五倍子與沒(méi)食子提取物對(duì)人工脫礦釉質(zhì)再礦化的研究

陳 鯤，阮金云，易多宗，楊發(fā)成，藍(lán) 海

（大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理 671000）

齲齒是一種細(xì)菌性疾病，它能導(dǎo)致牙齒硬組織進(jìn)行性病損，表現(xiàn)為無(wú)機(jī)質(zhì)脫礦和有機(jī)質(zhì)分解是人類(lèi)最常見(jiàn)的世界性疾病之一。世界衛(wèi)生組織將它列為危害人類(lèi)健康的第三大高發(fā)疾病，它的發(fā)病率僅次于心血管病和腫瘤。它能使牙齒缺損、疼痛、影響進(jìn)食、睡眠及工作。目前，治療齲齒的主要方法是填充法，或在形成初期齲時(shí)用氨硝酸銀處理病變部位。

在人們回歸自然的呼聲日益高漲的今天，天然藥物的研究已成為焦點(diǎn)，根據(jù)天然藥物具有地域性的特點(diǎn)，不同國(guó)家也在探索研究屬于自己的特色藥物。天然藥物五倍子、沒(méi)食子均有防齲功效〔1-2〕。但兩種藥物的防齲對(duì)比研究尚未見(jiàn)報(bào)導(dǎo)。五倍子又名百蟲(chóng)倉(cāng)、百藥煎、棓子，我國(guó)主要產(chǎn)于四川、湖南、陜西等地，是由五倍子蚜蟲(chóng)寄生在漆樹(shù)科鹽膚木屬植物上形成的蟲(chóng)癭。五倍子主要含有五倍子鞣質(zhì)，其具有藥理活性的主要成分為五倍子鞣質(zhì)及水解產(chǎn)生或藥原含有的沒(méi)食子酸〔3〕。沒(méi)食子來(lái)源于沒(méi)食子蜂科昆蟲(chóng)沒(méi)食子蜂的幼蟲(chóng)，寄生于殼斗科植物沒(méi)食子樹(shù)幼枝上所產(chǎn)生的蟲(chóng)癭。干燥蟲(chóng)癭略呈球形，有短柄；直徑1～2.5 cm，外表灰色或灰褐色，有疣狀突起。主產(chǎn)地為希臘、土耳其、伊朗等。主要含有的藥理活性成分為沒(méi)食子酸。另外，侯惠嬋，梁前等的研究表明：不同產(chǎn)地的五倍子、沒(méi)食子中沒(méi)食子酸的含量相差較大〔4〕。

本實(shí)驗(yàn)中通過(guò)對(duì)樣品處理再礦化后的釉質(zhì)進(jìn)行顯微硬度測(cè)定，對(duì)比五倍子、沒(méi)食子提取物的再礦化效果，為防齲藥物的開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 儀器與藥品 AE200型電子天平（波特樂(lè)-托利多儀器有限公司）；303-A-I型電熱恒溫培養(yǎng)箱（蕭山永發(fā)電器有限公司，湖南實(shí)驗(yàn)儀器廠）；pHS-25C數(shù)字酸度計(jì)（上海鵬順科學(xué)儀器有限公司）；E-201-C型復(fù)合電極（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；SHI-D（Ⅲ）循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）；80-2臺(tái)式低速離心機(jī)（上海醫(yī)療器械集團(tuán)有限公司手術(shù)器械廠）；SY5200DH超聲波清洗儀（上海聲源超聲波儀器設(shè)備有限公司）；ZQX-1全自動(dòng)金相鑲嵌機(jī)（上海緯維電子科技有限公司）；402MVD型自動(dòng)轉(zhuǎn)塔數(shù)顯顯微硬度儀（依工測(cè)試測(cè)量?jī)x器上海有限公司）。 KCl、CH3CH2COOH、NaCl、CaCl2、NaH2PO4、Na2S、尿素（以上藥品均為分析純）。

脫礦液：0.15 mol/L KCl用CH3CH2COOH調(diào)至pH=4.00；人工唾液：KCl 0.4083 g，NaCl 0.4097 g，CaCl20.8016 g，NaH2PO40.7764 g，Na2S 0.0052 g，尿素1.0510 g用蒸餾水溶解，加水至1000 mL，用KOH調(diào)至pH=6.00。

1.2 脫礦標(biāo)本制備 市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)新鮮拔出的牛切牙，去除牙根部軟組織，用無(wú)氟石英砂紙打磨去除釉質(zhì)表面色素及菌斑。超聲清洗干凈，干燥，置于生理鹽水中-4℃保存?zhèn)溆?。將牙齒用蒸餾水洗凈，晾干，浸泡于100 mL脫礦液中，在37℃條件下放置10 d，每5 d更換一次脫礦液。脫礦后的牙齒用無(wú)氟石英砂紙?jiān)谘烙再|(zhì)打磨出一光滑平面，用ZXQ-1全自動(dòng)金相鑲嵌機(jī)將其鑲嵌在鑲嵌粉中。

將鑲嵌好的脫礦標(biāo)本用402MVD型自動(dòng)轉(zhuǎn)塔數(shù)顯顯微硬度儀在正壓力為200 g的條件下測(cè)定硬度，每個(gè)標(biāo)本測(cè)定3次，取平均值在313 kg/mm2左右的24顆牛切牙標(biāo)本作為實(shí)驗(yàn)樣本。

1.3 再礦化液的制備 五倍子、沒(méi)食子購(gòu)于大理市藥材市場(chǎng)，經(jīng)大理學(xué)院生藥學(xué)教研室楊月娥高級(jí)實(shí)驗(yàn)師鑒定為正品。將五倍子、沒(méi)食子洗凈置于80℃條件下干燥至恒重，粉碎成粉末，分別準(zhǔn)確稱取16 g，用200 mL乙醇超聲提取2 h，提取液蒸發(fā)濃縮成浸膏，用去離子水溶解，配制成80 mg/mL的五倍子再礦化液和80 mg/mL沒(méi)食子再礦化液。

1.4 再礦化 將上述所選24顆脫礦牙釉質(zhì)標(biāo)本隨機(jī)分為3組，每組8顆。 經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)分析，P＞0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中，A組用80 mg/mL的五倍子提取液進(jìn)行再礦化處理，每顆牛切牙標(biāo)本用棉簽蘸取80 mg/mL五倍子提取液涂抹于牙釉質(zhì)1 min，再用人工唾液涂抹1 min，每天4次（ 每隔3 h處理1次）；B、C兩組分別用沒(méi)食子提取液、去離子水處理，方法同上。再礦化處理10 d后，用402 MVD型自動(dòng)轉(zhuǎn)塔數(shù)顯顯微硬度儀在正壓力為200 g的條件下測(cè)定各組牛切牙標(biāo)本釉質(zhì)表面硬度，每個(gè)標(biāo)本測(cè)定3次，取平均值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 對(duì)各組數(shù)據(jù)進(jìn)行兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析。

2 結(jié)果

經(jīng)五倍子乙醇提取物（A組）、沒(méi)食子乙醇提取物（B組）處理后，兩組再礦化后標(biāo)本牙釉質(zhì)表層顯微硬度平均值均明顯高于再礦化前（P＜0.01）；去離子水對(duì)照組（C組）牙釉質(zhì)表層顯微硬度平均值與再礦化前相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。這一結(jié)果表明五倍子乙醇提取物、沒(méi)食子乙醇提取物都有促進(jìn)脫礦牛切牙再礦化的作用，見(jiàn)表1。

表1 各組再礦化前后釉質(zhì)表面顯微硬度平均值（ ±s，kg/mm2）

表1 各組再礦化前后釉質(zhì)表面顯微硬度平均值（ ±s，kg/mm2）

注：與脫礦后比較，*P＜0.01；**P＞0.05

測(cè)定次數(shù) C組脫礦后 3312.3±1.7再礦化后3313.0±1.8**A組B組313.8±1.2345.35±1.2*312.8±1.9330.6±0.6*

再礦化后，A、B兩組間釉質(zhì)表層顯微硬度平均值比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P＜0.01），A、B兩組釉質(zhì)表層顯微硬度平均值與C組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P＜0.01）。 并且，A組平均值明顯高于B組，說(shuō)明五倍子乙醇提取物的再礦化能力強(qiáng)于沒(méi)食子乙醇提取物。

3 討論

齲病的治愈過(guò)程比較繁瑣并且齲齒的發(fā)生嚴(yán)重危害人體健康，人們也一直致力于防齲的研究。天然藥物五倍子中含有鞣酸成分，又稱單寧酸或沒(méi)食子鞣酸，分子式為C76H52O46。體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，五倍子有提高釉質(zhì)抗酸性的作用，對(duì)齲齒的形成有明顯的抑制作用〔5-8〕，另外還含有沒(méi)食子酸、樹(shù)脂、蠟質(zhì)、淀粉等。沒(méi)食子中的沒(méi)食子酸同樣具有防齲功效。趙今等的研究表明沒(méi)食子鞣質(zhì)會(huì)影響牙齒菌斑形態(tài)，對(duì)牙齒結(jié)構(gòu)有保護(hù)作用〔9〕。

五倍子和沒(méi)食子中都含有防齲有效活性成分鞣酸，1979年，Tanizaki等針對(duì)鞣酸能與蛋白質(zhì)反應(yīng)，具有抑制膠原蛋白分解的特性，用于牙本質(zhì)研究，發(fā)現(xiàn)鞣酸抑制了牙本質(zhì)的膠原蛋白分解，具有阻礙齲化過(guò)程的作用〔10-11〕。

另外，五倍子、沒(méi)食子中的金屬離子和生物堿生成難溶型復(fù)合物，該復(fù)合物難溶于脫礦液中，可抑制牛切牙中鈣的溶出和有機(jī)質(zhì)的崩解〔12〕，起到了阻礙齲化進(jìn)程的作用。

由于本實(shí)驗(yàn)中并未測(cè)定五倍子、沒(méi)食子中鞣質(zhì)及其它成分（金屬離子，生物堿等）的精確含量，牛切牙再礦化處理時(shí)，涂抹的藥物不能達(dá)到絕對(duì)均勻等因素，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有一定影響，但其良好的防齲效果已得到證實(shí)。至于五倍子、沒(méi)食子影響牙釉質(zhì)硬度值改變的具體作用物質(zhì)還有待進(jìn)一步研究確定。

〔1〕李艷君，唐榮銀，呂昕，等.五倍子提取液對(duì)牙本質(zhì)齲損時(shí)膠原蛋白分解的影響〔J〕.牙體牙髓牙周病學(xué)雜志，2002，12（ 5） ：252-254.

〔2〕李新尚，趙今.天然藥物沒(méi)食子對(duì)牙釉質(zhì)礦化作用的體外實(shí)驗(yàn)研究〔D〕.新疆醫(yī)科大學(xué)：口腔臨床醫(yī)學(xué)，2011，25（ 10）：15-17.

〔3〕李秀萍，李春遠(yuǎn)，渠桂榮，等.五倍子的研究概況〔J〕.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2002，30（ 3）：73-74.

〔4〕侯惠嬋，梁前，盧迅聰.五倍子、沒(méi)食子中沒(méi)食子酸的含量測(cè)定〔J〕.中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2005，6（ 3）：38-39.

〔5〕汪大照，余志芬，張向宇.五倍子提取物對(duì)牙釉質(zhì)脫礦和再礦化作用的影響〔J〕.江蘇中醫(yī)藥，2011，43（ 4）：85-87.

〔6〕王蕓，唐榮銀.五倍子水提物處理早期人工釉質(zhì)齲后的表面結(jié)構(gòu)的掃描電鏡觀察〔J〕.牙髓牙周病學(xué)雜志，2005，15（ 3）：133-135.

〔7〕王蕓，唐榮銀.再礦化藥物的研究進(jìn)展〔J〕.牙體牙周病學(xué)雜志，2005，15（ 9）：523-524.

〔8〕黃正蔚，周學(xué)東，李繼遙，等.中藥五倍子對(duì)口腔致齲菌影響的體外實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.華西藥學(xué)雜志，2002，17（ 2）：104-106.

〔9〕趙今，哈木拉提·吾甫爾，林靜，等.沒(méi)食子鞣質(zhì)及其有效提取物對(duì)牙菌斑生物膜形態(tài)結(jié)構(gòu)和活性的作用〔J〕.科技導(dǎo)報(bào)，2009，27（ 7）：24-28.

〔10〕Tanizaki K，Inoue K.Effect of tannin fluoride preparation on the reduction of secondary caries〔J〕.J Osaka Univ Dent Sch， 1979（ 19）： 129-146.

〔11〕Matsumura Chari T，Kanamoto K.The tracement of deep caries lesions by indirect pulp capping with use of polycarboxylate cement combined with tannin-fluoride prepaiation〔J〕.Okayama Unir J Dent， 1989（ 8） ：5-7.

〔12〕李彩，周學(xué)東.五倍子在齲病防治中的研究進(jìn)展〔J〕.華西醫(yī)學(xué)，2006，21（ 2）：427-428.