.結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)的比較研究[J].中國(guó)國(guó)境衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2005,28(1)：160-162.

[3]王紅.蛋白芯片技術(shù)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌IgG抗體結(jié)果分析[J].實(shí)用醫(yī)技雜志,2006,11(13)：22.

[4]李洪敏,吳雪瓊,王巍,等.結(jié)核生物蛋白芯片在結(jié)核病中的應(yīng)用[J].中國(guó)醫(yī)師雜志,2005,11(17)：1556-1557.

[5]米琳,劉幸福.蛋白芯片技術(shù)檢測(cè)抗酸柑橘涂片陽(yáng)性患者結(jié)核分枝桿菌多種抗原的IgG抗體的研究[J].山東雜志,2006,11(11)：1047.