段學(xué)輝,胡明明,熊福星,吳 量,陳加利,王 娟
(南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,生命科學(xué)與食品工程學(xué)院,江西南昌330047)
稻草粉基混合菌發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶研究
段學(xué)輝,胡明明,熊福星,吳 量,陳加利,王 娟
(南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,生命科學(xué)與食品工程學(xué)院,江西南昌330047)
以稻草粉為主要原料,對(duì)白腐菌(White-rot fungi)NS75和黑曲霉(Aspergillus niger)NS83進(jìn)行固態(tài)混合發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶進(jìn)行研究?;旌暇虘B(tài)發(fā)酵與單菌固態(tài)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較表明,混合菌發(fā)酵產(chǎn)生的纖維素酶總體酶活明顯高于單菌種發(fā)酵,其β-葡萄糖苷酶(β-G)酶活較白腐菌NS75單菌發(fā)酵提高了120.9%;葡聚糖內(nèi)切酶(CMC)酶活比黑曲霉NS83單菌發(fā)酵提高了140.8%。單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,當(dāng)?shù)静莘埯熎べ|(zhì)量比為9∶1,料水比為1∶2,白腐菌NS75與黑曲霉NS83的接種比例為1∶1(v∶v)時(shí),培養(yǎng)第3d開(kāi)始攪拌,每天攪拌一次,于30℃,培養(yǎng)5d,稻草粉基混合菌發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶中CMC酶活達(dá)到16650U/g,β-G酶活為16108U/g、濾紙酶活(FPA)酶活為3164U/g。
混合菌發(fā)酵,固態(tài)發(fā)酵,CMC酶,β-G酶,稻草粉
Abstract:Straw powder was used as the raw material,the solid fermentation conditions of cellulases production by mixed strains of White-rot fungi NS75 and Aspergillus niger NS83 had been investigated.The results of comparative experiments between single strain solid-state fermentation and mixed strains solid-state fermentation showed that,the cellulose enzyme activity produced by mixed strains had increased obviously than that produced in single strain solid-state fermentation,in which,the β-G enzyme activity had increased 120.9%than that produced by White-rot fungi NS75 single fermentation,and the CMC enzyme activity had increased 140.8%than that produce by Aspergillus niger NS83 single fermentation.According to the single factor and orthogonal experiment results the optimum fermentation conditions were determined as follows:ratio between straw powder and bran powder 9∶1,feed-water ratio 1∶2,inoculation volume ratio of White-rot fungi NS75 and Aspergillus niger NS83 1∶1(v∶v),start stirring on the third day and once a day,30℃ culture 5d.Under this conditions,the enzyme activity of CMC enzyme,β-G enzyme,F(xiàn)PA enzyme produced had reached respectively 16650,16108 and 3164U/g.
Key words:mixed strains fermentation;solid state fermentation;CMC enzyme;β-G enzyme;straw powder
稻草秸稈等生物質(zhì)是被丟棄量最大的有機(jī)原料。植物細(xì)胞壁的主要成分是纖維素,其占植物秸稈干重的33%~50%。使用可再生木質(zhì)纖維素資源生產(chǎn)乙醇能增加資源的利用率,降低環(huán)境污染,減少二氧化碳排放[1-3]。使用纖維素酶水解木質(zhì)纖維素生物轉(zhuǎn)化成乙醇技術(shù)的關(guān)鍵點(diǎn)在于纖維素酶的生產(chǎn)成本和催化活性。一般生產(chǎn)用纖維素酶是一個(gè)復(fù)合酶系,它包括:纖維二糖水解酶(cellobiohydrolases,CBH)(1,4-β-D-葡聚糖纖維二糖水解酶,EC 31211191);葡聚糖內(nèi)切酶(endoglucanases,EG)(1,4-β-D-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶,EC 3121114);β-葡萄糖苷酶(β-glucosidases,β-G)或(β-D-葡萄糖苷葡萄糖水解酶,EC 31211121)[4-5]。不同生物質(zhì)纖維素的結(jié)構(gòu)復(fù)雜,其水解需要復(fù)合酶的共同作用[6-7]。目前采用單菌發(fā)酵生產(chǎn)的纖維素酶存在酶系的不完整和個(gè)別酶活低的缺陷。如黑曲霉(Aspergillus niger)[8]發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶中內(nèi)切纖維素酶活性低。因此,多菌種混合發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶已逐漸引起研究者關(guān)注[9]。本研究使用實(shí)驗(yàn)室保存的兩株纖維素酶產(chǎn)生菌—白腐菌(Whiterot fungi)NS75和黑曲霉(Aspergillus niger)NS83,在稻草粉為主要培養(yǎng)基上固態(tài)混合菌發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶,考察了混合發(fā)酵的培養(yǎng)條件、纖維素酶產(chǎn)量和主要酶種活力。
白腐菌(White-rot fungi)NS75、黑曲霉(Aspergillus niger)NS83 南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室分離保藏;稻草 取于南昌農(nóng)田,粉碎過(guò)30目,高壓滅菌鍋高溫處理2h,烘干保存待用;硫酸銨、磷酸氫二鉀、磷酸氫二鈉、無(wú)水亞硫酸鈉、酒石酸鉀鈉、葡萄糖 分析純,天津市大茂化學(xué)試劑廠;羧甲基纖維素鈉、水楊苷、3,5-二硝基水楊酸 化學(xué)純,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;苯酚、七水合硫酸鎂、七水合亞硫酸鐵、一水合硫酸錳、六水合氯化鈷 分析純,廣東汕頭市西隴化工廠;檸檬酸、無(wú)水氯化鈣 分析純,上海試劑一廠。
MJPS-250型霉菌培養(yǎng)箱、DXB-501型超級(jí)恒溫水槽 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;KA-1000型低速離心機(jī) 上海安亭儀器廠;XSB-01型生物顯微鏡國(guó)營(yíng)江西儀器總廠;AL104型電子分析天平 瑞士Mettler Toledo公司;756PC型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)上海光譜儀器有限公司;DSX-280A型不銹鋼手提式滅菌鍋 上海申安醫(yī)療器械廠;BHC-1300ⅡA/B3型生物安全柜 蘇靜集團(tuán)安泰公司;DSHZ-300多用途水浴恒溫振蕩器 江蘇太倉(cāng)市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠。
1.2.1 溶液及培養(yǎng)基的配制
1.2.1.1 3,5-二硝基水楊酸(DNS)溶液 稱取DNS 6.3g于500mL燒杯中,用少量蒸餾水溶解后,加入2mol/L NaOH溶液262mL,再加到500mL、0.645mol/L酒石酸鉀鈉的熱水溶液中,再加5.0g結(jié)晶酚和5.0g無(wú)水亞硫酸鈉,攪拌溶解,冷卻后移入容量瓶中用蒸餾水定容至1000mL,充分混勻,貯于棕色瓶中,室溫放置1周后使用。
1.2.1.2 羧甲基纖維素溶液 稱取2.0g羧甲基纖維素鈉鹽置于200mL蒸餾水中,沸水浴中攪拌溶解,過(guò)濾,取濾液150mL,加檸檬酸緩沖液30mL以及蒸餾水60mL,混勻,貯存于冰箱中備用。
1.2.1.3 1%的水楊苷溶液 準(zhǔn)確稱取1.0g水楊苷,加入適量的pH為5.0的檸檬酸緩沖液溶解,再使用蒸餾水定容至100mL。
1.2.1.4 Mandels[10]營(yíng)養(yǎng)液 (NH4)2SO41.4g/L,KH2PO42.0g/L,(H2N)2CO 0.3g/L,CaCl20.3g/L MgSO4·7H2O 0.3g/L,F(xiàn)eSO4·7H2O 5.0mg/L,MnSO4·H2O 1.6mg/L,ZnSO4·7H2O 1.4mg/L,CoCl2·6H2O 2.0mg/L。
1.2.1.5 培養(yǎng)基 種子培養(yǎng)基:Mandels營(yíng)養(yǎng)液50mL加入1%的葡萄糖和0.5%硫酸銨。固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基稻草8g,麩皮2g,營(yíng)養(yǎng)液20mL。
1.2.2 固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng) 將在斜面上培養(yǎng)3~5d的白腐菌和黑曲霉菌,分別制成約107個(gè)/mL的孢子懸浮液。分別取1mL接于50mL液體種子培養(yǎng)基中,于30℃、150r/min培養(yǎng)24h,單菌發(fā)酵各菌分別接種2mL于250mL的廣口瓶固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中,混合菌發(fā)酵則保持接種總量2mL,白腐菌∶黑曲霉按2∶1比例接于固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中,攪拌均勻,30℃恒溫培養(yǎng)5~7d,單因素實(shí)驗(yàn)每組3個(gè)平行。
1.2.3 粗酶液的制備 均勻地取1.0g物料加入10倍的檸檬酸緩沖液,攪拌均勻,在搖床上浸提1h,然后3500r/min,離心20min,取上清液,于4℃冰箱保存,備用。另取1.0g物料在45℃干燥至恒重,測(cè)得的酶活除以干重即為固態(tài)發(fā)酵底物的酶活,其單位為U·g-1干曲。
1.2.4 酶活力測(cè)定方法 CMC酶活和FPA酶活測(cè)定參考顏淑芳等文獻(xiàn)[11-12]。
β-G酶活測(cè)定參考蘇香萍等[13]的方法加以改進(jìn):取1mL的酶液加入到2mL、1%的水楊苷檸檬酸緩沖液中,50℃水浴保溫30min,DNS法測(cè)定還原糖含量。
酶活單位定義:上述反應(yīng)條件下,1min水解底物生成1μg葡萄糖的酶量定義為1個(gè)酶活單位,換算成每克干物料含有的酶活,以U/g表示。
1.2.5 單菌與混合菌發(fā)酵產(chǎn)酶對(duì)比實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 分別將白腐菌孢子液、黑曲霉孢子液接入到裝有10g稻草粉麩皮發(fā)酵培養(yǎng)基,容積為250mL的廣口瓶中。接種量均為2mL,混合菌發(fā)酵則白腐菌∶黑曲霉按2∶1比例接種。于培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng),發(fā)酵7d,分別測(cè)CMC酶、FPA酶和β-G酶活。
1.2.6 單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
1.2.6.1 稻草粉麩皮質(zhì)量比對(duì)混合菌發(fā)酵產(chǎn)酶的影響 實(shí)驗(yàn)保持固態(tài)培養(yǎng)基中麩皮與稻草總量10g,稻草粉與麩皮質(zhì)量百分比為4∶0、3∶1、2∶2、1∶3、0∶4,接種總量2mL,白腐菌∶黑曲霉按2∶1接種,發(fā)酵5d測(cè)酶活。
1.2.6.2 培養(yǎng)基料水比對(duì)混合菌發(fā)酵產(chǎn)酶的影響 在固料為10g的基礎(chǔ)上,料水比按1∶1、1∶1.5、1∶2、1∶2.5、1∶3的比例加入Mandels營(yíng)養(yǎng)液,混合均勻,接種。30℃恒溫培養(yǎng)5d測(cè)酶活。
1.2.6.3 發(fā)酵過(guò)程中攪拌對(duì)混合菌發(fā)酵產(chǎn)酶的影響
實(shí)驗(yàn)按以下5種方式進(jìn)行。a:不攪拌;b:只第2d攪拌;c:從第2d開(kāi)始攪拌,每天攪拌一次;d:從第3d開(kāi)始攪拌,每天攪拌一次;e:第4d攪拌。攪拌方式為用無(wú)菌鐵勺在超凈臺(tái)上對(duì)培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基進(jìn)行攪拌,每次攪拌2min。培養(yǎng)5d測(cè)酶活。
1.2.6.4 混合菌接種比對(duì)發(fā)酵產(chǎn)酶的影響 實(shí)驗(yàn)保持接種總量2mL不變,白腐菌NS75∶黑曲霉NS83比例按3∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶3五個(gè)比例考查混合菌接種比例對(duì)產(chǎn)酶的影響。
1.2.7 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,對(duì)料水比、稻草粉含量、攪拌方式和混合菌接種比例進(jìn)行4因素3水平正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn),分別測(cè)定CMC酶活、β-G酶活、FPA酶活,最終以CMC酶活為考察指標(biāo)優(yōu)化產(chǎn)酶條件,正交設(shè)計(jì)因素水平表見(jiàn)表1。
表1 正交實(shí)驗(yàn)因素水平表Table 1 Factors and levels table of orthogonal test
單菌和混合菌發(fā)酵產(chǎn)酶情況如圖1~圖3所示。
由圖1可知,白腐菌(White-rot fungi)NS75具有較高的產(chǎn)CMC酶能力,并且在培養(yǎng)第5d酶活達(dá)到高點(diǎn)10400U/g,但其產(chǎn)β-G酶能力較弱,酶活為5311U/g。從圖2可知,黑曲霉(Aspergillus niger)NS83產(chǎn)β-G酶能力較強(qiáng),培養(yǎng)5d酶活達(dá)到10706U/g,但產(chǎn)CMC酶較弱,酶活只有4790U/g。白腐菌NS75與黑曲霉NS83混合發(fā)酵的圖3結(jié)果表明,其CMC酶活和β-G酶活都比較高,在培養(yǎng)第5d酶活分別達(dá)到11533、11730U/g。相較單菌發(fā)酵,混合發(fā)酵產(chǎn)生的纖維素酶酶系全,酶活更高,其原因可能是混合發(fā)酵,兩株菌之間纖維素酶酶系互補(bǔ),各組分酶的底物反饋抑制作用也相應(yīng)減弱,使得各菌處于有利的環(huán)境下生長(zhǎng)代謝產(chǎn)酶。
圖1 白腐菌NS75的產(chǎn)酶曲線Fig.1 Curve of enzyme production from White-rot fungi NS75 fermentation
圖2 黑曲霉NS83的產(chǎn)酶曲線Fig.2 Curve of enzyme production from Aspergillus niger NS83 fermentation
圖3 白腐菌NS75與黑曲霉NS83混合發(fā)酵產(chǎn)酶曲線Fig.3 Curve of enzyme production from White-rot fungi NS75 and Aspergillus niger NS83 mixed fermentation
由圖4可知,完全加稻草粉或完全加麩皮粉的產(chǎn)酶情況不如稻草粉與麩皮粉混合時(shí)產(chǎn)酶情況好,稻草粉和麩皮混合添加時(shí),混合菌產(chǎn)酶能力較強(qiáng)。其原因與稻草粉和麩皮的成分有關(guān),麩皮中含有淀粉酶、氧化酶、過(guò)氧化氫酶等、蛋白質(zhì)、碳水化合物、維生素和礦物質(zhì)等[14],這些物質(zhì)都促進(jìn)菌體的生長(zhǎng);稻草主要有果膠、木質(zhì)素、半纖維素、纖維素、灰分和粗蛋白等物質(zhì)[15],菌體不能很好的利用這些物質(zhì),但其中的纖維素卻能誘導(dǎo)菌體產(chǎn)生纖維素酶。少量的麩皮有利于前期菌體生長(zhǎng),大量稻草誘導(dǎo)菌體中后期產(chǎn)酶,當(dāng)?shù)静菖c麩皮質(zhì)量比為3∶1時(shí),混合菌產(chǎn)酶能力較高,CMC酶活達(dá)到135234U/g,β-G酶活達(dá)到13086U/g,F(xiàn)PA酶活達(dá)到2650U/g。
圖4 稻草與麩皮的質(zhì)量比對(duì)產(chǎn)酶的影響Fig.4 Effect of different ratio between rice straw and wheat bran on enzyme activity
固態(tài)發(fā)酵中,培養(yǎng)基中的含水量是一個(gè)重要參數(shù),本次實(shí)驗(yàn)考查含水量對(duì)混合菌發(fā)酵產(chǎn)酶的影響。由圖5可知,當(dāng)料水比為1∶2時(shí),混合菌產(chǎn)酶效果較好,說(shuō)明混合菌發(fā)酵產(chǎn)酶過(guò)程中,濕度會(huì)影響菌體的生長(zhǎng),孢子的形成以及酶的產(chǎn)生,水分過(guò)少或過(guò)多都不利。
圖5 培養(yǎng)基料水比對(duì)產(chǎn)酶的影響Fig.5 Effect of different feed-water ratio on enzyme activity
實(shí)驗(yàn)對(duì)固態(tài)發(fā)酵中基質(zhì)的混勻,菌的分散對(duì)發(fā)酵產(chǎn)酶的影響進(jìn)行了考查。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖6所示。從圖6可以看出,攪拌方式d和攪拌方式c發(fā)酵所產(chǎn)纖維素酶酶活較高;與攪拌方式a和b相比,c和d攪拌次數(shù)多,物料和菌體分散更均勻,培養(yǎng)基中氧的含量也隨攪拌增多,有利于混合菌的生長(zhǎng)和產(chǎn)酶;攪拌方式e由于攪拌太晚,菌體可能已經(jīng)到了生長(zhǎng)和產(chǎn)酶中后期,所以效果不明顯;攪拌方式c和d比較,方式d保證菌體具有足夠的時(shí)間適應(yīng)環(huán)境和前期生長(zhǎng)繁殖,而方式c攪拌開(kāi)始時(shí)菌體可能還未適應(yīng)環(huán)境,菌體生長(zhǎng)和菌絲體形成受到攪拌影響菌,因此方式c培養(yǎng)不如方式d培養(yǎng)產(chǎn)酶效果好。
圖6 不同的攪拌方式對(duì)產(chǎn)酶的影響Fig.6 Effect of different stirring modes on enzyme activety
結(jié)果如圖7所示。從圖7中可以看出,白腐菌NS75主導(dǎo)CMC酶生產(chǎn),黑曲霉NS83主要產(chǎn)β-G酶,隨著黑曲霉NS83接種比例的增加,混合菌發(fā)酵產(chǎn)β-G酶活明顯上升,但CMC酶酶活下降,綜合考慮白腐菌NS75∶黑曲霉NS83的接種比為1∶1時(shí)產(chǎn)酶的酶系組成較好。
圖7 混合菌接種比例對(duì)產(chǎn)酶的影響Fig.7 Effect of different White-rot fungi NS75 and Aspergillus niger NS83 ratio on enzyme activity
在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,對(duì)料水比、稻草粉含量、攪拌方式和混合菌接種比例進(jìn)行4因素3水平正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn),分別測(cè)定CMC酶活、β-G酶活、FPA酶活。鑒于CMC酶為纖維素酶系中的主要組分,且能夠有效地表達(dá)發(fā)酵產(chǎn)酶效果,實(shí)驗(yàn)選擇以CMC酶活為考察指標(biāo)進(jìn)行產(chǎn)酶條件優(yōu)化,正交設(shè)計(jì)見(jiàn)表1,正交實(shí)驗(yàn)及結(jié)果見(jiàn)表2。
表2 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 2 Results of orthogonal experiment
從表2中9組實(shí)驗(yàn)的CMC酶直觀分析結(jié)果可以看出,混合菌固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)酶最優(yōu)實(shí)驗(yàn)組為第2組,即稻草粉麩皮質(zhì)量比為9∶1,料水比為1∶2,從培養(yǎng)第3d開(kāi)始攪拌,每天攪拌1次,菌種比為1∶1,與極差分析得到的優(yōu)化組合A1B2C2D2相一致,這個(gè)組合下CMC酶活達(dá)到16650U/g。各培養(yǎng)條件對(duì)混合菌產(chǎn)酶的影響順序?yàn)椋簲嚢璺绞剑玖纤龋镜静莺浚揪N比。由表3可以看出,攪拌方式(C)對(duì)混合菌產(chǎn)酶的影響顯著,這可能是因?yàn)閿嚢枋沟霉虘B(tài)培養(yǎng)基中的含氧量增大,菌體、水分的分散更加均勻,因此在固態(tài)發(fā)酵過(guò)程中應(yīng)該設(shè)法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行間隙攪拌。
表3 正交實(shí)驗(yàn)方差分析表Table 3 Variance analysis of orthogonal experiment
選擇稻草麩皮質(zhì)量比為9∶1,料水比為1∶2,從培養(yǎng)第3d開(kāi)始攪拌,每天攪拌1次,接種比為1∶1固態(tài)混合發(fā)酵條件,對(duì)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證,三組平行實(shí)驗(yàn)的CMC酶活分別為16685、16723和16628U/g,平均值為16679U/g,與正交實(shí)驗(yàn)直觀分析所得最優(yōu)條件所得值16650U/g十分接近。
單菌發(fā)酵和混合菌發(fā)酵實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較表明,采用雙菌種混合發(fā)酵產(chǎn)生的纖維素酶酶系全且酶活更高,相比于白腐菌NS75單菌發(fā)酵產(chǎn)生的CMC酶活10400U/g、β-G酶活5311U/g和FPA酶活2123U/g,混合菌發(fā)酵產(chǎn)生的CMC酶活達(dá)到11533U/g,β-G酶活達(dá)到11730U/g,F(xiàn)PA酶活達(dá)到2483U/g,分別提高了約10.9%、120.9%和17.0%;相比于黑曲霉NS83單菌發(fā)酵產(chǎn)生的CMC酶活4790U/g、β-G酶活10706U/g和FPA酶活2221U/g,混合菌發(fā)酵CMC酶活提高了140.8%,β-G酶活提高了9.6%,F(xiàn)PA酶活提高了11.8%。
在優(yōu)化發(fā)酵條件:稻草與麩皮質(zhì)量比為9∶1,料水比(W發(fā)酵物料∶W營(yíng)養(yǎng)鹽液)為1∶2,菌種白腐菌NS75與黑曲霉NS83的接種比例為1∶1(v∶v),從培養(yǎng)第3d開(kāi)始攪拌,每天攪拌一次,培養(yǎng)5d,白腐菌NS75與黑曲霉NS83固態(tài)混合發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的CMC酶活達(dá)到16650U/g,β-G酶活為16108U/g、FPA酶活為3164U/g,比初始條件下混合發(fā)酵產(chǎn)酶的酶活分別提高了44.4%、37.3%和27.4%。
[1]Wyman C E.Ethanol from lignocellulosic biomass:technology,economics,and opportunities[J].Bioresource Technol,1994,50(1):3-16.
[2]劉潔麗,王靖.生物產(chǎn)纖維素酶研究進(jìn)展[J].化學(xué)與生物工程,2008,25(21):9-12.
[3]Lynd L R,Cushman J H,Nichols R J,et al.Fuel ethanol from cellulosic biomass[J].Science,1991,251:1318-1323.
[4]Holker U,Hofer M,Lenz J.Biotechnological advantages of laboratoryscalesolid statefermentation with fungi[J].Appl Microbiol Biotechnol,2004,64(2):175-186.
[5]Esterbauer H,Steiner W,Labudova I,et al.Production of Trichoderma cellulase in laboratory and pilot scale[J].BioresourceTechnol,1991,36(1):51-65.
[6]陳合,余建軍,舒國(guó)偉,等.復(fù)合酶降解高溫蒸煮玉米秸稈的飼料化研究[J].食品工業(yè)科技,2010(12):176-178,181.
[7]莊童琳,李虎,郭鳳霞,等.黑曲霉固態(tài)混菌發(fā)酵蘋果渣生產(chǎn)多酶生物飼料[J].食品工業(yè)科技,2010(12):171-175.
[8]陳娜,顧金剛,徐鳳花,等.產(chǎn)纖維素酶真菌混合發(fā)酵研究進(jìn)展[J].中國(guó)土壤與肥料,2007(4):16-21.
[9]鄒水洋,吳清林,肖凱軍,等.康寧木霉與米根霉混合發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶和木聚糖酶的研究[J].河南工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2009,30(3):69-73.
[10]Mandels M,Weber J,Pariaek R.Enhanced cellulase production by a mutant ofTrichoderm aviride[J].Applied Microbiology,1971,21(1):152-154.
[11]段學(xué)輝,顏淑芳,彭云召,等.響應(yīng)面法優(yōu)化灰綠青霉Penicillium glaucum NS16產(chǎn)酶條件[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào),2010,29(3):464-470.
[12]張瑞萍.纖維素酶的濾紙酶活和CMC酶活的測(cè)定[J].印染助劑,2002,19(5):51-53.
[13]蘇香萍,龔大春,陳國(guó)華,等.混合菌固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶條件的研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2010,12(21):3330-3331.
[14]江暉,何珣.小麥麩皮功能性成分的研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,39(2):834-835.
[15]湯麗琳,夏先林,張麗,等.不同處理方法對(duì)稻草營(yíng)養(yǎng)成分影響研究[J].草業(yè)科學(xué),2002,19(7):16-29.
Cellulases produced by mixed strains fermentation in straw powder
DUAN Xue-hui,HU Ming-ming,XIONG Fu-xing,WU Liang,CHEN Jia-li,WANG Juan
(State Key Laboratory of Food Science and Technology,School of Life Science and Food Enginerring,Nanchang University,Nanchang 330047,China)
TS201.2+5
A
1002-0306(2012)16-0224-05
2012-01-12 *通訊聯(lián)系人
段學(xué)輝(1958-),男,博士,教授,研究方向:食品生物技術(shù)、綠色化工技術(shù)。