溫度和飼料脂肪水平對(duì)松浦鏡鯉免疫及抗氧化能力的影響

許治沖，劉暉，徐奇友，王常安，許紅

(1.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海201306;2.遼寧寬甸滿族自治縣水產(chǎn)苗種管理站，遼寧寬甸118200;3.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江哈爾濱150070)

魚類是變溫動(dòng)物，其體溫直接依賴于周圍環(huán)境的溫度，各種生理機(jī)能受水溫的影響極大［1］。魚類的免疫活性受到包括水溫、性成熟等一系列因素的影響，季節(jié)的變化特別是環(huán)境溫度的改變對(duì)魚體免疫系統(tǒng)的影響尤為顯著［2-4］。關(guān)于魚類體液免疫應(yīng)答與水溫的關(guān)系，國(guó)外對(duì)大馬哈魚Oncorhynchus keta、鯧 Stromateoides argenteus曾有一些報(bào)道［5-6］。Lemorvan等［7］研究表明，鯉 Cyprinus carpio在低溫條件下，抗體產(chǎn)量明顯下降;Avtalion等［8］用牛血清蛋白免疫鯉時(shí)發(fā)現(xiàn)，初次應(yīng)答在低溫時(shí)受到抑制，而若在高溫時(shí)建立了免疫記憶則再次應(yīng)答時(shí)不受低溫影響。

飼料中脂肪尤其是必需脂肪酸是水產(chǎn)動(dòng)物免疫反應(yīng)的重要調(diào)節(jié)因子，但當(dāng)飼料中脂肪水平超過(guò)需求量時(shí)，會(huì)導(dǎo)致魚體的脂肪沉積增加，從而影響魚體的免疫功能，嚴(yán)重時(shí)甚至?xí)斐纱罅恐驹隰~肝細(xì)胞內(nèi)堆積，導(dǎo)致肝功能下降甚至衰竭。如果體內(nèi)的脂肪含量升高，會(huì)增加魚體的氧化反應(yīng)，但魚類具有抗氧化機(jī)制，可抵抗氧化損傷而維持健康，如攝食高脂飼料的塞內(nèi)加爾鰨Cynoglossus cynoglossus肝臟中的過(guò)氧化氫酶 (CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性均升高［9］，但是脂肪過(guò)高時(shí)就會(huì)氧化產(chǎn)生活性氧 (ROS)，ROS可以氧化DNA、蛋白和脂質(zhì)［10］，破壞分子的交聯(lián)作用，并導(dǎo)致酶活性降低，最終破壞細(xì)胞的完整性［11］，從而影響魚體的抗病力，給魚體健康帶來(lái)負(fù)面影響。

松浦鏡鯉Cyprinus carpio Songpu mirror是黑龍江水產(chǎn)研究所在德國(guó)鏡鯉選育系F4基礎(chǔ)上，采用混合選擇方法，從1998年開始連續(xù)選育3代后獲得的體型完好、背部較高而厚、生長(zhǎng)快、抗寒力強(qiáng)、繁殖力高、體表基本無(wú)鱗的新品種。該品種經(jīng)第四屆全國(guó)水產(chǎn)原種和良種審定委員會(huì)第一次會(huì)議審定為適宜推廣養(yǎng)殖的選育種。目前，雖然已對(duì)鏡鯉相關(guān)高密度馴化養(yǎng)殖技術(shù)、無(wú)公害養(yǎng)殖技術(shù)、蛋白質(zhì)需求［12-14］等進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，但有關(guān)鏡鯉脂肪營(yíng)養(yǎng)素需求方面的研究尚未見報(bào)道。為此，本研究中作者在不同水溫條件下，用不同脂肪水平的飼料飼喂鏡鯉，通過(guò)測(cè)定松浦鏡鯉幼魚的免疫和抗氧化能力，觀察其對(duì)免疫性能的影響，以期為不同水溫條件下松浦鏡鯉幼魚最適脂肪需求的研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)魚 試驗(yàn)用魚為黑龍江水產(chǎn)研究所松浦實(shí)驗(yàn)站當(dāng)年培育的松浦鏡鯉魚種，經(jīng)體積分?jǐn)?shù)為3%的NaCl溶液消毒后暫養(yǎng)一周，選取體質(zhì)健壯、規(guī)格整齊、體質(zhì)量為 (5.51±0.05)g的松浦鏡鯉幼魚756尾用于試驗(yàn)。

1.1.2 試驗(yàn)飼料 以秘魯進(jìn)口蒸汽魚粉、豆粕為主要蛋白源，以進(jìn)口優(yōu)質(zhì)魚油為脂肪源，依據(jù)鯉基本營(yíng)養(yǎng)需求，在基礎(chǔ)飼料中通過(guò)調(diào)節(jié)魚油、α-纖維素的添加比例配制成4種脂肪含量 (均為質(zhì)量分?jǐn)?shù)，下同)分別為 5.55%、8.43%、11.78%、15.60%(實(shí)測(cè)值)的等氮飼料 (粗蛋白質(zhì)平均為43.22%)。試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。飼料原料粉碎后過(guò)40目篩，稱重后用鼓型混合機(jī)混合10 min，待充分混勻后再用小型制粒機(jī)加工成直徑為1.0 mm和2.0 mm兩種規(guī)格的顆粒飼料，自然風(fēng)干后保存在冰箱 (-20℃)中備用。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理 將試驗(yàn)魚隨機(jī)分成12組，每組設(shè)3個(gè)平行，每個(gè)平行放21尾魚。試驗(yàn)在室內(nèi)循環(huán)水族箱 (每個(gè)水族箱盛水150 L)中進(jìn)行，24 h不間斷充氣供氧，每周換水2/3。試驗(yàn)設(shè)16、23、30℃ 3個(gè)溫度梯度，在每個(gè)溫度下設(shè)4組，分別投喂含4種脂肪水平 (5%、8%、11%、15%)的飼料。試驗(yàn)共進(jìn)行 70 d，每天 08:00、11:00、14:00和17:00飽食投喂4次，每?jī)芍芊Q量1次魚體質(zhì)量，根據(jù)實(shí)際生長(zhǎng)情況調(diào)整飼料粒徑和投飼量。定時(shí)測(cè)量水溫、pH值、溶解氧及水中氨氮含量，確保水溫恒定，水中溶氧＞6.00 mg/L，總氨氮為0.020～0.025 mg/L，pH值為7.0～8.0。

表1 試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Tab.1 Composition and nutrient levels in the experimental diets(air-dry basis) w/%

1.2.2 樣品的采集與分析

1)血清的制備 試驗(yàn)結(jié)束后停食24 h，從每個(gè)水族箱隨機(jī)取3尾魚經(jīng)麻醉處理后，用注射器(2.5 mL)從尾靜脈取血，血樣在冰箱 (4℃)靜置1～2 h后，于4℃下以3 500 r/min離心30 min，取上層血清備用。

2)組織勻漿液的制備 從每個(gè)處理組隨機(jī)取9尾魚置于冰盤上，解剖取其肝胰臟、脾臟，稱重后保存于冰箱 (-40℃)中。測(cè)定時(shí)將冷凍保存的肝胰臟和脾臟樣品于4℃下解凍，在冰水浴中剪碎，然后按質(zhì)量與體積比為1∶9加入預(yù)冷的體積分?jǐn)?shù)為0.86%的生理鹽水，冰浴勻漿，將勻漿液以6 000 r/min離心30 min，取上清液備用。

3)樣品的分析 將制備好的血清樣品保存于冰盒中，送黑龍江省電力醫(yī)院采用全自動(dòng)生化分析儀 (貝克曼ProCX4，美國(guó))進(jìn)行血清堿性磷酸酶(ALP)、免疫球蛋白M(IgM)和補(bǔ)體 C3、C4的活性分析。按照南京建成生物工程研究所試劑盒說(shuō)明書中的方法測(cè)定組織提取液中溶菌酶 (LYZ)、超氧化物歧化酶 (SOD)和過(guò)氧化氫酶 (CAT)的活性及丙二醛 (MDA)的含量;采用考馬斯亮蘭試劑盒測(cè)定組織提取液中蛋白質(zhì)的含量。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，使用 SPSS 12.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，如果差異顯著再進(jìn)行 Duncan多重比較;用一般線性模型(GLM)進(jìn)行雙因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1 不同溫度下飼料脂肪水平對(duì)松浦鏡鯉免疫指標(biāo)的影響

從表2可見:16℃時(shí)，各飼料脂肪水平對(duì)松浦鏡鯉LYZ活性和血清免疫指標(biāo)影響均不顯著(P＞0.05);23℃時(shí)，8%脂肪組肝胰臟LYZ活性顯著高于15%脂肪組 (P＜0.05);30℃時(shí)，肝胰臟LYZ活性隨飼料脂肪水平的增加呈降低趨勢(shì)，5%脂肪組肝胰臟LYZ活性最高且顯著高于8%和15%脂肪組 (P＜0.05)，血清IgM含量隨飼料脂肪水平的增加呈上升趨勢(shì)，5%脂肪組顯著低于11%脂肪組 (P＜0.05);其他各項(xiàng)指標(biāo)在各飼料脂肪水平間均無(wú)顯著差異 (P＞0.05);溫度和飼料脂肪水平的交互作用僅對(duì)肝胰臟LYZ活性影響顯著 (P＜0.05)。

表2 不同溫度下飼料脂肪水平對(duì)松浦鏡鯉免疫指標(biāo)的影響Tab.2 Effects of different dietary lipid levels on immune parameters in Songpu mirror carp at different temperatures

2.2 不同飼料脂肪水平下溫度對(duì)松浦鏡鯉免疫指標(biāo)的影響

從表2可見:肝胰臟LYZ活性隨溫度的升高除5%脂肪組先降低后升高外其余各脂肪組均顯著降低 (P＜0.05);脾臟LYZ活性隨溫度的升高除了8%脂肪組無(wú)顯著變化外其余各脂肪組均顯著降低 (P＜0.05);血清ALP活性隨溫度上升5%和8%脂肪組顯著升高，11%和15%脂肪組30℃時(shí)血清ALP活性顯著高于23℃時(shí) (P＜0.05);血清IgM活性隨溫度的升高除15%脂肪組無(wú)顯著變化外其余各脂肪組均顯著降低 (P＜0.05);血清C3含量除了15%脂肪組23℃時(shí)顯著高于16℃時(shí)，血清C4含量除了8%脂肪組23、30℃時(shí)顯著低于16℃時(shí) (P＜0.05)外，其他各脂肪組溫度對(duì)C3、C4含量影響均不顯著 (P＞0.05)。

2.3 不同溫度下飼料脂肪水平對(duì)松浦鏡鯉肝胰臟和脾臟抗氧化能力的影響

從表3可見:16℃時(shí)，松浦鏡鯉肝胰臟SOD和CAT均隨著飼料脂肪水平的增加而降低，而肝胰臟MDA含量則隨飼料脂肪水平的增加而升高，其中5%和8%脂肪組肝胰臟SOD和CAT活性顯著高于11%和15%脂肪組 (P＜0.05);8%脂肪組肝胰臟MDA含量顯著低于15%脂肪組 (P＜0.05);脾臟MDA含量隨飼料脂肪水平的增加而降低，15%脂肪組含量顯著低于5%和8%脂肪組 (P＜0.05)。23℃時(shí)，8%和11%脂肪組肝胰臟SOD活性顯著高于5%和15%脂肪組 (P＜0.05)，脾臟SOD活性8%和15%脂肪組顯著高于5%脂肪組(P＜0.05);肝胰臟和脾臟CAT活性各脂肪組差異均不顯著 (P＞0.05);肝胰臟和脾臟MDA含量隨飼料脂肪水平的上升均顯著升高 (P＜0.05)。30℃時(shí)，各脂肪組抗氧化指標(biāo)差異均不顯著 (P＞0.05)。溫度和飼料脂肪水平的交互作用對(duì)脾臟SOD和CAT活性影響不顯著 (P＞0.05)，但對(duì)其他指標(biāo)均有顯著影響 (P＜0.05)。

表3 不同溫度下飼料脂肪水平對(duì)松浦鏡鯉肝胰臟和脾臟抗氧化能力的影響Tab.3 Effects of different dietary lipid levels on antioxidation in hepatopancreas and spleen of songpu mirror carp at different temperature

2.4 不同飼料脂肪水平下溫度對(duì)松浦鏡鯉肝胰臟和脾臟抗氧化能力的影響

從表3可見:肝胰臟SOD活性除5%脂肪組外都隨溫度的上升而升高，其中11%和15%脂肪組顯著升高 (P＜0.05);脾臟SOD活性5%脂肪組23℃時(shí)顯著低于其他溫度組 (P＜0.05);肝胰臟CAT活性隨溫度的升高先降低后升高，脾臟CAT活性隨溫度的升高除了5%脂肪組無(wú)顯著變化外其余各脂肪組均顯著下降 (P＜0.05);各飼料脂肪水平下，肝胰臟和脾臟MDA含量隨溫度的升高總體有降低趨勢(shì)，其中只有11%和15%脂肪組23℃時(shí)反而顯著升高 (P＜0.05)。

3 討論

3.1 溫度和飼料脂肪水平對(duì)松浦鏡鯉免疫指標(biāo)的影響

溶菌酶是廣泛存在于魚類各種體液、血清和巨噬細(xì)胞中的一種水解酶，不僅具有溶解病原菌、活化補(bǔ)體途徑的作用，而且還有發(fā)揮趨化和調(diào)理素的功能［15］。目前對(duì)羅非魚［16］、大比目魚［17］和大西洋鯛［18］的研究中發(fā)現(xiàn)，水溫升高能顯著增加其血清溶菌酶活性。但本試驗(yàn)結(jié)果顯示，肝胰臟和脾臟溶菌酶活性隨溫度的升高顯著下降，這與楠田等［19］研究發(fā)現(xiàn)日本鰻鱺 Anguilla Japonica Temminck et Schlegel各種器官和組織中溶菌酶活性在15℃飼養(yǎng)水溫條件下比在25℃和30℃飼養(yǎng)水溫條件下高的結(jié)果相一致。筆者認(rèn)為，這可能是由魚類的免疫反應(yīng)隨溫度變化受魚類種類的影響較多造成的［20］。本研究中，水溫為23℃和30℃時(shí)，低脂肪組比高脂肪組更能維持肝胰臟溶菌酶活性。

魚類補(bǔ)體系統(tǒng)與哺乳動(dòng)物補(bǔ)體系統(tǒng)具有相似的功能，目前在魚類中已發(fā)現(xiàn)有經(jīng)典激活途徑、旁路途徑［21］。前人研究發(fā)現(xiàn)，升高水溫能增強(qiáng)羅非魚Oreochromis niloticus旁路途徑活化［16］，大馬哈魚補(bǔ)體的活化與溫度呈負(fù)相關(guān)［22］。本試驗(yàn)中僅在15%飼料脂肪水平時(shí)，23℃組顯著高于16℃組，這可能與魚類補(bǔ)體系統(tǒng)的活化具有種屬特異性和不同魚類生活的最適水溫不同有關(guān)，還需更深入地研究分析才能確定。各溫度下飼料脂肪水平對(duì)血清C3、C4質(zhì)量濃度的影響不顯著，產(chǎn)生這種結(jié)果的原因可能由于脂肪營(yíng)養(yǎng)素的代謝還沒(méi)有影響到補(bǔ)體激活系統(tǒng)，從而沒(méi)有對(duì)鏡鯉血清C3、C4質(zhì)量濃度產(chǎn)生影響。

IgM是魚類的一種免疫球蛋白，在適宜的溫度范圍內(nèi)多種魚類血清中免疫球蛋白的活性隨溫度的升高而增強(qiáng)，如紅大馬哈魚［22］和鯉［7］等。本研究中鯉血清IgM質(zhì)量濃度隨溫度的升高而顯著降低，這也與江育林［23］、侯亞義等［24］對(duì)其他魚類的研究結(jié)果不同，可能是魚的種類和最適生長(zhǎng)溫度不同所致。關(guān)于飼料脂肪水平對(duì)魚類血清IgM的影響還鮮有報(bào)道，有待進(jìn)一步研究。

ALP是生物體內(nèi)的一種重要的代謝調(diào)控酶，直接參與磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移和鈣磷代謝，其活性在一定程度上可以反映動(dòng)物體的免疫情況。目前溫度對(duì)魚類ALP的影響研究甚少，影響機(jī)制尚不清楚，有關(guān)這方面的研究還需進(jìn)一步深入。各溫度條件下不同脂肪組血清ALP活性無(wú)顯著差異，表明飼料脂肪水平對(duì)松浦鏡鯉血清ALP活性影響不顯著。

3.2 溫度和飼料脂肪水平對(duì)松浦鏡鯉肝胰臟和脾臟抗氧化能力的影響

動(dòng)物細(xì)胞生存要求適當(dāng)?shù)难趸c抗氧化平衡［25］。MDA被認(rèn)為是脂質(zhì)過(guò)氧化的主要分解產(chǎn)物，其含量的高低不僅可以間接反映活性氧自由基含量的多少，而且還可以反映組織細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化的強(qiáng)度或速率［26］。魚體內(nèi)都存在一套有效的抗氧化防御系統(tǒng)來(lái)清除氧自由基及其代謝產(chǎn)物，這種抗氧化系統(tǒng)主要包括SOD、CAT等抗氧化酶。測(cè)定這兩種酶的活性常用于評(píng)估體內(nèi)自由基反應(yīng)的動(dòng)態(tài)變化及組織損傷情況。關(guān)于飼料脂肪水平對(duì)魚類抗氧化能力的影響已有一些報(bào)道，王朝明等［27］研究表明，胭脂魚Myxocyprinus asiaticus肝胰臟SOD活性隨著飼料脂肪水平的增加先升高后降低，而MDA含量則先降低后升高;林仕梅等［28］研究表明，羅非魚肝胰臟CAT活性和MDA含量隨飼料脂肪水平的增加而升高，SOD活性則在8.5%脂肪組顯著降低。本試驗(yàn)中，各溫度下隨飼料脂肪含量的增加，鏡鯉肝胰臟MDA含量有升高趨勢(shì)，其中在23℃時(shí)表現(xiàn)尤為明顯，在此溫度下11%脂肪組肝胰臟MDA含量較5%和8%脂肪組增加1倍多，這表明此時(shí)鏡鯉肝胰臟脂肪酸開始發(fā)生過(guò)氧化并導(dǎo)致過(guò)氧化產(chǎn)物增加。16℃時(shí)，SOD和CAT活性均隨飼料脂肪水平的升高而降低，表明在16℃下高飼料脂肪水平可以引起鏡鯉抗氧化能力減弱;23℃時(shí)，11%脂肪組肝胰臟SOD和CAT活性明顯高于其他組，可能在此飼料脂肪水平下MDA含量顯著增加，從而引起魚體開始出現(xiàn)氧化應(yīng)激有關(guān);30℃時(shí)，飼料脂肪水平對(duì)松浦鏡鯉抗氧化能力無(wú)顯著影響，可能是高溫下松浦鏡鯉代謝加快，抗氧化酶活性增加，從而減弱了飼料脂肪水平的影響。

研究表明，水溫的變化能直接影響魚體內(nèi)的抗氧化酶活性［29］，水溫的升高可以使魚體代謝加快及耗氧量增加，加快氧自由基的產(chǎn)生，從而引起抗氧化酶活性的升高。楊建等［30］研究指出，軍曹魚血清SOD和CAT活性隨水溫 (26～32℃)的升高而升高;劉松巖等［31］研究發(fā)現(xiàn)，中華鱘血清SOD活性隨水溫的升高變化顯著，而CAT活性變化則不顯著。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，SOD活性隨水溫的升高而升高，而CAT活性則先升高后降低，說(shuō)明隨溫度的升高松浦鏡鯉幼魚出現(xiàn)了一定的氧化應(yīng)激，為了維持平衡抗氧化酶活性也隨之增加。CAT活性在16℃時(shí)比在23℃時(shí)高，可能是16℃時(shí)產(chǎn)生了低溫應(yīng)激造成的。MDA含量隨溫度的升高有降低趨勢(shì)，這正好與抗氧化酶活性升高相吻合。

綜合分析溫度和飼料脂肪水平對(duì)松浦鏡鯉幼魚免疫和抗氧化能力的影響，從魚體免疫角度推測(cè)松浦鏡鯉幼魚在16℃和23℃時(shí)飼料脂肪添加量分別不宜超過(guò)8%和11%。

［1］李亞南，王翼平，邵健忠，等.魚類免疫應(yīng)答中溫度效應(yīng)研究［J］.浙江大學(xué)學(xué)報(bào)，1999，26(3):82-85.

［2］Saha N R，Usami T，Suzuki Y.Seasonal changes in the immune activities of common carp(Cyprinus carpio)［J］.Fish Physiology and Biochemistry，2002，26:379-387.

［3］Hoare R，Hovland H，Langston A L，et al.Susceptibility of three different strains of juvenile Atlantic halibut(Hippoglossus hippoglossus L.)cultured at two different temperatures to Vibrio anguillarum and temperature effect on antibody response［J］.Fish ＆Shellfish Immunol，2003，13(2):111-123.

［4］Enqelsma M Y，Houqee S，Nap D，et al.Multiple acute temperature stress affects leucocyte populations and antibody responses in common carp，Cyprinus carpio L.［J］.Fish ＆ Shellfish Immunol，2003，15(5):397-410.

［5］Jurd R D.Specilization in the teleost and anuran respnose，a comparative critique in fish immunology［M］.London:Academic Press INC，1985:9-28.

［6］Avtalion R R，Milgrom L.Regulatory effect of temperature and amtigen upon immunity［J］.Immunology，1976，31(4):589.

［7］Lemorvan C，Deschaux P，Troutaud D.Effects and mechanisms of environmental temperature on carp(Cyprinus carpio)anti-DNP antibody response and non-specific cytotoxic cell activity:A kinetic study［J］.Developmental and Comparative Immunology，1996，20(5):331-340.

［8］Avtalion R R，Malik Z，Lefler E，et al.Temperature effect on immune resistance of fish to pathogens［J］.Bamidge Bull Fish Cult Isr，1970，22:33-38.

［9］Rueda-Jasso R，Conceic?o L E C，Dias J.Effect of dietary nonprotein energy levels on condition and oxidative status of Senegalese sole(Solea senegalensis)juveniles［J］.Aquaculture，2004，231:417-433.

［10］Janssens B J，Childress J J，Baguet F，et al.Reduced enzymatic antioxidative defence in deep-sea fish［J］.J Exp Biol，2000，203:3717-3725.

［11］Winston G W，Di Giulio R T.Prooxidant and antioxidant mechanism in aquatic organisms［J］.Aquat Toxicol，1991，19:137-161.

［12］韓娜，金峰.德國(guó)鏡鯉高密度馴化養(yǎng)殖技術(shù)［J］.黑龍江水產(chǎn)，2009(3):28.

［13］韓玉國(guó)，姜曉琴.德國(guó)鏡鯉無(wú)公害養(yǎng)殖技術(shù)［J］.黑龍江水產(chǎn)，2009(3):10-11.

［14］張桐，徐奇友，許紅，等.不同溫度下不同蛋白水平對(duì)鏡鯉非特異性免疫的影響［J］.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，41(12):80-85.

［15］Ellis A E.Immunity to bacteria in fish［J］.Fish ＆ Shellfish Immunology，1999，9:291-308.

［16］Ndong D，Chen YY，Lin YH，et al.The immune response of tilapia Oreochromis mossambicus and its susceptibility to Streptococcus iniae under stress in low and high temperatures［J］.Fish ＆ Shellfish Immunology，2007，22:686-694.

［17］Bowden T J，Butler R，Bricknell I R.Seasonal variation of serum lysozyme levels in Atlantic halibut(Hippoglossus hippoglossus L.)［J］.Fish ＆ Shellfish Immunology，2004，17:129-135.

［18］Tort L，Rotllant J，Rovira L.Immunological suppression in gilthead sea bream Sparus aurata of the North-West Mediterranean at low temperatures［J］.Comparative Biochemistry and Physiology，1998，120:175-179.

［19］楠田理一，北代典幸.ウナギのリゾチ ム活性に及ぼす飼育水溫の影響［J］.水產(chǎn)增殖，1992，40(4):453-456.

［20］Watts M，Munday B L，Burke C M.Immune responses of teleost fish［J］.Aust Vet J，2001，79(8):570-574.

［21］覃川杰，楊川，陳昌福.水溫對(duì)魚類免疫活動(dòng)的影響［J］.河南師范大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2011，39(5):129-133.

［22］Alcorn S W，Murray A L.Effects of rearing temperature on immune functions in sockeye salmon(Oncorhynchus nerka)［J］.Fish＆ Shellfish Immunology，2002，12:303-334.

［23］江育林.草魚免疫應(yīng)答的初步研究［J］.水生生物學(xué)報(bào)，1991，15(4):321-326.

［24］侯亞義，韓曉冬.溫度和類固醇激素對(duì)虹鱒免疫球蛋白IgM的影響［J］.南京大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2001，37(5):563-568.

［25］劉麗，趙會(huì)宏，張國(guó)良，等.肌肽對(duì)奧尼羅非魚生長(zhǎng)性能的影響［J］.水生生物學(xué)報(bào)，2008，32(5):643-648.

［26］Slatert F，Mickle P L.Oxygen free radicals and tissue damage［M］.Amsterdam:Excerpta Medica，1979:143.

［27］王朝明，羅莉，張桂眾，等.飼料脂肪水平對(duì)胭脂魚幼魚生長(zhǎng)、體組成和抗氧化能力的影響［J］.淡水漁業(yè)，2010，40(5):47-53.

［28］林仕梅，蘿莉.飼料脂肪水平和復(fù)合降脂因子對(duì)羅非魚生長(zhǎng)性能和肝胰臟代謝、抗氧化指標(biāo)的影響［J］.動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2010，22(6):1585-1591.

［29］Martínez-ávarez R M，Morales A E，Sanz A.Antioxidant defenses in fish:Biotic and abiotic factors［J］.Rev Fish Biol Fisher，2005，15:75-88.

［30］楊健，陳剛，黃建盛，等.溫度和鹽度對(duì)軍曹魚幼魚生長(zhǎng)與抗氧化酶活性的影響［J］.廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，27(4):25-29.

［31］劉松巖，王明學(xué).環(huán)境脅迫對(duì)中華鱘體內(nèi)自由基水平和抗氧化酶活力的影響［D］.武漢:華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2006.