Suvivin和VEGF在前列腺癌組織中的表達(dá)及相關(guān)性研究

曹文軍 劉致中

1.內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院研究生院，內(nèi)蒙古呼和浩特 010059；2.內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院 包鋼醫(yī)院，內(nèi)蒙古包頭 014010

前列腺癌（PCa）是一種在老年人中多發(fā)的惡性腫瘤，Survivin可以作為抗腫瘤治療的新靶點(diǎn)[1]，是一個(gè)有潛在價(jià)值的腫瘤標(biāo)志。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）與腫瘤血管生成有關(guān)，是目前發(fā)現(xiàn)的促進(jìn)腫瘤血管形成的最重要的促進(jìn)因子[2-4]。針對(duì)它的治療可能是治療癌癥的一個(gè)有效的方法。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化SP法檢測(cè)Survivin和VEGF在PCa及前列腺增生（BPH）中的表達(dá)，結(jié)合臨床資料分析Survivin和VEGF表達(dá)與腫瘤Gleason評(píng)分、轉(zhuǎn)移的關(guān)系及二者之間的相互關(guān)系，從而探索前列腺癌診斷和治療的新方法。

1 材料與方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)組（PCa組）選自內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院泌尿外科2003～2011年前列腺切除術(shù)的PCa患者40例，年齡68～80歲，平均73.5歲，組織石蠟包埋標(biāo)本經(jīng)病理檢查證實(shí)為PCa，術(shù)前均未接受任何治療，且排除其他腫瘤、血液疾病等干擾因素。PCa組Gleason評(píng)分<7 者為中低評(píng)分組（20例），Gleason評(píng)分≥7 者為高評(píng)分組（20例）；無骨轉(zhuǎn)移者25例，有骨轉(zhuǎn)移者15例。對(duì)照組（BPH組）同樣選自2003～2011年前列腺切除術(shù)的BPH患者20例，年齡58～70歲，平均64歲，經(jīng)病理檢查證實(shí)為BPH，排除其他疾病。

1.2 試劑

即用型兔抗人SURVIVIN多克隆抗體購自武漢博士德生物工程有限公司，即用型鼠抗人VEGF單克隆抗體購自福州邁新生物制品有限公司。

1.3 方法

標(biāo)本為10%福爾馬林固定，石蠟切片，HE染色和免疫組化染色。免疫組化采用SP法，按說明書操作。用PBS代表一抗作空白對(duì)照。

1.4 結(jié)果判斷

組織切片中以胞質(zhì)染為淡黃色至棕黃色者為陽性。染色強(qiáng)度：0分為無色，1分為淡黃色，2分為黃色，3分為棕黃色。陽性細(xì)胞百分比即高倍視野隨機(jī)觀察某類細(xì)胞3～5個(gè)視野，計(jì)算100個(gè)陽性細(xì)胞數(shù)平均值：陰性為0分，陽性細(xì)胞≤10%為1分，11%～50%為2分。 定性標(biāo)準(zhǔn)：著色程度評(píng)分×著色細(xì)胞百分率評(píng)分≤1 分為陰性（-），2～3 分為弱陽性（+），4～6 分為陽性（++），＞6 分為強(qiáng)陽性（+++）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。Survivin及VEGF的表達(dá)采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法。Survivin及VEGF蛋白表達(dá)相關(guān)性采用配對(duì)資料的關(guān)聯(lián)性分析。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Surviving、VEGF在BPH及PCa中的表達(dá)情況

二者具體的表達(dá)情況見圖1～2、表1～2。Survivin在BPH中不表達(dá)，在PCa中有不同程度的表達(dá)，染色位于胞質(zhì)內(nèi)，呈淡黃色至棕黃色顆粒狀（圖1）。VEGF在BPH及PCa中有不同程度的表達(dá)，彌散分布于前列腺上皮細(xì)胞的胞質(zhì)、基質(zhì)細(xì)胞和間質(zhì)；在微血管上皮細(xì)胞及其周圍基質(zhì)細(xì)胞中呈強(qiáng)陽性表達(dá)（呈黃色至棕黃色顆粒狀）（圖2）。

表1 Survivin、VEGF在PCa及前列腺癌中的表達(dá)情況（例）

2.2 Survivin、VEGF在PCa不同病理分級(jí)及骨轉(zhuǎn)移中的表達(dá)情況

具體結(jié)果見表2。

表2 Survivin、VEGF在前列腺癌不同病理分級(jí)及骨轉(zhuǎn)移中陽性率的比較（例）

2.3 Survivin與VEGF在PCa中表達(dá)的相關(guān)性分析

40例PCa標(biāo)本中，Survivin和VEGF的表達(dá)情況見表3，行Spearman等級(jí)相關(guān)分析，Survivin與VEGF在PCa中的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.378，P=0.017 ＜ 0.05）。

表3 Survivin與VEGF在前列腺癌中表達(dá)的相關(guān)性（例）

3 討論

細(xì)胞凋亡，是細(xì)胞的程序化死亡。正常機(jī)體能夠維持細(xì)胞凋亡和增殖平衡，凋亡下調(diào)或增殖過度都將增加細(xì)胞的生存壽命，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。Survivin是凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis，IAP）是目前發(fā)現(xiàn)最強(qiáng)的凋亡抑制因子，其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的主要機(jī)制是：①抑制Bax和Fas誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡；②與caspase-3 和caspase-7 的相互作用；③調(diào)節(jié)有絲分裂和胞質(zhì)分裂，參與血管生成。病理情況下，Survivin幾乎表達(dá)于所有腫瘤類型，而在正常的非惡性腫瘤細(xì)胞中則不表達(dá)。國(guó)外研究顯示Survivin蛋白在肺癌和乳腺癌細(xì)胞株中表達(dá)最高，而在腎癌中表達(dá)則最少[5]。李守賓等[6]采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)，Survivin在BPH及PCa組織中表達(dá)率分別為12.0%和82.2%，且表達(dá)強(qiáng)度與Gleason評(píng)分呈強(qiáng)正相關(guān)。這些與駱曉梅等[7]的研究結(jié)果一致。本研究顯示，BPH和PCa組織中Survivin蛋白的表達(dá)率分別為0 和87.5%，證實(shí)了Survivin在大多數(shù)惡性腫瘤中均有表達(dá)，而在成人的終末分化組織中則沒有。Survivin在中低評(píng)分組（中、高分化）及高評(píng)分組（低分化）中的表達(dá)陽性率分別為65.0%和95.0%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），Survivin在伴全身骨轉(zhuǎn)移、非骨轉(zhuǎn)移兩組中的表達(dá)率分別為87.6%和44.0%，提示Survivin的表達(dá)與PCa病理分級(jí)、骨轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，證實(shí)Survivin參與了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。

正常機(jī)體內(nèi)促血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子和抗血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子保持相對(duì)平衡，從而使人體內(nèi)的血管發(fā)生、分化。在有腫瘤生長(zhǎng)的情況下，多種致癌因素使促血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過抗血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，為腫瘤提供了優(yōu)越的生長(zhǎng)環(huán)境。在參與血管生成的眾多因子中，VEGF被證實(shí)是最強(qiáng)大和最重要的因子。人的VEGF蛋白是于1989年由Gospodarowicz發(fā)現(xiàn)，其分子量為35～44 kDa。研究表明，腫瘤組織中VEGF有過度表達(dá)情況，組織中也有大量血管新生。目前認(rèn)為PCa細(xì)胞可以誘導(dǎo)血管發(fā)生從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)展[8]。有研究發(fā)現(xiàn)VEGF的表達(dá)與PCa淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Gleason評(píng)分密切相關(guān)[9]，VEGF在PCa的形成及轉(zhuǎn)移中起著重要的作用[10]。Lekas等[11]研究發(fā)現(xiàn)，PCaVEGF表達(dá)明顯高于BPH，而且VEGF與PCa的病理分級(jí)關(guān)系密切，伴有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的PCa中VEGF表達(dá)明顯高于不伴轉(zhuǎn)移者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。本實(shí)驗(yàn)中，BPH和PCa組織中VEGF蛋白的表達(dá)率分別為35.0%和90.0%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。VEGF在PCa高、中分化即中低評(píng)分組與低分化即高評(píng)分組中的表達(dá)率分別為70%和100%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P<0.05）。VEGF在有骨轉(zhuǎn)移組及無骨轉(zhuǎn)移組中的表達(dá)率分別為72.0%和93.3%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。說明VEGF的表達(dá)與PCa病理分級(jí)及是否骨轉(zhuǎn)移有關(guān)系。據(jù)此判斷，VEGF的過度表達(dá)與PCa的發(fā)展及預(yù)后關(guān)系密切，是預(yù)后不良的重要指標(biāo)。檢測(cè)VEGF的表達(dá)可以判斷PCa的進(jìn)展及預(yù)后情況。

Survivin和VEGF已被證實(shí)在多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起到了協(xié)同作用[12]。Mesri等[13]研究發(fā)現(xiàn)Suvivin和VEGF一起參與調(diào)節(jié)腫瘤血管形成。VEGF在腫瘤血管生成過程中發(fā)揮的內(nèi)皮細(xì)胞抗凋亡作用依賴于其誘導(dǎo)的Survivin表達(dá)上調(diào)[14]。本實(shí)驗(yàn)中40例PCa組織標(biāo)本中，等級(jí)相關(guān)分析結(jié)果顯示，Survivin與 VEGF在 PCa中的表達(dá)呈正性相關(guān) （r=0.378，P<0.05）。與國(guó)內(nèi)外報(bào)道結(jié)果一致。研究進(jìn)一步證實(shí)Survivin和VEGF在PCa的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的協(xié)同作用。聯(lián)合檢測(cè)Survivin和VEGF的表達(dá)必將為評(píng)價(jià)PCa的發(fā)展和預(yù)后提供重要的理論依據(jù)。

總之，Survivin及VEGF的研究已經(jīng)取得了一些進(jìn)展，但還有很多地方是值得進(jìn)一步作深入研究。如Survivin的表達(dá)受何種調(diào)節(jié)，各種異構(gòu)體之間的關(guān)系及作用，以及Survivin在腫瘤靶向治療中的作用等。抗血管生成治療的各種機(jī)制只是假設(shè)[15]，包括可能會(huì)影響抗血管生成抑制劑療效的腫瘤相關(guān)血管內(nèi)皮細(xì)胞中的染色體異常[16-17]。這種抑制可以發(fā)生在任何促進(jìn)血管生長(zhǎng)或發(fā)展的環(huán)節(jié)中[18-19]。這包括參與下調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)或擴(kuò)散，阻止生長(zhǎng)因子受體信號(hào)或內(nèi)皮細(xì)胞特異性信號(hào)通路，及抑制血管生成的其他積極的因素。

[1] Lecellier G，Brenner C.Genomic and proteomic screening of apoptosis mitochondrial regulators for drug target discovery [J].Curr Med Chem，2007，14（8）：875-881.

[2] Shibuya M.Role of VEGF-flt receptor system in normal and tumor angiogenesis[J].Adv Cancer Res，1995，67：281-316.

[3] Maeda K，Chung YS，Ogawa Y，et al.Prognostic value of vascular endothelial growth factor expression in gastric carcinoma [J].Cancer，l996，77：858-863.

[4] Deroanne CF，Hajitou A，Calberg-Bacq CM，et al.Angiogenesis by fibroblast growth factor 4 is mediated through an autocrin up-regulation of vascular endothelial growth factor expression [J].Cancer Res，1997，57（24）：5590-5597.

[5] Caldas H，Jiang Y，Holloway MP，et al.Survivin splice variants regulate the balance between proliferation and cell death[J].Oncogene，2005，24（12）：1994-2007.

[6] 李守賓，李雙利，李連印，等.前列腺癌中 Survivin蛋白的表達(dá)[J].現(xiàn)代泌尿外科雜志，2009，14（2）：123-124.

[7] 駱曉梅，劉家云，蘇明權(quán)，等.腫瘤特異性survivin啟動(dòng)子在前列腺癌細(xì)胞中的活性鑒定[J].中華男科學(xué)雜志，2007，13（6）：502-506.

[8] Kong D，Li Y，Wang Z，et al.Inhibition of angiogenesis and invasion by 3，3′-diindolylmethane is mediated by the nuclear factor-Kappa downstream target genes MMP-9 and uPA that regulated bioavailability of vascular endothelial growth factor in prostate cancer[J].Cancer Res，2007，67（7）：3310-3319.

[9] El-Gohary YM，Sliverman JF，Olson PR，et al.Endoglin （CD105）and vascular endothelial growth factor as prognostic markers in prostatic adenocarcinoma[J].Am J Clin Pathol，2007，127（4）：572-579.

[10] Fukuda H，Tsuchiya N，Narita S，et al.Clinical implication of vascular endothelial growth factor T-460C polymorphism in the risk and progression of prostate cancer[J].Oncol Rep，2007，18（5）：1155-1163.

[11] Lekas A，Lazaris AC，Deliveliotis C，et al.The expression of hypoxiainducible factor-1alpha（HIF-1alpha）and angiogenesis markers in hyper plastic and malignant prostate tissue[J].Anticancer Res，2006，26（4）：2989-2993.

[12] 宋和存，金麗，李慧.卵巢原發(fā)痛和轉(zhuǎn)移癌組織中VEGF上調(diào)對(duì)Bcl-2和Survivin表達(dá)影響的相關(guān)性研究[J].中華腫瘤防治雜志，2008，15（5）：371-373.

[13] Mesri M，MoralesRuiz M，Ackermann EJ，et al.Suppression of vascular endothelial growth factor-mediated endothelial cell protection by Survivin targeting[J].Am J Pathol，2001，158（5）：1752-1765.

[14] O′Connor DS，Schechner JS，Adida C，et al.Control of apoptosis during angiogenesis by Survivin expression in endothelial cells [J].Am J Pathol，2000，156（2）：393-398.

[15] Kerbel RS.Tumor angiogenesis [J].N Engl J Med，2008，358：2039-2049.

[16] Hida K，Hida Y，Amin DN，et al.Tumor-associated endothelial cells with cytogenetic abnormalities[J].Cancer Res，2004，64（22）：8249-8255.

[17] Hida K，Klagsbrun M.A new perspective on tumor endothelial cells：unexpected chromosome and centrosome abnormalities[J].Cancer Res，2005，65（7）：2507-2510.

[18] Figg WD，Kruger EA，Price DK，et al.Inhibition of angiogenesis：treatment options for patients with metastatic prostate cancer [J].Invest New Drugs，2002，20（2）：183-194.

[19] Epstein RJ.VEGF signaling inhibitors：More pro-apoptotic than antiangiogenic[J].Cancer Metastasis Rev，2007，26（3-4）：443-452.