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    阿司匹林對人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7增殖和凋亡的影響

    2012-09-17 15:00:30李紅濤
    中國實(shí)用醫(yī)藥 2012年15期
    關(guān)鍵詞:形態(tài)學(xué)細(xì)胞株抑制率

    李紅濤

    阿司匹林(ASA),又名乙酰水楊酸,是非甾體類抗炎藥的代表藥物,主要通過抑制環(huán)氧化酶的活性而降低前列腺素的產(chǎn)生發(fā)揮抗炎作用[1]。近年來,流行病學(xué)和實(shí)驗(yàn)室資料均表明,阿司匹林對食管癌,結(jié)腸癌,胃癌等消化道腫瘤均有抗腫瘤作用[2]。本實(shí)驗(yàn)選用人乳腺癌MCF-7細(xì)胞來探討阿司匹林對乳腺癌的影響,為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    1.1.1 主要試劑 RPMI1640培養(yǎng)基、胎牛血清、噻唑藍(lán)試劑均購于華美公司。阿司匹林純品購自Sigma公司。Annexin V-FITC試劑盒購于北京寶賽生物工程公司。

    1.1.2 細(xì)胞株 MCF-7細(xì)胞株購于中科院上海細(xì)胞生物研究所。

    1.2 方法

    1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) MCF-7細(xì)胞株培養(yǎng)于含10%小牛血清RPMI1640培養(yǎng)基中,置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),培養(yǎng)至70% ~80%融合時(shí),0.25%胰蛋白酶消化、傳代。

    1.2.2 MTT實(shí)驗(yàn) 不同濃度的阿司匹林:2.0 mmol/L,4.0 mmol/L,8.0 mmol/L,16.0 mmol/L,作用細(xì)胞 24 h、48 h、72 h后,每孔加入5 mg/ml的MTT20 μl,作用4 h后,每孔加入150 μl DMSO溶液,輕輕震蕩15 min,在酶標(biāo)儀570 nm波長處測定各孔吸光密度值(OD值)。公式:實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞抑制率=(1-實(shí)驗(yàn)組OD值/對照組OD值)×100%。

    1.2.3 FCM實(shí)驗(yàn) 不同藥物濃度處理48 h的MCF-7細(xì)胞,PBS洗滌3次后,調(diào)節(jié)濃度為1.0×106/ml,按Annexin/FITC及PI試劑盒提供方法依次加入結(jié)合緩沖液。Annexin/FITC及PI 4℃避光30 min后,即可上流式細(xì)胞儀檢測,計(jì)算凋亡率。

    1.3 形態(tài)學(xué)觀察 應(yīng)用電鏡觀察阿司匹林是否引起MCF-7細(xì)胞凋亡。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 11.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和配對t檢驗(yàn)。

    2 結(jié)果

    2.1 細(xì)胞增殖活性 阿司匹林對MCF-7細(xì)胞增殖有抑制作用,呈時(shí)間-劑量依賴性,隨時(shí)間、濃度增加而增加,有顯著相關(guān)性(如表1)。

    表1 不同濃度阿司匹林作用不同時(shí)間對MCF-7細(xì)胞的抑制率(±s)

    表1 不同濃度阿司匹林作用不同時(shí)間對MCF-7細(xì)胞的抑制率(±s)

    阿司匹林濃度(mmol/l)時(shí)間(小時(shí))24 h 48 h 72 h 0(對照組)0±0 0±0 0±0 2 5.38±0.29 13.17±0.47 30.25±0.66 4 7.05±0.56 16.50±0.98 32.72±1.01 8 11.23±1.02 19.81±1.10 41.59±1.62 16 16.27±1.35 23.96±1.56 53.31±1.95

    2.2 細(xì)胞凋亡百分率 以上不同濃度的阿司匹林作用MCF-7細(xì)胞48 h后,細(xì)胞的凋亡率為(19.09±0.87)% ~(53.75±0.48)%,凋亡率隨著藥物濃度增加而增高,呈劑量依賴性。

    2.3 細(xì)胞凋亡 不同濃度阿司匹林作用后MCF-7細(xì)胞48 h后,電鏡下可以觀察細(xì)胞呈典型的凋亡形態(tài)學(xué)變化,出現(xiàn)細(xì)胞核固縮,染色質(zhì)凝集于核膜周邊,新月型小體及胞質(zhì)空泡形成等。

    3 討論

    阿司匹林是傳統(tǒng)的解熱鎮(zhèn)痛類藥物,目前有文獻(xiàn)報(bào)道其對腫瘤細(xì)胞有抑制作用,并可降低許多腫瘤的發(fā)病率[3],但是其抗腫瘤機(jī)制還不是很明確,阿司匹林可能通過多種途徑抑制腫瘤的生長。許多研究證實(shí),阿司匹林可通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡而抑制腫瘤生長。此外,阿司匹林還可以通過干擾線粒體能量代謝、抑制磷酸戊糖途徑、增加活性氧的活性而誘導(dǎo)凋亡。

    本實(shí)驗(yàn)通過MTT法、流式細(xì)胞術(shù)、形態(tài)學(xué)方法研究阿司匹林處理的人乳腺癌MCF-7細(xì)胞結(jié)果顯示阿司匹林對人乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖有顯著的抑制作用,呈時(shí)間-劑量依賴性,對乳腺癌細(xì)胞抑制率隨時(shí)間、濃度增加而增加。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與王美榮[4]研究結(jié)果基本相近。

    綜上所述,阿司匹林在體外可有效的抑制人乳腺癌MCF-7細(xì)胞的增殖誘導(dǎo)凋亡,為阿司匹林應(yīng)用于乳腺癌的治療提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

    [1] DOHERTY G A,MURRAY F E.Cyclooxygenase as a target for chemoprevention in colorectal cancer:lost cause or a concept coming of age?.Expert Opin Ther Targets,2009,13(2):209-218.

    [2] ROSTON A,DUBE C,LEWIN G,et al.Nonsteroidal anti-infammatory drugs and cyclooxygenase-2 inhibitors for primary prevention of colorectal cancer:a systematic review prepared for the U.S.Preventive Services Task Force.Ann Intern Med,2007,146(5):376-89.

    [3] Ll M,LOTAN R,LEVIN B,et al.Aspirin induction of apoptosis in esophageal cancer:a potential for chemop-revention cancer.Epidemiol Biomarkers Prey,2009,9:545-549.

    [4] 王美榮,戚之琳.阿司匹林對SMMC-7721人肝癌細(xì)胞增殖的影響.皖南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2010,29(4):243-245.

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